应用基因芯片检测动物性食品中主要致病菌   总被引：5，自引：0，他引：5  

王金玲  曹际娟  乔洪伟  韩俊友  王芳  贾雁  于凤琴  韩文瑜 《中国兽医学报》2007,27(4):485-489

依据16SrDNA、23SrDNA上的恒定区和可变区设计7种致病菌的通用引物和特异性寡核苷酸探针，并对探针5’端进行氨基化修饰进行基因芯片共价结合，然后优化杂交反应液、芯片点样及后处理程序，研制出一种可同时检测动物性食品中7种主要致病菌的基因芯片。结果表明，7种致病菌的基因芯片杂交检测灵敏度可达10^2cfu／g，与经典传统检测方法及分子生物学、免疫学方法相比该方法特异性强，准确率高，可同时检测动物性食品中7种致病菌。  相似文献   

SYBR(R) Green Ⅰ实时荧光PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系     

邱驰  董薇  曹际娟  段玉玺 《沈阳农业大学学报》2007,38(4):568-571

根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR(R)Green Ⅰ实时PCR方法.同时针对油菜FatA基因设计出内源基因.结果表明:应用实时PCR技术,利用SYBR(R)Green Ⅰ染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2(±0.5).SYBR(R) Green Ⅰ实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法.  相似文献   

SYBR Green Ⅰ实时PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系     

于莉熊国华  刘志恒曹际娟 《安徽农业科学》2007,35(10):3010-3011,3138

利用特殊性引物，应用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术鉴定检测了商业化种植的转基因油菜RT73品系。结果表明，应用实时PCR技术，利用SYBR GreenⅠ染料能选择性结合双链DNA的特点，可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号，且通过溶解曲线确定其熔点值为（80．2±0．5）℃，而对其他油菜品系则检测不到荧光信号。SYBR GreenⅠ实时PCR能通过溶解曲线有效地区分了特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体，是基因鉴定检测的新方法。  相似文献   

SYBR Green I实时荧光PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系     

邱驰 董薇曹际娟  段玉玺 《沈阳农业大学学报》2007,38(4):568-571

根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明：应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2（±0.5）。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。  相似文献   

PCR－核酸试纸条法快速检测鸽子源性成分     

田卓  曹际娟  崔妍  赵良娟  李宗梦 《安徽农业科学》2016,44(20)

[目的]提高动物源性成分检测效率,建立PCR-核酸试纸条快速检测技术体系。[方法]针对物种特异性DNA序列,设计并标记引物;建立并优化PCR反应体系;利用通用核酸试纸条进行结果判读。[结果]试验表明,PCR-核酸试纸条特异性高;绝对灵敏度为0.001 3 ng/μL,混合样品,实际灵敏度为0.01%;加工处理样品,实际灵敏度为0.1%;最低检测限检出率为100%,稳定性良好。[结论]综上,PCR-核酸试纸条方法是一种既有PCR反应的高灵敏度,又具有免疫学检测的特异性好的特点,同时操作简便的快速检测方法。  相似文献   

虎制品的SYB RGreen Ⅰ实时荧光PCR特异性鉴定   总被引：3，自引：0，他引：3  

徐君怡  曹际娟  王长文  王秋艳 《东北林业大学学报》2010,38(10)

针对虎线粒体细胞色素b(Cyt b)基因设计特异性引物,建立并优化SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测鉴定体系。利用该体系分别对从虎(东北虎、孟加拉虎、印支虎)和狮、豹、熊等13种非虎哺乳动物的肌肉、血液、毛发和肉骨粉中提取的DNA进行鉴定分析。结果表明:虎血液、毛发和肌肉DNA样本均出现特异性的实时扩增曲线,平均熔解温度在(83.8±0.1)℃。狮、豹、熊等13种非虎哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。检测灵敏度可达到在骨粉中检出质量分数为0.05%的虎源性成分。SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复性好等特性,可用于虎制品的检测鉴定。  相似文献   

多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐君怡  曹际娟  郑秋月  裴轶君  于珂 《中国预防兽医学报》2009,31(3)

本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法.以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt真基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的mPCR体系,扩增产物分别为287 bp、159 bp和173 bp.采用22株细菌验证了该mPCR具有特异性.mPCR检测的灵敏度在DNA水平上达到空肠弯曲菌10pg/μL、结肠弯曲菌1 pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24 h即可被检出.在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性,7份样品为结肠弯曲菌阳性.本研究建立的mPCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测.  相似文献   

变性高效液相色谱高通量检测动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌   总被引：5，自引：0，他引：5  

曹际娟  徐君怡  孙哲平  郑慧芳  裴轶君  赵昕  郑秋月 《饲料工业》2008,29(14)

应用复合PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术,通过通用增菌培养,建立动物源性饲料中沙门氏菌和志贺氏菌的快速高通量检测方法.根据沙门氏菌和志贺氏菌特异基因序列分别设计特异性引物,复合PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测.以49株参考菌株做特异性试验,并开展了精密度检测试验.试验结果表明,该方法具有很好的特异性和精密度,经通用增菌和复合PCR-DHPLC技术可同时检测饲料中的沙门氏菌和志贺氏菌.该方法可以快速、准确、高通量检测,是动物源性饲料中致病菌高通量检测的新技术.  相似文献   

SYBR~ GreenI实时PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系     

于莉  熊国华  刘志恒  曹际娟 《安徽农业科学》2007,(10)

利用特殊性引物,应用SYBR Green I实时PCR技术鉴定检测了商业化种植的转基因油菜RT73品系。结果表明,应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为(80.2±0.5)℃,而对其他油菜品系则检测不到荧光信号。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分了特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是基因鉴定检测的新方法。  相似文献   

SYBR(R)Green I实时PCR鉴定检测转基因油菜RT73品系     

于莉  熊国华  刘志恒  曹际娟 《安徽农业科学》2007,35(10):3010-3011,3138

利用特殊性引物,应用SYBR(R) Green I实时PCR技术鉴定检测了商业化种植的转基因油菜RT73品系.结果表明,应用实时PCR技术,利用SYBR(R) Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为(80.2±0.5)℃,而对其他油菜品系则检测不到荧光信号.SYBR(R) Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分了特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是基因鉴定检测的新方法.  相似文献