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为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其他物种来源细胞基因组及生物制品原辅材料未出现特异性扩增曲线;敏感性高,基因拷贝数检出限度为45.3拷贝。本试验建立的荧光定量PCR检测方法能够有效地对鼠源细胞进行快速检测,为细胞质量控制提供了有效方法。 相似文献
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小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)是影响全球畜牧业的一种重要病原。本研究旨在建立稳定可靠的PPRV反向遗传操作平台，为解析PPRV致病机理、免疫逃逸机制、病毒复制机制等基础理论研究提供有效的技术平台，同时为开发更加安全、有效的新型疫苗奠定必要的前期基础。通过提取PPRV Clone9株的RNA,采用RT-PCR分6段扩增出PPRV反基因组cDNA,通过酶切、连接出PPRV Clone9株全长反基因组，获得pB-PPRV,同时构建表达PPRV核蛋白(nucleoprotein, N)、磷蛋白(phosphoprotein, P)和大蛋白(large protein, L)的3个辅助质粒。将pB-PPRV与辅助质粒通过脂质体转染BHK-T7细胞。转染3 d后，冻融3次，感染Vero细胞。传至第二代可观察到明显的细胞病变(CPE)。经间接免疫荧光、Western blot、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明，拯救出具有感染性的病毒。拯救病毒(rPPRV-Clone9)在Vero细胞上可稳定传代，增殖动态与亲本病毒相似。本研究成功建立... 相似文献
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脾虚证的临床表现以消化系统功能障碍为主,其中胰腺外分泌功能减退明显,且伴有食欲与体质量的显著下降.胰多肽(PP)是胰岛周边F细胞分泌的主要胃肠激素,对胰腺外分泌功能与食欲的调节有抑制作用,可导致氧化代谢增强,引起体质量下降.本试验旨在揭示大鼠胰岛胰多肽分泌变化与脾虚证发病之间的关系.笔者以利血平脾虚大鼠模型为研究对象,采用SP染色进行免疫组织化学研究,观察大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质的分布情况.脾虚组与对照组的大鼠胰岛中胰多肽免疫阳性物质面积与胰岛面积百分比相比,胰头部分未见明显差异(P＞0.05);但脾虚组胰中、胰尾的PP免疫阳性物质所占面积极显著大于对照组(P＜0.01).结果表明,脾虚证大鼠胰岛中胰多肽总分泌量极显著增加.因此,胰多肽的分泌增加是导致脾虚证动物出现胰腺外分泌功能低下、食欲减退以及体质量下降的主要因素. 相似文献
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为满足乙型脑炎活疫苗的鉴别检验及外源病毒检验需求,以乙型脑炎活疫苗和灭活疫苗为免疫原,通过对SPF鸡进行反复免疫制备乙型脑炎特异性血清。当血清效价满足要求时,以心脏采血法采集血清,经分装、冻干后,开展纯净性检验、噬斑减少中和效价测定、特异性检验、剩余水分测定和均匀性检验,并对乙型脑炎活疫苗进行鉴别检验和外源病毒检验。结果显示:制备的乙型脑炎阳性血清无菌、支原体及外源病毒检验结果均为阴性,与口蹄疫病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和牛病毒性腹泻病毒等均无交叉反应,噬斑减少中和效价大于1:1 000,剩余水分<3%,且10个样品的效价测定结果组内、组间均无明显差异(P<0.05)。结果表明,制备的乙型脑炎阳性血清效价高,剩余水分少,纯净性、特异性、均匀性均良好,可满足乙型脑炎活疫苗的检验需求。 相似文献
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为建立检测牛病毒性腹泻病毒抗体的间接ELISA检测方法，利用大肠杆菌表达系统成功表达E2蛋白并纯化，利用纯化后的蛋白作为包被抗原，用方阵法对影响ELISA试验的各个因素进行优化，并进行特异性、敏感性和重复性试验。确定E2抗原最佳包被浓度为1μg/mL,最佳血清稀释度为1∶40,最佳封闭液为1%明胶，最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min;最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD450nm≥0.255。与血清中和试验和商品化试剂盒进行比较，总符合率分别为98%和96%,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与其它常见牛病毒阳性血清均无交叉反应。本研究成功建立了间接ELISA方法，为进一步用于大批量牛血清样本的抗体检测和流行病学研究奠定了基础。 相似文献
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