旋毛虫Serpin基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化及虫体表达特性     

《中国兽医杂志》2017,(9)

为研究旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin),基因在不同发育时期的mRNA表达水平变化,本研究应用实时荧光定量PCR技术对不同发育时期的虫体的Serpin在mRNA表达水平进行检测。同时利用鼠抗重组蛋白血清对Serpin在旋毛虫成虫、新生幼虫、成囊前期幼虫及肌幼虫中进行定位,以鉴定该Serpin基因的表达特性。研究结果显示,在成虫时期,3 d时表达量明显高于6 h和5 d的表达量(P﹤0.05);成囊前期表达量很低,其中18 d时表达量最低(P﹤0.05);肌幼虫时期在26 d、38 d和48 d均有大量表达(P﹤0.05)。免疫荧光染色结果表明,Ts Serpin蛋白在5 d成虫期的体表表达;在新生幼虫和14 d成囊前期幼虫的体内体表均有表达;38 d肌幼虫时期明显可见表皮及体内均有表达。本实验为探究旋毛虫在宿主体内免疫逃避机制奠定基础。  相似文献   

两种旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂对巨噬细胞炎性细胞因子mRNA表达的影响     

毕磊  刘照琨  关靖喆  张煜涵  张思远  路义鑫 《中国兽医杂志》2018,(1)

丝氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫入侵宿主的过程中发挥着关键作用,能够参与到入侵宿主、免疫逃避、炎症反应、凝血系统和细胞迁徙等过程。为了探讨两种丝氨酸蛋白酶抑制剂(Ts Ad SPI和Ts Ka SPI)对巨噬细胞所分泌炎性细胞因子的调节作用,应用实时荧光定量PCR技术对两种SPIs分别处理的小鼠巨噬细胞进行TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12、IL-10、TGF-βmRNA表达水平的检测。结果显示,Ts Ad SPI和Ts Ka SPI均可不同程度的抑制LPS活化的小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12 mRNA的表达水平。并且两种SPI均可不同程度的促进巨噬细胞抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的表达。表明这两种旋毛虫SPI可通过调节宿主巨噬细胞影响入侵时宿主的免疫应答。  相似文献   

陆地棉一个丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白基因的克隆与表达分析   总被引：3，自引：1，他引：3  

杨郁文  倪万潮  张保龙  沈新莲  张香桂  徐英俊  姚姝 《棉花学报》2006,18(3):140-144

通过RT-PCR获得一个编码棉花丝氨酸/苏氨酸激酶类似蛋白全长的cDNA片段,其编码的氨基酸序列与拟南芥ATPK3的相似度达到82%,这个基因暂被命名为GhPK1。基因全编码区包括1038个核苷酸,编码346个氨基酸的蛋白。GhPK1的编码产物在265~270个氨基酸处有一个跨膜区并可能结合在内质网膜上。GhPK1在种子和纤维中的表达水平较其它组织高。另外,GhPK1的表达量在受到盐胁迫后上升,说明GhPK1可能参与了盐胁迫反应。  相似文献   

脱脂大豆磷脂在对虾饲料中的应用研究     

穆玉云 《饲料研究》2007,(5):55-59

油脂是指能溶于有机溶剂但不溶于水的一类物质。这类物质根据其分子结构中是否含有极性基团分为非极性脂肪，（如甘油脂类、腊脂类和固醇类物质含有非极性碳氢基团）和极性脂肪（如磷脂（PL）及醣脂类（神经鞘磷脂和甘油糖脂等）含有极性基团）（Higgs和Dong，2000）。PL是一种第1和第2位醇基被脂肪酸酯化，而第3位醇基被磷酸和含氮基团酯化的甘油三酯（Akiyama等，1992）。根据含氮基团的不同，PL可分为不同的类别，如磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰丝氨酸（PS）和磷脂酰肌醇（PI）的极性基团分别为胆碱、乙醇胺、丝氨酸和肌醇（Tacon，1987；Higgs和Dong，2000）。饲料中添加PL能提高海水鱼虾在苗期和幼体期的生长和成活率（Teshima，1997；Coutteau等，199r7）。当初，这类发现令人惊讶，因为研究证明，甲壳类动物自身可生物合成PL（Chapelle等，1985；Teshima等，1986c；Kanazawa和Koshio，1994）。鉴于不同的研究结果存在明显的不同，许多研究者进行了大量的研究，以解释PL的功能并确定其营养需要量。所获得的结果非常有助于理解PL在对虾养殖上的营养意义和应用。  相似文献   

