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1.
通过血凝抑制(HI)和鸡胚中和试验(VN)证实，本实验室制备的抗禽流感H9M2单抗11A5和11B2株可特异性地抑制H9亚型禽流感病毒的血凝特性，而与禽流感H5和H7亚型以及其他具有血凝性感染禽类的病毒(如新城疫等)不反应。两株单抗腹水HI效价均达到15Log2。中和试验表明：上述两株单抗均可有效抑制H9N2病毒在SPF鸡胚中的增殖，使病毒失去血凝活性．测得11A5和11B2株腹水对H9N2禽流感病毒的半数保护量分别为10^-3.35和10^-4.58。该单抗的研制成功对于进一步建立快速鉴别诊断禽流感H9亚型病毒具有重要意义。 相似文献
2.
本研究建立了一种快速的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52株定量检测方法,为进一步研究疫苗的效价检测和质量监控新方法奠定基础。针对IBV核蛋白(N)基因,设计特异的H52株荧光定量PCR检测引物和TaqMan-MGB探针,优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验,探讨荧光定量RT-PCR与EID50方法测定病毒含量的相关性,并通过体外转录技术对病毒基因拷贝数进行定量分析。该方法特异性强,与其他禽源病毒均无交叉反应;该方法可检测到5.60×101拷贝/μL的病毒核酸,与常规PCR相比,敏感性高10倍;重复性试验的变异系数为0.9%~3.2%;与EID50检测结果的相关系数r＝0.934,两种方法在检测H52株病毒效价上具有很好的相关性。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR方法,适合于对鸡传染性支气管炎病毒H52株病毒含量的快速定量检测。 相似文献
3.
《中国兽医杂志》2017,(11)
为了筛选免疫原性更好的H9N2亚型禽流感病毒疫苗株。本研究在分析H9N2病毒HA基因遗传进化规律基础上,对预选的毒株进行血凝效价(HA)、鸡胚半数感染量(EID50)测定及交叉血凝抑制试验,筛选出疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,CK/AH/AJ3/15株HA效价达11 log2、EID50值为9.17 log10/0.1 mL,有很好的繁殖能力;对当前流行株的HI反应效价比疫苗株F/98高2-3个滴度;以CK/AH/AJ3/15株制作灭活疫苗,整体保护率达到97.5%,比F/98疫苗株的85%明显提高。表明CK/AH/AJ3/15株可以作为H9N2亚型禽流感新型疫苗株的候选株。 相似文献
4.
建立了H5N1亚型禽流感病毒（AIV）蚀斑克隆方法，用不加中性红的营养琼脂为覆盖层，在倒置显微镜下挑斑，对3株H5N1亚型AIV鸡胚分离毒株进行了蚀斑克隆纯化，从同一鸡胚分离毒株中纯化得到了蚀斑大小和形态均存在显著差异的毒株，共获得13株蚀斑克隆纯化株。研究结果表明，当小牛血清浓度为2%时，加入终浓度50 μg/ml的胰酶可明显促进和刺激蚀斑的形成，蚀斑的直径和PFU/ml均有显著的增加。通过TCID50、EID50和LD50测定发现，来自同一鸡胚分离株的不同蚀斑克隆纯化株中，蚀斑大、毒力强的克隆毒株占优势，而且蚀斑较大的，其毒力也较强。对得到的13株蚀斑克隆毒株的全基因组各片段序列分析表明，蚀斑克隆纯化株在HA蛋白裂解位点附近的氨基酸序列均符合高致病性通报性禽流感病毒的分子特征。 相似文献
5.
2014年1月,建水某蛋鸡养殖场发生一起以呼吸困难、产蛋下降、急性死亡为特征的病例.采集病料进行细菌和病毒的分离与鉴定,分离到的6株大肠杆菌,血清学试验结果显示,血清型为O78、O88.药敏试验结果显示,分离株对丁胺卡那霉素、环丙沙星等敏感,但对头孢氨苄、强力霉素、新霉素等药物有耐药性.分离到1株病毒,鸡胚尿囊液HA效价8log2～ 10log2,血凝抑制试验结果显示,分离病毒的血凝特性能被H9亚型禽流感标准阳性血清所抑制,表明从病料中分离出了H9亚型禽流感病毒,诊断为大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒的混合感染. 相似文献
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猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型 RT-PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M基因保守序列,分别设计合成了5对特异性引物,利用RT-PCR技术对SIV的型和亚型进行鉴定。结果表明,该方法的型RT-PCR可以检测出104 EID50病毒量所提取的RNA;H1、H3、N1和N2的亚型RT-PCR均可以检测出104 EID50病毒量所提取的RNA。除每对特异性引物所对应的亚型外,对其他亚型及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测均为阴性,应用该方法对临床样品进行检测,其结果与病毒分离结果符合率为100%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的分型检测方法,为猪流感分子流行病学的调查奠定了良好的基础。 相似文献
7.
