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大脑皮质神经元培养中胰蛋白酶消化分离技术的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
为探讨大脑皮质神经元培养中胰蛋白酶消化分离法的最佳条件, 取新生大鼠大脑皮质组织,在不同的胰蛋白酶消化条件下分离培养神经元,通过细胞形态观察以及染色计数比较不同消化条件对神经元活性的影响。结果表明,0.25%胰蛋白酶,37℃,5 min消化分离的神经元活性较好,细胞产率也较高。在新生大鼠大脑皮质神经元培养时,采用0.25%胰蛋白酶,37℃,5 min可消化分离到单层、生长活性较好的神经元。 相似文献
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以能值理论方法为手段,从资源的投入和输出结构角度,对广东省惠州市惠阳区典型水稻种植户的耕牛和小型拖拉机这两种典型的农业驱动力产出系统的转化与生产效率,环境负载和可持续性进行比较分析与评价。研究表明:耕牛系统在单位面积水稻田上消耗的不可更新资源量是拖拉机系统的4.57倍;人力能值消耗是拖拉机系统的6.14倍。相对于拖拉机动力,耕牛产出动力处于较低的能量等级,其环境负载率(ELR)仅是拖拉机系统的24%,可持续能值指标(ESI)是拖拉机系统的4.25倍,但有巨大的优化空间和可能。而广东小型拖拉机系统产出驱动力的使用效率则稍高于典型65 kW拖拉机系统。从提高能值效率角度分析,减少耕牛系统生产过程中过多的人力投入,着力提高耕牛系统产出驱动力的利用效率比发展小型拖拉机系统更有潜力。生产过程中的人力投入和使用过程中的维护投入是农机驱动力产出系统不可忽视的能值投入项。 相似文献
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为建立用于兔出血症病毒2型(RHDV2)的快速检测方法,根据GenBank已公布的RHDV和RHDV2 VP60基因,设计合成2对特异性引物和10条末端重叠引物,通过重叠PCR 人工合成RHDV2 VP60基因中保守区片段,构建重组质粒,并以其为模板,经过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和35份样品检测应用,初步建立RHDV2 RT-PCR检测方法。实验成功合成RHDV2 VP60基因的435 bp保守片段并构建了pMD-19T-RHDV2重组质粒, 初步建立的RHDV2 RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,RHDV2的检测限度可达到230个拷贝的靶基因片段,检测RHDV、pGM-T-EBHSV(已构建)、兔巴氏杆菌、兔源大肠埃希菌和沙门氏菌均无特异性扩增,样品检测结果显示样品中RHDV2核酸阴性。该研究为中国及时进行RHDV2的防控提供技术储备。 相似文献
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PrP106-126诱导的神经毒性机制仍不清楚。作者以小鼠成神经瘤细胞N2a为细胞模型,应用WesternBlot方法首次发现PrP106-126导致核转录因子NF-κB的亚单位p65蛋白转移到细胞核内,激活了NF-κB细胞信号分子。转核抑制剂NF-κB SN50预处理细胞减弱了PrP106-126诱导的NF-κB激活程度;并且DNA Ladder凋亡检测及Annexin V-FITC和PI双染流式细胞凋亡检测发现,NF-κB SN50能够抑制p65蛋白转核,在一定程度上也抑制了PrP106-126对N2a细胞的神经毒性效果。结果表明NF-κB信号分子参与了PrP106-126的神经毒性,且NF-κB信号分子的激活对N2a细胞具有促凋亡作用。PrP106-126激活N2a细胞NF-κB信号分子以及NF-κB促凋亡功能的体外研究对于阐明朊病毒病致病机理具有重要意义。 相似文献
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溶菌酶是一种天然抗菌剂,能直接水解细菌细胞壁发挥抑菌作用,但溶菌酶仅对革兰氏阳性菌有抑菌活性的特性限制了其在食品和养殖业中的应用。溶菌酶是一种小分子蛋白质,越来越多的研究通过对溶菌酶进行改造和修饰提高了其抑菌活性并扩大了抑菌谱。笔者主要综述了溶菌酶在使用温度、pH、金属离子、化学修饰、与纳米材料结合、与其他溶液复配和利用基因工程技术等条件改造后,抑菌活性均有不同程度的提高,特别是提高了对革兰氏阴性菌的抑制活性。可通过以下几种改造方式提高溶菌酶的抑菌活性:(1)通过升高温度破坏酶分子内的非共价结合;(2)通过降低pH影响酶的分子空间结构;(3)加入金属离子;(4)对酶分子侧链基团或化学基团进行化学修饰;(5)使用纳米材料负载溶菌酶并固定制成纳米复合材料以破坏细胞壁;(6)利用溶菌酶和其他抑制细菌生长的溶液进行混合制得复合液;(7)使用基因重组技术构建新的溶菌酶表达载体。研究改造溶菌酶对于基础科学的发展及溶菌酶替代抗生素应用于水产和畜禽养殖、开发绿色天然食品防腐剂具有重要指导意义。 相似文献
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试验旨在研究不同pH对淀粉样纤维形成的影响。以蛋清溶菌酶(hen egg-white lysozyme,HEWL)为模型蛋白,在不同pH的甘氨酸(50 mmol/L)溶液中(57.0±0.1)℃孵育0~8 d,使其形成不同聚集程度的淀粉样纤维,pH设为2.0、6.5、7.5和8.0;用透射电镜定性观察淀粉样纤维生成状况,采用硫磺素T (ThT)荧光法和刚果红染色法测定淀粉样纤维生长状况,8-苯胺基-1-萘磺酸(ANS)荧光法测定淀粉样纤维疏水性变化,圆二色谱法测定二级结构转化,BeStSel软件预测β-折叠含量。结果显示,透射电镜下观察第8天纤维生长状况发现,pH为2.0时HEWL形成了大量的短杆状淀粉样纤维,同时ThT荧光法结果表明淀粉样纤维生长状况最好(P<0.01),且生长趋势呈时间依赖性;刚果红染色法显示,在490~510 nm出现红移、540 nm出现特征性肩峰,疏水性显著增强,并且二级结构转化明显,β-折叠含量从天然HEWL蛋白的6.1%增加到37.6%;pH 6.5组仅在透射电镜下观察到极少量的淀粉样纤维,pH 7.5组在视野中未观察到明显的淀粉样纤维,仅观察到大量的球状或杆状蛋白聚集体;pH 8.0组未产生淀粉样纤维。高温条件下,HEWL在强酸性(pH 2.0)条件较易形成淀粉样纤维,且此时疏水性和二级结构转化程度最高,这为解释朊病毒病及其他淀粉样变性疾病的淀粉样纤维形成机制提供了理论基础。 相似文献