| 猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 陈东奇,郑殿重,魏志颖,王莹,李佳璇,崔文,姜艳平,王晓娜,周晗,王丽,乔薪瑗,李一经,唐丽杰,单智夫.猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备[J].畜牧与兽医,2024(1):91-97. |
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| 作者姓名： | 陈东奇 郑殿重 魏志颖 王莹 李佳璇 崔文 姜艳平 王晓娜 周晗 王丽 乔薪瑗 李一经 唐丽杰 单智夫 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学动物医学学院;2. 黑龙江省农业科学院畜牧所 |
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| 基金项目： | 黑龙江省自然科学基金项目(LH2021C042)； |
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| 摘 要： | 猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域，本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中，经IPTG诱导并纯化后，所得蛋白用于小鼠免疫，制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达，通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果：Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达，并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10 240的多克隆抗体，该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力；免疫荧光及Western blot结果表明，Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达，且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上，本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体，验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达，为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪流行性腹泻病毒 Nsp6基因 多克隆抗体 分段表达 真核表达 |
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