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广西断奶仔猪猪圆环病毒2型的检测 总被引：15，自引：5，他引：10
对广西16个养猪场的22份断奶仔猪病料用PCR技术检测猪圆环病毒2型（PCV-2），对阳性病进一步检测猪瘟病毒、猪生殖和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及细菌性病原。结果，从南宁市郊某猪场表现衰弱症状的病猪病料中检测出PCV-2，而这些病料没有检出猪瘟病毒、猪生残和呼吸系统综合征病毒、伪狂犬病病毒及可疑细菌，证实广西存在PCV-2引起的断奶仔猪多系统衰弱综合征（PMWS）。 相似文献
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应用PCR方法,对江苏省兴化市35个猪场的165份可疑病料进行检测,结果有9个猪场的27份猪病料为伪狂犬病病毒阳性,猪场和病料的阳性率分别为25.71%和16.36%。从发病时间看,该病的发生无明显的季节性。初生仔猪和保育猪的阳性率分别为23.81%和14.04%。调查结果表明,伪狂犬病是当前江苏省兴化市猪群的主要疫病之一,并已成为制约养猪生产发展的重要因素,应予以高度重视。 相似文献
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牛伪狂犬病的实验室诊断 总被引：1，自引：0，他引：1
对不明原因役牛猝死症病料组织触片镜检和分离培养皆未发现细菌，乳胶凝集试验检查发现3份送检血清皆为伪狂犬病病毒（PrV)抗体阳性，ELISA检测结果,其中2份为PrV gE抗体阳性，而且这2份血清PrV中和抗体也为阳性，以脑组织制备DNA模板进行PCR，扩增到特异性的PrVDNA片段，对健康成年兔接种病牛脑，肺等病科，表现典型的伪狂犬病症状，综合流行病学，细菌学，血清学，分子生物学和动物试验结果，确诊为牛伪狂犬病。 相似文献
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《动物医学进展》2021,42(4)
为调查2019年陕西省规模化猪场中口蹄疫(FMD)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)、猪瘟(CSF)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病(PR)的免疫状况及病原感染情况,采用间接ELISA对送检的20 233份血清样品进行抗体检测,采用PCR/RT-PCR方法对送检的1 633份病料样品进行病原检测。结果表明,检测口蹄疫抗体的5 154份血清样品中(4 089份免疫血清,1 065份未免疫血清),免疫抗体阳性率为76.69%,感染率为42.25%;检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的6 259份血清样品中(5 516份免疫血清,743份未免疫血清),免疫抗体阳性率为85.06%,感染率为28.26%;检测猪瘟抗体的5 165份血清样品中(4 881份免疫血清,284份未免疫血清),免疫抗体阳性率为88.10%,感染率为47.89%;检测伪狂犬病病毒gB抗体的3 142份血清样品中(2 810份免疫血清,332份未免疫血清),免疫抗体阳性率为84.23%,感染率为21.69%;检测猪圆环病毒2型抗体的513份血清样品中(420份免疫血清,93份未免疫血清),免疫抗体阳性率为95%,感染率为88.17%。检测猪瘟病毒的328份病料中,阳性率为9.45%;检测猪圆环病毒2型的218份病料中,阳性率为14.23%;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的654份病料中,阳性率为10.86%;检测伪狂犬病病毒的144份病料中,阳性率为2.78%;检测口蹄疫病毒的226份病料中,阳性率为0.44%。通过对5种常见病原和抗体的检测,为陕西省猪场常见疫病的防控提供了基础资料。 相似文献
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福建省规模猪场伪狂犬病流行病学调查与分析 总被引：2，自引：1，他引：1
作者分别应用血清中和试验（SNT）和PCR方法,对福建省近3年来56个规模猪场收集的1470份血清和71个规模猪场采集的136份病料进行了猪伪狂犬病的血清学调查和病原检测。结果表明：在2005年、2006年和2007年,猪伪狂犬病病毒中和抗体合格率：母猪分别为91.5％、89.2%和94.8%;6周龄前猪群分别为75.3%、56.6%和75.5%;6周龄后猪群分别为38%、33.9%和30.7%;被检病料中猪伪狂犬病病毒野毒阳性检出率分别为12.5%、17.4%和16.0%。由此可见,猪伪狂犬病在福建省规模猪场仍未得到完全控制,应加强防控。 相似文献
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Cao S Chen H Zhao J Lü J Xiao S Jin M Guo A Wu B He Q 《Veterinary research communications》2005,29(3):263-269
Multiplex PCR was established to detect porcine circovirus type 2 (PCV-2), porcine parvovirus (PPV) and porcine pseudorabies virus (PRV) and applied to samples from 137 piglets exhibiting clinical signs of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS). PCV-2 DNA was detected from all samples. Moreover, 43 samples were positive for PPV but negative for PRV; 11 samples were positive for PRV but negative for PPV; and 35 samples were positive both for PPV and PRV. These results suggests that PCV-2 co-infection with PRV and PPV may play an important role in PMWS. Also, multiplex PCR is an appropriate candidate method for diagnosis of PCV-2, PRV and PPV simultaneously in field cases. 相似文献
