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1.
猪细小病毒分离,核酸探针研制及应用 总被引：11，自引：0，他引：11
采用分子克隆技术制备了ＰＰＶ－ＤＮＡ－Ｃ片段（ＰＰＶ－ＲＦ－ＤＮＡ,经Ｐｓｔ Ｉ／Ｈｉｎｄ Ⅲ的双酶切片段,称为Ｃ片段）及含Ｃ片段的ＰＵＣ１９重组质粒（ＰＵＰ）,利用地高辛标记,分别制备探针２和探针１。对猪细小病毒ＤＮＡ进行斑点杂交,两种探针均为阳性,而对照的猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒及ＰＫ－１５细胞的核酸均为阴性。并且后一种探针的敏感性高于前者,两种探针的ＤＮＡ检出限量分别为４０ｐｇ和 相似文献
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利用ＰＳｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切及低熔点琼脂糖凝胶电泳技术，从重组质粒ＰＵＰ中回收３．０ｋｂ猪细小病毒ＤＮＡ片段。以地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记后制备探针。运用该探针对作者分离并鉴定的７株猪细小病毒及ＰＰＶ－ＢＭ１株、四川株、Ｚ株、广西株、天津株进行打点杂交，并以具有相同临床症状的猪病毒性疾病的猪瘟病毒、日本乙型脑炎病毒、伪狂犬病病毒以及ＰＵＰ质粒、ＰＫ－１５为对照。结果探针与猪细小病毒ＤＮＡ、ＰＵＰ质粒的杂交呈阳性反应，而对照病毒、ＰＫ－１５呈阴性反应，探针的最低检出限量为４０ｐｇＤＮＡ。结果表明，该探针具有特异性强、敏感性高，可用于猪细小病毒的检测 相似文献
3.
猪细小病毒N株弱毒苗的免疫效果观察 总被引：2，自引：2，他引：0
经调查，广西猪群普遍存在猪细小病毒感染［１］。为了有效防制该病，本研究室已研制出能预防猪细小病毒感染的弱毒疫苗（简称ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗）。该弱毒苗用于预防猪细小病毒引起的繁殖失败，具有良好的免疫原性和安全性［２］。我们用四批ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗对广西多个流行该病的猪场的后备母猪进行免疫，取得了良好的效果，现将结果报告如下。１ 材料和方法１．１ ＰＰＶ－Ｎ株弱毒苗本实验室研制，种毒按蒋玉雯等［２］的方法进行培养。１．２ 试验动物５００克左右健康青年豚鼠，并经ＰＰＶ－ＨＩ检测为阴性。１．３ 猪细小病毒… 相似文献
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从疑似猪瘟病料中检出牛病毒性腹泻病毒 总被引：23，自引：1，他引：22
根据牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）ＮＡＤＬ株和猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株的核苷酸序列，设计合成了１对ＢＶＤＶ引物和３对ＨＣＶ引物。以从吉林、长春、哲盟３个地区经临床及病理学诊断为猪瘟的病料中提取的ＲＮＡ为模板，采用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分别以ＢＶＤＶ和ＨＣＶ引物进行扩增。结果，用ＢＶＤＶ引物从哲盟地区的疑似猪瘟病料中扩增出大小约４００ｂｐ的片段，而用３对ＨＣＶ引物在不同的条件下均未从该病料中扩增出相应大小的ＨＣＶ基因片段。此外，用ＨＣＶ的ＰＥ０／ＰＥ４引物从吉林、长春的病料中扩增出了ＨＣＶ的基因片段，但用ＢＶＤＶ引物从这两个地区的病料中均未扩增出ＢＶＤＶ的基因片段。从哲盟疑似猪瘟病料中扩增出的片段经克隆、序列测定及计算机分析证实，该片段的核苷酸序列和氨基酸序列与ＢＶＤＶ的同源性明显高于与ＨＣＶ的同源性。将哲盟病料接种于ＭＤＢＫ传代细胞，出现典型而规律的ＢＶＤＶ样细胞病变。由此证明，从哲盟疑似猪瘟病料中检测出的是ＢＶＤＶ而不是ＨＣＶ 相似文献
