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用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对弓形虫抗原进行了初步分析。结果显示：多肽蛋白带分布在５０．２ＫＤ以下区域，组分蛋白带有６条，分子量分别为１７．８ＫＤ、２１．３ＫＤ、３０．０ＫＤ、３６．５ＫＤ、３９．１ＫＤ和５０．２ＫＤ。 相似文献
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对狐阴道加德纳氏菌三个血清型的共同抗原蛋白进行免疫印迹试验，结果证实，４条共同抗原蛋白带中，只有７４．１Ｋ蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ呈现阳性反应，从凝胶中提纯７４．１ＫＤ蛋白免疫小鼠，免疫后３５ｄ采血分离血清，以ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ进行检测，血清抗体呈现阳性反应，证实７４．１Ｋ蛋白能产生免疫应答。 相似文献
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K88菌毛蛋白亚基基因克隆、表达及重组蛋白抗血清制备 总被引：5，自引：1，他引：4
利用ＰＣＲ技术,从仔猪黄痢的致病菌中扩增出不含信号肽序列的Ｋ８８菌毛蛋白亚基基因片段,将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ表达载体ｐＥＴ２８ａ（＋）中,构建了该基因的原核表达载体ｐ８８２８,导入Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）,得到工程菌株。ＤＳＤ－ＰＡＧＥ分析结果显示,经ＩＰＴＧ诱导,该亚基基因高效表达出重组Ｋ８８菌毛蛋白,约占菌体总蛋白的３０％。用含重组蛋白的凝胶作为抗原,免疫新西兰大白兔,首次制备Ｋ８８菌毛 相似文献
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大片吸虫分泌排泄抗原的分析 总被引：3，自引：0，他引：3
取广西牛源大片吸虫成虫制备出分泌排泄（ＥＳ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝染色显出７条蛋白带，免疫印迹试验（ＥＩＴＢ）测出其主要特异性免疫成分分子量为３６．３，２８．５及２５．５ｋＤ其中２８．５与２５．５ｋＤ与法国肝片吸虫ＥＳ的部分抗原成分相同，两种片形吸虫与抗血清可以交叉使用无特异性，但与日本血吸虫抗原及抗血清均无交叉反应，人工感染大片吸虫２周后的兔血清即能识别此抗原，ＥＳ抗原提取方法 相似文献
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人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１ 相似文献
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应用还原和非还原单向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及二者结合的双向电泳技术，研究了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成。谷蛋白由多种亚基组成。高分子量二硫键连接蛋白占其多数，经还原裂解成Ａ（５４ＫＤ）、Ｂ（４０ＫＤ，３９ＫＤ）、Ｃ（３３ＫＤ，３１ＫＤ）、Ｄ（２２ＫＤ，２０ＫＤ，１８ＫＤ）和（Ｅ（１５ＫＤ）５组主要单肽链单元，提出了二硫键连接蛋白的组成模式，并发现低分子量谷蛋白亚基存在肽内二硫键。 相似文献
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传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验 总被引：4，自引：0，他引：4
用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡,免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价,并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外,还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率;（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产 相似文献
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用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％ 相似文献
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应用还原和非还原单向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及二者结合的双向电泳技术，研究了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成。谷蛋白由多种亚基组成，高分子量二硫键连接蛋白占其多数，经还原裂解成Ａ（５４ＫＤ）、Ｂ（４０ＫＤ，３９ＫＤ）、Ｃ（３３ＫＤ，３１ＫＤ）、Ｄ（２２ＫＤ，２０ＫＤ，１８ＫＤ，）和Ｅ（１５ＫＤ）５组主要单肽链单元，提出了二硫键连接蛋白的组成模式，并发现低分子量谷蛋白亚基存在肽内二硫键 相似文献