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为建立猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因缺失疫苗和野毒感染的快速鉴别诊断方法,本研究根据猪伪狂犬病野毒具有gD表面抗原基因和gE毒力基因,而基因缺失疫苗只有gD基因无gE基因的特性,针对gD/gE基因的5'端核苷酸序列自行设计引物,建立鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测.结果表明,成功建立了鉴别PRV gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR诊断方法,该方法灵敏度高,最低检出限为100拷贝/μL;重复性好;特异性强,可特异性地扩增出PRV细胞毒中的gD和gE基因及gE基因缺失疫苗毒中的gD基因,但对PK-15细胞和猪流行性腹泻病毒等其他8种病原扩增不出任何条带;自835份临床疑似PRV感染病料中共检测出PRV gD和gE基因双阳性样品即野毒感染阳性样品267份,PRV gD基因单阳性样品28份,选取该方法检测出的26份PRV野毒感染阳性样品用于病原分离培养,两种方法的符合率为96.1%.说明本试验建立的二重PCR鉴别诊断方法快速、灵敏、特异,对于临床上疫苗毒和野毒感染的快速鉴别诊断具有重要意义. 相似文献
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检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒（PRV）各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术。该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性。对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50×102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100～1 000倍以上,并且重复性好。在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫。 相似文献
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根据GenBank中已发表的猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型 (porcine circovirus type 2,PCV2)基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV 的VP2、PRV的 gD、和PCV2的ORF2基因为各病毒的诊断靶序列,设计特异性引物,在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了3种病毒的多重PCR技术,可同时扩增PPV 313 bp、 PRV 217 bp和PCV2 447 bp的特异性片段。用多重PCR技术与单项PCR技术对比检测试验证明两者的符合率为100％,表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可同时鉴别诊断这3种病毒。从10个发病猪场和门诊病例的病猪采集的211份样品,用建立的多重PCR检测方法,检出PPV阳性42份,阳性率为19.91%;PRV阳性26份,阳性率为12.32%;PCV2阳性56份,阳性率为26.54%;2种以上病毒混合感染25份,混合感染阳性率为11.85%。检测结果表明,山西省猪群已感染这3种疫病。 相似文献
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从集贸市场随机采集97头份猪肉样本、53头份羊肉样本、50头份牛肉样本,应用双抗体夹心ELISA和PCR方法,平行检测样本可能含有的伪狂犬病病毒。结果97头份猪肉样中,双抗体夹心ELISA方法检出伪狂犬病病毒19份(19.6%),PCR检出25份(25.6%);牛肉样本中ELISA阳性数为0,PCR阳性2份(4%);羊肉样本中两种方法均为阴性。这两种方法均为阳性和阴性的份数为12和170,总符合率为89.2%。结果说明猪伪狂犬病的控制对提高肉食品品质具有重要作用。 相似文献
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为了解猪伪狂犬病病毒（PRV）变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法（IFA）鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析。结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24 h后出现典型细胞病变（CPE）,经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1 mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22 h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸（D）的插入,具有变异毒株的典型特征。本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础。 相似文献
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JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR的应用研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用 JEV、PRRSV二联 PCR,PPV、PRV二联 PCR以及这 4种病毒 4联 PCR对来自内蒙、广州、广西、天津、北京、吉林病料进行检测 ,共检了 1 4 6份病料。其中 PRRSV阳性 7份 ,PPV阳性 1 2份 ,PRV阳性 2 1份 ,PRV和 PPV混合感染 4份。并对 5份人工接种 JEV小鼠病料检测 ,其中 4份为阳性。随后对部分阳性 PCR扩增产物进行点杂交和核苷酸测序鉴定 ,证实了 PCR扩增准确性。对内蒙 PRRSV阳性扩增带测序结果显示 ,我国流行 PRRSV为美洲型 ,在扩增片段的核苷酸序列上有 3个碱基差异 相似文献
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MA Zhen-yuan LI Ning YAN Ruo-qian BAN Fu-guo WANG Shu-juan ZHAO Xue-li XIE Cai-hua WANG Dong-fang WANG Hua-jun CAO Wei-wei 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2086-2095