富硒酵母对长期缺硒和正常大鼠体内D-丝氨酸和L-丝氨酸水平的影响     

《动物营养学报》2021,33(6)

  相似文献   

高效液相色谱法测定奶粉中磷脂酰丝氨酸含量   总被引：1，自引：0，他引：1  

岳虹  赵贞  高敏  吕海燕  刘丽君  李翠枝 《乳业科学与技术》2014,(3):13-15

建立了奶粉中磷脂酰丝氨酸的高效液相色谱-蒸发光散射检测的测定方法。采用氯仿甲醇混合溶剂做为提取剂,Diol色谱柱上分离,正己烷-异丙醇-乙酸-三乙胺和异丙醇-水-乙酸-三乙胺的二元系统进行梯度洗脱。每100 g奶粉中磷脂酰丝氨酸添加量为50~150 mg时,回收率大于85%。定量限30 mg/100 g。该方法具有结果准确,操作简便,重复性好等优点,可用于奶粉中磷酯酰丝氨酸的检测。  相似文献   

猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株的构建及其致病性     

祝昊丹  倪艳秀  周俊明  俞正玉  茅爱华  吕立新  何孔旺 《江苏农业学报》2014,(6)

为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小鼠的致病能力降低;体内定植试验结果表明缺失株△stk在小鼠体内各器官的定植能力显著降低。这些数据表明STK与猪链球菌2型(SS2)的致病性相关。  相似文献   

大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备          下载免费PDF全文

方堃  白丁平  陈玉林 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011,39(11):35-40

【目的】克隆大肠杆菌半胱氨酸合成酶(包括丝氨酸乙酰转移酶(cysE)和O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶(cysM))的基因,对其进行原核表达,并制备相应蛋白的抗体。【方法】用PCR方法从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增cysE和cysM基因,构建其原核表达载体pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM,对其进行BamHⅠ和SacⅠ双酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot(以His抗体作为一抗)检测。用纯化的cysE和cysM蛋白作为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价。【结果】PCR获得了822bp的cysE基因和912bp的cysM基因。原核表达质粒pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM构建成功,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的cysE和cysM重组蛋白分子质量分别为56和58ku。制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度均达到1∶102 400。【结论】成功克隆了大肠杆菌cysE和cysM基因,并实现了原核表达,同时制备出了相应的多克隆抗体。  相似文献   

旋毛虫成虫丝氨酸蛋白酶对S774A.1巨噬细胞的毒性作用     

于建立  白雪  刘国兴  吴秀萍  王学林  刘明远 《动物医学进展》2011,(10):5-9

为探究旋毛虫成虫排泄分泌抗原(ES)中丝氨酸蛋白酶对宿主免疫调节作用,用PCR扩增出旋毛虫成虫期特异性丝氨酸蛋白酶基因Zh68,克隆至表达载体pET28a,转化到大肠埃希菌BL21( DE3),经诱导表达后的重组蛋白免疫接种动物获取抗血清.将抗体封闭前后的ES分别作用于S774A.1巨噬细胞,CCK-8检测巨噬细胞的增...  相似文献   

我国大豆种子球蛋白2S组分的研究——2S球蛋白的某些性质     

张崇本  吴显荣 《黑龙江八一农垦大学学报》1990,(1)

本实验对2S球蛋白的四个组分进行了SDS—PAGE分子量测定,氨基酸组成分析,沉降超离心分析,Dansy1—C1法N—末端氨基酸测定和蛋白酶抑制剂活性测定。结果表明:2S球蛋白四个组分的分子量按SⅡP_1,SⅡP_2,SⅡP_3和SⅡP_4的顺序分别为22,800,21,500,19,200和17,800。所含残基数分别为191,179,163和147个。SⅡP_1,SⅡP_2和SⅡP_3三者的沉降系数(Sw.20)分别为2.1S,1.9S和1.8S。N—末端分析表明这四种蛋白质的N—末端均为天冬氨酸。还发现只有SⅡP_2具有丝氨酸类蛋白酶抑制剂活性。本实验所提纯的这个抑制剂(SⅡP_2)的一个ATEE单位为0.4ug抑制剂蛋白(特指对α—chymotrypsin发生作用时)。α—chymotrypsin与此抑制剂(SⅡP_2)相互作用时的克分子数比为E/I=2/1。  相似文献