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用PCR和ELISA方法分析奶牛血清和奶中类乙型肝炎病毒 总被引：4，自引：0，他引：4
用人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）ＥＬＩＳＡ试剂盒检测８５份奶牛血清和９３份奶样。结果测出３３份血清为ＨＢｓＡｇ阳性，其中４价亦为ＨＢｅＡｇ阳性；２２份奶样为ＨＢｓＡｇ阳性，其中１１份亦为ＨＢｓＡｇ阳性。７个双阳性的样本，用针对ＨＢＶ表面抗原基因不同部位的两对引物作ＰＣＲ分析，结果未能扩增出特异片段，排除了奶牛ＨＢＶ血清学阳性是由人ＨＢＶ感染所致。 相似文献
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用斑点酶联免疫吸附试验、金萄菌A蛋白酶联免疫吸附试验及间接血球凝集试验二种血清学方法检测弓形虫感染鼠血清及健康鼠血清各100份,平均阳性率分别为96.0％、94.0％和88.0％,平均假阳性率分别为4.0％、7.0％及8.0％;检测10份阿米巴肝脓肿病人血清及20份日本血吸虫感染兔血清,平均交叉反应率分别为3.3％、10.0％及13.3％。结果表明,三法对弓形虫特异性抗体的检测均有较好的敏感性、特异性、重现性及较低的交叉反应率。三法中,以斑点酶联免疫吸附试验的敏感性最好,且有省试剂、反应快、操作简便等优点,是一种很有实用价值前景的免疫诊断方法。 相似文献
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为探讨圆小囊在免体全身抗感染免疫中的功能作用，采用组织病理学及免疫组织化学方法，对比观察了2日龄、1月龄及2月龄实验免感染RHDV后圆小囊的病理变化，同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定，重点对实验兔圆小囊黏膜上皮内淋巴细胞(IEL)进行了统计比较，结果显示：2月龄以内兔人工感染RHDV后，临症表现、剖检及组织病理学观察均未见异常。血清及RHDV的靶器官肝、脾、肾中均未检测出RHDV抗原。2月龄以上兔感染RHDV后，无论从临床症状，还是大体剖检，组织病理学观察，均出现了明显的病理学改变，而且感染后血清RHDV抗原检测呈阳性反应。圆小囊、肝、脾、肾等组织器官都呈现RHDV免疫组化强阳性反应。2月龄以内的乳兔及仔兔感染RHDV后，圆小囊虽未出现明显的形态结构改变，免疫组化染色也未见RHDV抗原阳性反应物，但IEL明显增多，2日龄兔IEL由1．2％增加到4．2％；1月龄兔的IEL由10．1％增加到26．1％。1月龄仔兔还表现出固有层中淋巴细胞明显增多。 相似文献
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Antibodies to peptides detect new hepatitis B antigen: serological correlation with hepatocellular carcinoma 总被引：26，自引：0，他引：26
The expression of a previously unidentified gene product, encoded by the hepatitis B virus (HBV) genome, has been achieved with a recombinant SV40 expression vector. Antibodies against synthetic peptides representing defined regions of this protein were used to screen cells infected with recombinant virus as well as tissues naturally infected with HBV. A 24,000-dalton protein (p24) was detected in cells infected with recombinant virus and a 28,000-dalton protein (p28) was detected in tissues infected with HBV. The peptides or recombinant-derived protein were used as antigens to screen sera from individuals infected with HBV. Specific antibodies were detected predominantly in sera from patients with hepatocellular carcinoma. The presence of p28 in tissues infected with HBV and the appearance of specific antibodies in infectious sera establish the existence of an additional marker for HBV infection. 相似文献