In order to learn the situation of pig pseudorabies virus (PRV) variant in this study, tissue samples such as lymph nodes which were collected from clinical pigs with suspected PRV infection were identified by PCR. PRV positive sample were inoculated on PK-15 cells after grinding and degerming, with further experiment including virus isolation, plague purification, PCR and IFA identification, TCID50 confirmed by Reed-Muench method, inoculation test and observation of clinical symptoms in mice. The gE gene of purified PRV and brain tissue samples of dead mice were identified by sequencing analysis. The results showed that the virus grown on PK-15 cells could produce typical cytopathic effect (CPE) after 24 h; After three rounds of plaque purification,the isolate was PRV positive identified by PCR and IFA, and nominated as HeNZK-2014; The TCID50 of the isolate was 10-9.77/0.1 mL; The virus in 1×108 TCID50 inoculation was able to cause itching, tearing, death in infected mice, and PRV could be detected in tissues of dead mice; The molecular genetic variation analysis of gE gene by PCR amplification and clone sequencing indicated that the gE gene from brain tissue of infected mice shared 100.0% homology with HeNZK-2014, and located in a relatively independent branch with newly pandemic isolates in recent years after 2011, but was far from the classical strains before 2011, and both had two insertion of aspartic acid (D) at sites of 48 and 496 amino acids, which were considered to be the typical characteristics of PRV variants. This study successfully isolated a PRV variant, which laid a foundation for further research on vaccine development, prevention and control against PRV variants. 相似文献
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During monitoring of certified pseudorabies (PRV)-free herds to confirm their PRV -free status, occasional individual gE-seropositive pigs are detected. These single-reactor pigs remain gE-seropositive when further serum samples are collected and tested. For the eradication programme to proceed, it is important to determine whether these pigs are only false positives or are; in fact, infected with field PRV. The purpose of this study was to determine whether the polymerase chain reaction (PCR) could detect field PRVDNA in single-reactor pigs and so confirm positive reactions in the serologic monitoring programme. First, DNA samples of various tissues from 15 single-reactor pigs all from different herds were examined for field PRV by PCR. Additionally, serum samples from these pigs were analyzed in a gE-confirmation enzyme linked immunosorbent assay (gE-confirmation ELISA). PCR detected PRVDNA in five of the 15 pigs, and these results were confirmed by the gE-confirmation ELISA. The remaining 10 pigs that tested negative in the PCR also tested negative in the gE- confirmation ELISA. We conclude that PCR can be used to discriminate between true and false serological positive single-reactor pigs and, moreover, that the gE-confirmation ELISA confirms these PCR results. 相似文献