大肠杆菌肠毒素STI、STII、LTB融合基因植物表达载体的构建     

武冬梅  祝建波  陈创夫  王琦  张金波 《西北农业学报》2006,15(5):150-154

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)LT和ST是导致人和动物腹泻的主要病原菌。利用PCR方法分别从pGEM-5Zf( )-STI、K88ab(LT ,ST )质粒中扩增到了STI、STII基因,然后通过三引物PCR实现了STI、STII基因的融合,再与LTB基因融合,并置同一阅读框。LTB基因的5′位于STII基因的3′端,并在ST基因和LTB基因之间插入7个氨基酸的连接肽。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中,并通过冻融法导入根癌农杆菌EHA105。  相似文献   

含有MAR序列的STI-STII-LTB融合基因在苜蓿中的表达     

武冬梅  陈创夫  祝建波  李冀新 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(2):83-87

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)LT和ST是导致人和动物腹泻的主要病原菌。利用三引物PCR法和酶切实现了STI、STII、LTB基因的融合,LTB基因的5′位于STII基因的3′端,三者在同一阅读框。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中GUS基因的位置。同时构建不含MARs序列的重组质粒。重组质粒pBI121-MARs-STI-STII-LTB、pBI121-STI-STII-LTB通过冻融法转化根癌农杆菌,并通过农杆菌介导法转化杂花苜蓿。转基因苜蓿植株经PCR检测、Southern-blotting分析表明,转基因苜蓿植株基因组中可检测到STI-STII-LTB融合基因;提取转基因苜蓿植株总蛋白质,SDS-PAGE结果显示,转基因植株表达了重组抗原蛋白,且含MAR序列的蛋白表达量要高于不含MAR序列的表达量;Western-dotting免疫检测证实转基因植株表达的重组抗原具有免疫原性。  相似文献   

大肠杆菌黏附素蛋白与热稳定肠毒素融合基因植物表达载体的构建     

孔庆军  任雪艳  李卓夫 《家畜生态》2005,(4)

利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K 88ac与热稳定肠毒素ST II的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pB in48中,成功地构建了植物重组表达质粒pB in48-K 88-ST,并将其转化到农杆菌EHA 105中,为K 88ac-ST II基因的进一步研究奠定了基础。  相似文献