为了研究H9亚型HP株禽流感病毒接种非免疫鸡胚后病毒的繁殖规律,试验用H9亚型HP株禽流感病毒接种非免鸡胚,记录不同时间段死亡的鸡胚数量,并分别收获各时间段死亡鸡胚的尿囊液,测定不同时间段尿囊液的病毒效价。结果表明,接种H9亚型HP株禽流感病毒后,非免鸡胚死亡高峰期出现在60～84 h,死亡数量占接种鸡胚数的80%以上,而该时间段死亡鸡胚尿囊液的病毒滴度也处于最高峰,最高到达109.63EID50/mL,直到96 h病毒仍维持较高水平(109.50EID50/m L),而96 h后病毒滴度开始衰减。 相似文献
8.
为了更好防控H9N2亚型禽流感,且做到科学免疫,免疫减负.本研究采集疑似感染低致病禽流感鸡群病料,将其无菌处理后接种SPF鸡胚后进行病毒分离,通过分子生物学试验对其进行病原学鉴定.结果显示:分离鉴定出一株H9亚型禽流感病毒(AIV);血凝试验(HA)效价在10～11,该病毒属于欧亚分支的BJ亚分支.将病毒纯化后,制备灭... 相似文献
9.
为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚上最佳培养工艺,试验采用H9N2亚型禽流感病毒分离株以不同稀释倍数接种不同鸡胚(SPF及普通鸡胚)、不同日龄鸡胚及不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备出的鸡胚尿囊液的产量及病毒效价。结果表明:H9N2亚型禽流感病毒接种无禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~(4 )～1×10~5倍,接种带有禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~3～1×10~4倍,最佳接种日龄为10日龄,最佳培养时间为96～120 h。说明采用优化的鸡胚培养方法生产H9N2亚型禽流感病毒可以得到高质量、高产量的病毒液。 相似文献
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朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
用禽流感病毒ELISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测，发现5份粘液样本均呈禽流感阳性；随后取相应气管组织材料接种于9～11日龄鸡胚分离病毒．发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集，用禽流感病毒H5、H7、H9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作HI试验，结果禽流感病毒H5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到2^7，而禽流感病毒H7、H9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度，说明从朗德鹅分离到的病毒为H5亚型禽流感病毒。 相似文献
12.
2013年中国吉林某养鸡场发生疑似H9亚型禽流感疫情,采集该发病鸡场病料接种9日龄SPF鸡胚,分离得到一株病毒。经血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、测序分析,鉴定该毒株为H9亚型禽流感病毒(AIV)。对本试验分离株HA基因进行测序及序列分析,结果显示分离株HA基因的裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的基因特征;HA肽链具有9个潜在糖基化位点,与近些年H9亚型AIV分离株的潜在糖基化位点相同;具有8个受体结合位点,其中234位受体结合位点由谷氨酰胺(Q)变异成苏氨酸(T);HA基因系统进化树结果显示本试验分离株属于欧亚进化分支,与中国最早分离株A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2)亲缘关系较远,与2007年后中国H9亚型AIV主要流行分支的代表株A/Chicken/Guangxi/55/2005(H9N2)亲缘关系较近。将该毒株制成油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后第21天免疫鸡血清抗体高达10log2,表明本试验分离株具有很好的免疫原性。 相似文献
13.
In 2013,one case of suspected H9 subtype avian influenza occurred in a chicken farm of Jilin povince.Clinical samples were collected from the diseased farm,inoculated into the allantoic cavity of 9-day-old SPF chicken embryo,and then one strain of virus was isolated.The results of HA test,HI test and molecular biology test all showed that the isolate belonged to H9 subtype avian influenza virus (AIV).The HA cleavage site of the isolate was RSSR↓GLF,which was consisted with the molecular characteristic of low pathogenic AIV.The HA peptide chain had 9 potential glycosylation sites which were same as other isolates of recent years.The isolate had 8 receptor binding sites,including 234 receptor binding site by glutamine (Q) mutating into threonine (T).The phylogenetic tree revealed the isolate belonged to Eurasian lineages and it had far genetic relationship with the earliest domestic isolate (A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2)),but had close genetic relationship with the representative strain (A/Chicken/Guangxi/55/2005(H9N2)) of major epidemic branch since 2007.We prepared an inactivated oil-emulsion vaccine of the isolate,and then vaccinated SPF chicken.21 days after vaccination,the HI titer of chicken serum antibody reached up to 10log2.The result suggested the isolate had good immunogenicity. 相似文献
14.