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RT-PCR检测猪瘟病毒方法的建立与应用 总被引：7，自引：1，他引：6
建立RT PCR检测猪瘟病毒的方法。根据已发表的猪瘟病毒E2基因 (囊膜糖蛋白gP55基因 )序列 ,设计合成了一对特异性引物 ,扩增片段的大小为 50 7bp ,用RT PCR技术对石门系标准株和 1 0株分离株进行检测。结果这对引物对标准株和 1 0株分离株均能扩增出与预期大小相符 50 7bpRT PCR产物 ,而对其他 6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该RT PCR可检出 1 0 0pg的猪瘟病毒RNA模板 ,对人工感染猪不同组织样品进行检测 ,结果对白细胞抽提的核酸样品检出率最高为 1 0 0 % (2 4 / 2 4 ) ,其次为扁桃体、脾、肾 ,检出率为 83 3 % (2 0 / 2 4 ) ,再者为淋巴结 ,检出率为66 7% (1 6/ 2 4 )。对送检的 1 9份疑似猪瘟的病死猪病料组织进行RT PCR检测 ,结果有 1 6份样品为猪瘟病毒阳性。兔体交叉反应试验结果RT PCR阳性的 1 6份病料中 ,有 1 4份样品被判为含有猪瘟病毒 ,其他病料兔体交叉反应试验结果全为阴性 相似文献
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地高辛标记PPV—DNA—C及PUP重组质粒探针的比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
应用分子克隆技术制备的猪细小病毒复制型ＤＮＡ的ＰｓｔⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切片段Ｃ及被克隆到ＰＵＣ１９中的Ｃ片段形成的重组质粒ＰＵＰ利用非放射性的地高辛标记后制备两种探针。分别对不同来源的猪细小病毒ＤＮＡ及ＰＵＰ重组质粒于硝酸纤维素膜上打点杂交，免疫呈色后均为阳性反应，而对照的猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、伪狂犬病毒、ＰＫ－１５细胞的核酸均为阴性反应。通过对已知量的ＰＰＶ－ＤＮＡ检测发现Ｃ探针及ＰＵＰ探针的最低检出限量分别为４０ｐｇＤＮＡ和４ｐｇＤＮＡ。重组质粒ＰＵＰ探针比双酶切后的Ｃ片段探针敏感１０倍 相似文献
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聚合酶链反应检测猪细小病毒的研究 总被引：18，自引：1，他引：17
本研究成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术。以１６个核苷酸引物对首次完成了ＰＰＶＤＮＡ结构蛋白ＶＰ１编码区２２８ｂｐ片段的扩增。同样数目的另一引物对，也成功扩增了Ｖｐ２编码区１５８ｂｐＤＮＡ片段。ＰＰＶＢＭ－１株与其它国内分离株（广西株、天津株和哈尔滨株）均出现相同扩增结果。琼脂糖凝胶电泳显示了特异条带（ＶＰ１２２８ｂｐ．Ｖｐ２１５８ｂｐ），而伪狂犬病病毒、犬细小病毒均未扩增，表明了本方法的特异性。同时，限制性内切酶分析（Ｖｐ１２２８ｂｐ及Ｖｐ２１５８ｂｐ分别含单一ＰｖｕⅡ、ＥｃｏＲⅠ位点），也证实了特异性。本方法敏感性高，可检出１０ｆｇ模板ＤＮＡ。既可作样品的快速检测，又能检查细胞系的污染。具有特异、简便、快速的优点。 相似文献
10.
猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较 总被引：7，自引：0，他引：7
在我国吉林省某地猪生殖－呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ。间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应;而分离株与ＨＣＶ、ＰｒＶ、ＰＰＶ、ＴＧＥＶ、ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲＲＳＶ。进一步用六种ＰＲＲＳＶ单抗（Ａ～Ｆ）进行ＩＦＡ试验,结果２个分离株与ＶＲ－２３３２的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。 相似文献
11.
猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究 总被引：1，自引：0，他引：1
从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。 相似文献
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猪细小病毒灭活苗对预防由ＰＰＶ引起的母猪繁殖障碍效果良好，Ｊｏｏ等（１９８４）报告了灭活苗接种豚鼠可产生抗体反应，本研究旨在观察豚鼠接种ＰＰＶ灭活苗后的抗体产生规律及特异性。我们用１３批ＰＰＶ灭活苗免疫３９只ＰＰＶ阴性豚鼠和猪，每批次各３只，免疫后阳性率１００％，平均ＨＩ价豚鼠为３２０－１２８０，猪为２０－３２０。 相似文献
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猪生殖—呼吸道综合征病毒（PRRSV）分离鉴定及其与欧,美PRRSV … 总被引：2，自引：0，他引：2
在我国吉林省某地猪生殖呼吸道综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）抗体阳性猪群的４头２日龄弱仔猪实质脏器中分离到２株ＰＲＲＳＶ,间接荧光抗体试验（ＩＦＡ）结果表明,ＰＲＲＳＶ（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）抗血清与２个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株（ＬＶ．ＶＲ－２３３２）也呈阳性反应,而分离株与ＨＣＶ,ＰｒＶ,ＰＰＶ,ＴＧＥＶ,ＰＥＤＶ和ＨＥＶ无交叉抗原,以上试验证明,我们已成功地分离到２株地方性ＰＲ 相似文献
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用地高辛标记的核酸探针检测猪伪狂犬病毒野毒感染的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
利用PCR技术从带有伪狂犬病毒（PRV）gE基因的重组质粒pMD18-T-gE中扩增回收约304bp大小的片段,并制备出地高辛标记的gE基因核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与重组质粒DNA发生特异性杂交,而与对照的PRVBartha-k61株疫苗毒DNA、猪细小病毒（PPV）DNA、猪圆环病毒（PCV）DNA、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRsV）cDNA、猪瘟病毒（CSFV）cDNA的杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对PRV野毒的最低检出量为4pg。应用该探针对11份繁殖障碍病料进行了杂交检测,共检出4份阳性病料,该结果与PCR检测结果一致,表明该核酸探针可用于猪伪狂犬病野毒感染的临床诊断。 相似文献
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集约化猪场繁殖猪群感染PPV和JEV后的繁殖性能指标变化 总被引：2，自引：0，他引：2
猪群发生繁殖障碍性疾病的病原因素很多,主要有猪细小病病毒（ＰＰＶ）,日本乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）,猪呼吸道－繁殖障碍综合征（ＰＲＲＳＶ）,猪伪狂犬病毒（ＰＲＶ）,布氏杆菌,衣原体。但目前我国最常见的和危害最严重的是ＰＰＶ和ＪＥＶ两种,并且二者常以混合感... 相似文献
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菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验 总被引：2，自引：0，他引：2
菌毒王消毒剂对猪细小病毒和猪瘟病毒的灭活试验王在时（中国兽药监察所北京，１０００８１）受山东曲阜圣亚兽药有限公司和北京中龙生物科技总公司的委托，为检验两公司联合出品的菌毒王消毒剂对猪细小病毒（简称ＰＰＶ）和猪瘟病毒（简称ＨＣＶ）的灭活效果，根据农业部... 相似文献
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用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＰＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应，腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０＾－５－１０＾－７，琼扩沉淀效效价达１：２０－１：５１２，鹅胚中和效价达１：３０－１：１２２，鹅体中和效价为１：５４－－１：９６。ＧＰＳ１和ＧＰＧ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良 相似文献