利用IBV重组N蛋白建立ELISA抗体检测试剂盒的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

王宏俊  陈福勇 《中国兽医杂志》2003,39(9):3-6

利用表达鸡传染性支气管炎病毒Gray株N蛋白的基因工程重组菌，表达IBV—N蛋白，并利用表达载体上带有组氨酸标记的特点，应用金属螯合填料将其纯化。用纯化的IBV—N蛋白作为包被抗原，成功地建立了一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法。确定抗原最佳包被浓度为0．58μg／ml；被检血清的最佳稀释度为1：100；酶标二抗的工作浓度为1：1000。确定了血清样品阴、阳性临界0D值为0．14。与IDEXX公司IBV抗体检测试剂盒比较，结果表明自建ELISA试剂盒具有较高的敏感性和特异性。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒N蛋白研究进展     

邓小敏  叶柱德  王晶钰  罗艳 《动物医学进展》2007,28(9):78-82

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是严重危害养鸡业的重要病原之一.近年来国内外学者在分子生物学领域方面的研究不断深入,在病毒基因组的结构与功能及其N蛋白的研究方面取得了重要进展.对N蛋白如何特异性地识别病毒基因组RNA、参与病毒RNA的复制和包装、诱导IBV体液和细胞免疫应答的机制、IBV新型基因工程疫苗研制以及IBV的抗体水平监测等方面的研究,为IBV基因工程疫苗设计及其免疫防控提供了科学依据.  相似文献   

应用RT-PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S_1基因的研究     

黄勇  王红宁  王林川  廖明 《中国预防兽医学报》1998,(5)

选择Ｓ１基因做为目的基因,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增１２株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的ＩＢＶ,所用引物为ＩＢＶＢｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列,跨幅为１．７２ｋｂ。结果６株ＩＢＶ毒株（ＳＡＩＢ３、Ｆ、Ｄ４１、Ｍ４１、Ｈ５２、Ｈｏｌｔｅ）扩增出了长约１．７ｋｂ的Ｓ１基因片段,而另６株ＩＢＶ毒株虽经４次ＲＴ－ＰＣＲ重复后也显阴性。用ＨａｅⅢ内切酶对６个毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行酶切,结果显示Ｍ４１、Ｈ５２、Ｄ４１３个ＩＢＶ毒株的Ｓ１基因包含两个ＨａｅⅢ位点,Ｆ株与Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因包含１个ＨａｅⅢ位点,而ＳＡＩＢ３株Ｓ１基因则已丢失ＨａｅⅢ位点。实验结果表明：运用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＩＢＶ时,由于Ｓ１基因的核酸序列具有较高的变异率,因此Ｓ１基因不宜做为目的基因。  相似文献   

禽副粘病毒2型(PMV-2)致病性的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

王宏卫  赵继勋  赵德明 《畜牧兽医学报》2002,33(2):169-173

7日龄SPF鸡经滴鼻、点眼感染PMV-2，可引起轻微的呼吸道症状，病理组织学观察可见气管粘液分泌亢进和少量的淋巴细胞浸润。PMV-2与传染性支气管炎（IBV）或鸡毒支原体（MG）协同感染比单纯感染这三种病原的任何一种均呈现更严重的呼吸道症状，病理组织变化呈气管纤毛部分或全部脱落，气管粘膜上皮细胞不同程度的变性、脱落。固有层和粘膜下层严重水肿，有大量淋巴细胞、巨噬细胞和异嗜细胞浸润。SPF雏鸡感染PMV-2后的不同时间检查病毒在鸡体内的分布规律，结果表明，PMV-2在法氏囊中大量分布；气管、肺、胸腺中有较多病毒；大脑、脾和肾脏只有少量病毒存在。上述实验结果揭示PMV-2感染SPF雏鸡致病性较弱，PMV-2在鸡呼吸道综合征中起一定作用。  相似文献   

化学合成面筋蛋白外啡肽B5对鸡淋巴细胞体外免疫活性的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

周业飞  周梅仙 《西北农业学报》2015,24(3):39-43

面筋蛋白外啡肽B5是一种通过面筋蛋白的体外酶解所获得的阿片肽,具有一定的免疫学功能,有望成为一新型免疫增强剂。本研究通过化学合成方法制备,并将其加入鸡外周血单个核细胞中,以观察其对淋巴细胞的增殖效应和对IFN-γ和IL-4mRNA水平影响。结果显示,化学合成获得了高纯度的外啡肽B5(HPLC质量分数大于98.435 7%);外啡肽B5能显著促进鸡淋巴细胞的增殖,并能显著提高IFN-γ的mRNA水平(P0.05),对IL-4mRNA无显著影响。  相似文献   