2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒（AIV）,命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量（EID50）为109.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间（MDT）为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA基因的遗传进化分析结果表明,该分离株属于h9.4.2.5谱系,符合当前毒株流行趋势。将HF株与2006-2018年分离自全国各地的10株H9N2亚型AIV分离株同时制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,制备阳性血清,通过交叉血凝抑制试验分析病毒抗原性,结果显示HF株与2014年之前毒株抗原相关性介于0.50~0.56之间,与2014年及之后毒株抗原相关性介于0.89~1.00之间,表明该分离株与2014年之后的流行毒株具有良好的抗原相关性。用0.2%甲醛灭活HF株病毒液,其HA效价在灭活前后未发生变化;用灭活抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d HI抗体效价几何平均值达到9.0log2以上,可使免疫鸡完全抵抗H9亚型AIV的感染,提供100%的攻毒保护。研究结果表明,HF株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选株用于H9N2亚型禽流感疫苗的研制。 相似文献
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CHENG Yi TIAN Hui ZHANG Ya XUE Jingjing SHENG Dongbei LIU Wujie WANG Wanbing ZHANG Pantao TIAN Kegong 《中国畜牧兽医》2007,47(9):2945-2952
In 2015,an H9N2 subtype avian influenza virus (AIV) strain was isolated from a chicken farm in Hefei,Anhui,and named HF strain.The results of the chicken embryo proliferation characteristics study showed that the half infection rate of chicken embryo (EID50) was 109.17/0.1 mL,and the mean time to death for minimum lethal dose(MDT) was 87 h.The analysis result of HA gene showed that its amino acid cleavage site was located in RSSR↓GLF,which accorded with the characteristics of low pathogenic avian influenza.The genetic evolution analysis of HA gene revealed that the isolate belonged to the h9.4.2.5 lineage,which accorded with the current virus strain epidemic characteristics.The HF strain was prepared with 10 H9N2 subtype AIV isolates which isolated from all over the country from 2006 to 2018 to prepare inactivated vaccines,immunize SPF chickens,prepare positive sera,and analyze the virus antigenicity by cross hemagglutination inhibition test.The results showed that the correlation between the HF strain and the virus antigens before 2014 and was between 0.50-0.56,and the virus antigen correlation after 2014 was 0.89-1.00.This showed that the isolate had good antigenic correlation with epidemic strains in recent years.Inactivate HF strain virus solution with 0.2% formaldehydel,and its HA titer did not change before and after inactivation.After the inactivated virus solution was prepared into an oil emulsion inactivated vaccine to immunize SPF chickens,21 days after immunization,the average value of the HI antibody titer reached 9.0log2.It could make immune chicken completely resistant to H9 subtype AIV infection and provide 100% protection from challenge.The above research results showed that the HF strain had good immunogenicity and could be used as a vaccine candidate strain for the prevention of H9N2 subtype AIV. 相似文献
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H9N2亚型禽流感病毒抗原性变异的研究 总被引：8，自引：1，他引：8
对1998—2002年间在河南省豫北地区分离到的5株H9N2亚型禽流感病毒的抗原性变异进行了研究。经HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验及攻毒保护试验证明，5株H9N2亚型间已经发生了抗原性漂移。98A5和99S毒株间的保护力接近100％，HI试验、鸡胚中和试验、细胞中和试验的相关性均在0．74以上。表明2毒株间的抗原性相近；用00Y毒株攻击其他4株免疫的鸡，其保护率仅为60％～80％；而02Y株对除00Y株外的4株的免疫保护率分别为60％、75％、80％、100％，与分离年代呈负相关性，HI、鸡胚中和试验、细胞中和试验也取得类似结果，说明2000年后的毒株间已发生抗原性变异。 相似文献
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从福州市某活禽市场采集的鸡泄殖腔棉拭子样品中分离出1株病毒,经血凝抑制试验(HI)和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定为H9N2亚型禽流感病毒。在GenBank基因库中对该病毒株的3个基因片段的测序结果进行BLAST比对分析表明,3个基因片段均属于H9N2亚型禽流感病毒的基因。HA基因遗传进化分析表明,该病毒分离株与代表株DK/HK/Y280/97处于同一分支,与上海的鸡源分离株A/chicken/Shanghai/06/2015(H9N2)同源性最高,同源性为99.5%。 相似文献
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H9亚型禽流感在我国家禽中广泛流行,给养禽业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁着公共卫生安全。H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）具有高度遗传变异性,导致流行株和疫苗株之间抗原匹配性差,从而影响疫苗的临床保护效果,急需研发一种高效、具有交叉保护性的通用型H9亚型禽流感疫苗。马赛克疫苗是针对遗传多样性病原体设计,通过整合所有抗原序列获得一条抗原表位覆盖最广泛的嵌合蛋白,并制备疫苗。本研究参考mosaic疫苗设计原则,设计、优化并合成了一条H9亚型禽流感病毒的mosaic血凝素（hemagglutinin,HA）基因序列,采用反向遗传操作技术,以H1N1亚型流感病毒PR8株为骨架,以mosaic H9HA序列替换PR8株的HA片段,获得重组病毒rPR8-HAm/H9。将其制备为灭活疫苗并免疫SPF雏鸡,监测抗体水平、攻毒保护效果,评价其交叉保护效果。结果表明,重组病毒rPR8-HAm/H9灭活疫苗免疫SPF雏鸡,可诱导机体产生较高水平的HI抗体和中和抗体,可显著抑制攻毒后病毒的脱落,对H9N2 AIV JM0305株的攻毒保护率为80%。rPR8-HAm/H9灭活疫苗可以对异源H9N2 AIV JM0305株产生较好的交叉攻毒保护,为研发基于马赛克技术的禽流感通用疫苗提供了前期基础。 相似文献