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| 鸭肠炎病毒VP22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | |
| 引用本文： | 王克雄,李慧昕,李阳,邵昱昊,韩宗玺,马小军,刘胜旺,孔宪刚.鸭肠炎病毒VP22蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国预防兽医学报,2009,31(9). |
| 作者姓名： | 王克雄 李慧昕 李阳 邵昱昊 韩宗玺 马小军 刘胜旺 孔宪刚 |
| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 3. 甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070 |
| 基金项目： | "十一五"国家科技支撑计划 |
| 摘 要： | 为了制备抗鸭肠炎病毒(DEV)VP22蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以DEV Clone-03基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增UL49基因并克隆至pMD-18载体.重组质粒经测序鉴定后,将UL49基因亚克隆于原核表达载体pET-30a,构建重组表达质粒pET-30a-UL49.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,在大肠杆菌中获得表达,并对表达的重组蛋白VP22进行western blot鉴定.结果显示,表达的重组蛋白分子量约为36 ku,与预期的大小一致.重组蛋白能够被鼠抗DEV阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有良好的免疫原性.将重组蛋白纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,制备MAb,经间接ELISA、western blot和间接免疫荧光试验进行筛选及鉴定.获得4株能够稳定分泌抗DEV VP22蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2810、2G1、3F10和3G2.其MAb亚类分别属于IgG2b、IgG2b、IgA和IgM.4株MAbs都能够与DEV Clone-03发生特异性反应,表明能够识别天然构象的VP22蛋白.这4株MAb可用于DEV VP22蛋白功能研究及抗原表位的研究. |
| 关 键 词： | 鸭肠炎病毒 VP22蛋白 单克隆抗体 |
Preparation and identification of monoclonal antibodies against VP22 protein of duck enteritis virus |
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| WANG Ke-xiong,LI Hui-xin,LI Yang,SHAO Yu-hao,HAN Zong-xi,MA Xiao-jun,LIU Sheng-wang,KONG Xian-gang.Preparation and identification of monoclonal antibodies against VP22 protein of duck enteritis virus[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2009,31(9). | |
| Authors: | WANG Ke-xiong LI Hui-xin LI Yang SHAO Yu-hao HAN Zong-xi MA Xiao-jun LIU Sheng-wang KONG Xian-gang |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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