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在云南、广西大面积的三七栽培过程中三七常因镰刀菌侵染造成三七根腐病。2001年在分析比较健康及感染三七根腐病三七根的蛋白质图谱的基础上,为进一步研究三七抗根腐病品种的分子标记,本实验用健康及感染三七根腐病三七根样品的全蛋白质提取液进行了蛋白免疫印迹分析。单克隆抗体（Mab7）是由一种小鼠杂交细胞系(#490; ATTC HB-12029)针对Cronartium ribicola担孢子蛋白产生的抗体。它被鉴定为一种免疫蛋白I,能疹断不同地理范围内疱锈菌样品中70道尔顿热休克蛋白抗原(Cro r Ⅱ)。它被用于针叶树病原系统蛋白组学研究。本实验用单克隆抗体（Mab7）用分析了三七健康（主根、须根）及感病组织的蛋白免疫印迹。并用PDI quantity one 软件包详细分析了其蛋白印迹。Mab7在健康组织中在分子质量13.2～52.3 u之间显示出9条不同的免疫印迹谱带,其中分子质量25.5及26.4 u位置处出现两条比较强的谱带,在须根组织中只有在14.4道尔顿位置处出现一条谱带。在而在感病组织中显示更少的谱带,而且带型截然不同。用单克隆抗体（Mab7）监测组织中带型的变化有助于育种中抗病性的研究。进一步研究带型的变化与病害严重度之间的关系正在进行中。结果表明单克隆抗体Mab7作为免疫疹断工具可用于三七品种及病害防卫反应分析。 相似文献
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副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立 总被引：2，自引：1，他引：1
【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis,HPS）外膜蛋白P5（outer-membrane protein P5,OMP5）,建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体 pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为 1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA 方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。 相似文献
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为了建立猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)抗体间接ELISA检测方法,该研究首先克隆了MRP编码基因的部分片段,构建了重组表达质粒pET28a-mrp,并将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,获得了58 000的重组蛋白,经Ni柱纯化后,免疫印迹显示MRP重组蛋白能够被猪链球菌2型抗体特异性识别。以纯化的MRP重组蛋白作为包被抗原,建立了猪链球菌2型MRP抗体检测间接ELISA方法。该ELISA方法的包被抗原浓度为10μg/ml,待检血清1∶50稀释,检测临床48份未免疫猪链球菌2型疫苗健康猪的血清。当效价(S/P)≥0.22时,判定待检血清样品为阳性;当S/P<0.22时,判定待检血清样品为阴性。运用建立的方法能特异性识别猪链球菌2型抗体,人工感染猪的MRP抗体于攻毒后14～28 d出现峰值,同时提示临床健康猪群的免疫功能存在个体差异。 相似文献
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本文介绍用酶联免疫吸附检测法(ELISA)检测牛白血病病毒(BLV)的抗体。以FLK-BLV细胞培养液制备的免疫扩散(ID)用的粗提抗原,经ConA-Sepharose 4B亲和层析,或先经乙醚处理,再经Sephadex G-150层析等方法,分别提取了gp和p抗原。用gp抗原作ELISA,对91份牛血清样品进行检测,阳性共67份,比微量免疫扩散(MID)高14％,两者的符合率为85％。用p抗原作ELISA对240份牛血清样品进行检测,阳性占162份,比MID法高12％,两者的符合率为87％。用gP抗原对33份样品和用p抗原对160份样品进行三次重复试验,它们的变异系数在10％以内的分别为100％和92.5％。ELISA抑制试验表明,p抗原和gP抗原对BLV抗体的特异性良好。 相似文献
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采用健康鸡脾脏Ｔ淋巴细胞体外诱生粗制参考鸡白细胞介素２（ＩＬ—２），并进行５０％和８０％饱和度硫酸铵盐析，以去除大部分致分裂原伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）和小牛血清蛋白．继用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶过滤柱色谱，可得到两个ＩＬ—２活性峰．第１活性峰组分分子量（ＭＷ）２６．ｇＫＤ、等电点（ＰＩ）５．８５，为二聚体形式存在的高活性ＩＬ—２．第２活性峰组分ＭＷ１２．１ＫＤ，ＰＩ６．２５，为单体形式存在的低活性ＩＬ—２．经此法制备的高活性参考鸡ＩＬ—２使用过程中活性稳定，是可靠的ＩＬ—２检测参考系统． 相似文献