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1.
小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12 80 相似文献
2.
用提纯的OPPV细胞抗原免疫BALB/c小鼠脾脏与SP2/0小鼠骨髓细胞融合,融合率为70%,以ELISA双抗体夹心法进行检测,阳性率为20%,经过有限稀释法克隆出1A6、2B8、1G3、2G44株分泌抗OPPV抗原的单克隆体杂交瘤细胞株.选择抗体分泌滴度高的1A6细胞进行了较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为96~110条,抗体属性为IgG1,轻链为K链,IFA试验表明产生的McAb对OPPV有特异性,细胞传30代并在液氮中保存半年后复苏仍能稳定地分泌抗OPPV McAb,细胞分泌抗体的ELISA滴度腹水为6.4×104,上清为640,McAb经硫基乙醇还原后在SDS-PAG上呈现2条区带,一条为重链部分,MW50000,另一条为轻链部分,MW为25000. 相似文献
3.
用免疫分离法检测稻种上的白叶枯病菌 总被引:2,自引:0,他引:2
免疫分离法是一种新型的、高度灵敏和准确的种菌带菌检验法,它结合了利用专化性抗血清的选择法吸附作用和活细菌可形成菌落的两方面的优点,从种苗材料中分离到目标细菌,用纯菌测试它的回收率为50~70%,最低检出率为50~100个菌/ml,人工喷接种和病田收获的病种带菌率达87%,平均每粒自然病种上的细菌数在100个左右。免疫分离所得菌落经致病性测定,大多数为白叶枯菌。 相似文献
4.
以纯化的猪传染性胃肠炎病毒重组M蛋白免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行融合、筛选,最终获得3株抗TGEVM蛋白的杂交瘤细胞系1B3、3C2、4A5,染色体平均记数为89对、92对、90对,间接ELISA检测1B3、3C2、4A5细胞培养上清的效价分别为1/4000、1/1000、1/4000,腹水效价分别为2×10~4、2×10~5、2×10~5。通过间接ELISA做病原检测,这3株单抗不与猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和猪轮状病毒发生交叉反应,而与传染性胃肠炎病毒显示良好的特异性。用制备的单抗通过间接免疫荧光做病原检测,发现染色后TGEV感染的细胞培养物在胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光,结果表明,所制备的抗重组TGEVM蛋白的单抗对病原检测具有很高的特异性,为TGEV准确快速的病原诊断和TGEV感染相关的基础性研究提供了物质基础。 相似文献
5.
抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ELISA效价为1∶3×105,蛋白含量为3.96g/L。将提纯的PEDV免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合率为95.6%。用间接ELISA进行筛选,共检出38个阳性孔,阳性率为28.8%。对其中15个阳性值较高的孔进行3次再克隆,阳性率达100%,最后获得15株稳定分泌特异性抗PEDV单抗(McAb)的杂交瘤细胞。ELISA阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶103~1∶106和1∶128~1∶512。经鉴定,15株McAb的分子类型均为IgG,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为90~110,平均95。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对PEDV具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。 相似文献
6.
猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单克隆抗体的制备及生物学特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
通过差速离心和蔗糖密度梯度了心法对猪繁殖与呼吸综合征病毒沪1(PRRSV-S1)株进行抗原纯化。免疫BAIB/c小鼠,取脾细胞与SP2/O融合,用间接ELISA和有限稀释法,获得2株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为AG、BD3。ELISA交叉试验和阻断试验表明,2株单抗具有高度特异性。AG1可与PRRSV-S1,欧洲株LV,美洲株VR-2332反应,而BD3与美洲株VR-2332反尖较弱,2株单抗对猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是:1:256-1:5123,腹水效价分别在1:10^3-1:10^5之间。AG1和BD3各有100条染色体,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b,BD2属于IgM。Western blot试验表明AG1和BD3是针对N蛋白抗原表位的特异性单抗。 相似文献
7.
8.
用聚乙二醇沉淀浓缩纯化猪瘟兔化弱毒中国株(SFV-C)免疫 BALB/C 小鼠,取其脾脏,制备淋巴细胞,与 FO 骨髓瘤细胞融合,经 EliSA 检测和有限稀释法克隆化,最后筛选出5株对SFV 的单克隆抗体杂交瘤细胞.所制成的腹水抗体,一株只对 SFV-C 发生特异性反应,四株与SFV-S,SFV-F 及 BVDV oregon 发生微弱的交叉反应.细胞上清液的 EliSA 效价为1:800~1600,腹水效价为1:10~6~10~7. 相似文献
9.
10.
本文用 ELISA 间接法,研究并建立了抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的检测体系。实验证明,该法具有简便、灵敏、迅速、特异性强、准确性高及重复性好的优点。是研究筛选抗 IBDV单抗杂交瘤细胞的可靠方法。 相似文献