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本文旨在分析旋毛虫二肽基肽酶1（dipeptidyl-peptidase 1，Dpp1）在体外对大鼠外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）增殖、迁移、凋亡以及一氧化氮（NO）分泌和吞噬功能的影响。根据GenBank中旋毛虫Dpp1基因序列设计一对特异性引物，RT-PCR获得该基因，将其亚克隆到pET-32a原核表达载体，IPTG诱导后获得重组蛋白rDpp1。将大鼠PBMCs与rDpp1共孵育，用间接免疫荧光试验（IFA）分析rDpp1与大鼠PBMCs的结合情况，分析不同质量浓度（10、20、40 μg·mL-1）的rDpp1对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。结果表明，40 μg·mL-1rDpp1极显著促进PBMCs增殖；10 μg·mL-1rDpp1能显著促进PBMCs迁移，而20及40 μg·mL-1时表现极显著的促进；20与40 μg·mL-1rDpp1极显著促进PBMCs分泌NO；10 μg·mL-1rDpp1能显著促进PBMCs的吞噬功能，而20及40 μg·mL-1时表现极显著的促进；各质量浓度蛋白均极显著地促进PBMCs的凋亡。旋毛虫二肽基肽酶1在体外能通过多种途径影响大鼠外周血单个核细胞，对调节宿主免疫应答有一定的促进作用。 相似文献
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本研究旨在探明鸡(Gallus gallus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子(B分子)中与恒定链(invariant chain,Ii)结合的活性片段,以了解和深入研究Ⅱ类分子与Ii在递呈抗原肽中的作用机理.从实验室保存的B-LB基因的cDNA克隆了3个结构片段分别插入原核和真核表达质粒,再将其分别转染或者与li共转染工程菌Rosetta (DE3),诱导表达后先后用亲和层析和拉下法(pull-down)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测其纯度和形成的复合物.然后用免疫印迹(Western blot)验证复合物的性质以及真核表达验证这些片段在细胞内的表达和定位.首先,构建的3个重组质粒pGEX-4T-1-B-LB-Sβ1、pGEX-4T-1-B-LB-β1和pGEX-4T-1-B-LB-β2TC均能单一表达目的蛋白B-LB-Sβ1、B-LB-β1和B-LB-β2TC,并被纯化.其次,在共表达和pull-down中,B-LB-Sβ1和B-LB-β1能够与Ii形成复合物,而B-LB-β2TC不能与Ii结合,因为免疫印迹的结果表明,特异性抗体能识别在poll-down中被结合的这两个目的蛋白.最后在真核表达系统中,也证实B-LB-Sβ1、B-LB-β1能保持B-L分子在293T细胞的浆膜系统定位的功能,而B-LB-β2TC却丧失了该定位功能.本研究结果首次提供了Ⅱ类分子结合Ii的活性片段的证据. 相似文献
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