2010—2013年我国鸡传染性支气管炎病毒分离株S1基因分子特性分析     

尤永君  张国中  刘月焕  梁武  王腾  刘兴彩  沈元  王友 《中国农业大学学报》2015,20(2):137-148

为掌握近年来我国传染性支气管炎病毒的流行动态和变化规律,利用检测转化至克隆载体鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,应用MEGA5分析软件进行聚类分析,并对瑞普生物疫病诊断研究服务中心2010—2013年间从我国野外分离并测定的30株传染性支气管炎的S1基因序列与常用疫苗毒株和GenBank中代表性IBV毒株的对应基因序列进行比较,结果发现:1)30株野外分离株可分为2个基因型:LX4型和TW型,分别占总数的93.3%和6.7%;2)LX4型分离株S1基因和氨基酸序列与常见疫苗毒株序列差别很大,同源性仅分别为77.6%~86.3%和75.8%~85.7%;3)分析S基因裂解位点时发现同一基因型毒株的裂解位点氨基酸序列高度趋同,且型间差异性较大。可见,近年来我国主要IBV分离株属于LX4型,并且彼此间亲缘关系较近,与我国现用传染性支气管炎主要弱毒疫苗和国外参考株属于不同的基因型,这可能是导致疫苗免疫失败,传染性支气管炎(IB)在鸡群中爆发的主要原因。该研究结果为筛选针对我国目前流行IBV毒株的疫苗株提供参考。  相似文献   

IBV S1蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备     

李春萍  佟铁铸  朱事康  刘星  周宇 《北京农业》2012,(21):8-11

采用RT-PCR方法,以IBVM41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好。将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1。将该重组质粒转入表达菌Origami(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34KD的重组蛋白poly156S1。Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型。按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析。结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高。Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性。  相似文献   

安徽IBV地方株AH1-99株S1基因克隆及序列分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

魏建忠  何长生  詹松鹤  江定丰  郑举  陈静 《安徽农业大学学报》2005,32(2):136-140

用RT-PCR技术扩增出IBV AH1-99的S1基因cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中进行序列测定和分析.结果表明,该分离株S1基因全长共1 611个核苷酸,编码537个氨基酸;与GenBank中登陆的IBV S1基因核苷酸的同源性为76.5%～92.2%,氨基酸同源性为69.3%～89.8%;在IBV S1基因核苷酸进化关系树中,该分离株同H52、M41和Beaudette等亲缘关系较近,在151位有一个EcoR I 酶切位点,有16个潜在的糖基化位点,前18个氨基酸残基为S蛋白的信号肽.  相似文献   

鸡传染性支气管炎H120、W93株活疫苗生产工艺的改进   总被引：1，自引：0，他引：1  

崔卓宇  陈红安 《动物医学进展》2005,26(8):92-94

分别以鸡传染性支气管炎病毒(In-fectiousbronchitisvirus,IBV)H120株、W93株不同病毒量接种10、12日龄SPF鸡胚,并改变后孵化温度生产抗原液,接种后不同时间收获胚液,根据鸡胚的早死率以及胚液的收获量、病毒滴度,选择最佳的生产工艺。结果表明,IBVH120株、W93株以102.7EID50/0.1mL的病毒量接种12日龄鸡胚尿囊腔,在34.5℃孵育35h,可较为显著地降低早死胚率,提高产毒量,且抗原液病毒滴度符合疫苗制备规程的要求。  相似文献   

鸡传染性支气管炎M41毒株S1基因的克隆与真核表达研究     

赵宝华  同锁  杨虹 《动物医学进展》2005,26(1):71-75

根据Genbank中公布的IBVS1基因序列 ,设计了一对引物 ,克隆出IBV强毒株M41的S1基因 ,基因大小为 1 .62kb ,导入真核表达载体系统pIRS1neo中 ,表达蛋白分子量为 61ku ,并具有中和活性。为今后开发鸡传染性支气管炎基因工程疫苗奠定了基础。  相似文献