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为了分离纯化得到文蛤体内的抗菌活性蛋白，以灭活的副溶血弧菌诱导的方法，通过紫外分光光度计法测定其粗提品的蛋白质含量，并进行抗菌活性检测，同时利用硫酸铵沉淀法对粗提物进一步纯化、SDS-PAGE泳检测纯度。结果显示，文蛤经副溶血弧菌诱导后，产生的抗菌物质在短时间内达到高峰，随后逐渐下降，大约在4h时对大肠杆菌抑制率最高；诱导4h时抑制率与对照相比无显著差异（P〉0．05）。在经过硫酸铵沉淀后，SDS-PAGE电泳显示条带较多；进行SephadexG-50凝胶过滤层析的最佳条件为洗脱流速0．2ml／min、样品浓度3．0mg/ml。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2015,(19)
国内外研究表明通过对奶牛血液及乳汁中孕酮水平的检测能有效的用于奶牛发情鉴定、妊娠诊断及繁殖障碍性疾病的监测。本研究旨在制备鼠抗孕酮单克隆抗体,为奶牛孕酮免疫学检测技术提供研究基础。实验采用碳化二亚胺方法合成孕酮完全抗原,经SDS-PAGE电泳及紫外分光光度计扫描鉴定,结果表明孕酮免疫抗原(P4-BSA)及检测抗原(P4-OVA)合成制备成功。乳化后的P4-BSA经皮下免疫小鼠,三免后血清效价可达到1∶64000。采用聚乙二醇化学融合方法进行细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,最终获得一株能稳定分泌Ig G1型抗孕酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株,诱生的腹水经辛酸硫酸纯化制备,抗体的特异性较好。 相似文献
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注射疫苗可以引起猪发生过敏反应,尤其品种猪发病率较高,治疗不及时极易导致动物死亡。过敏反应主要由免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)介导发生,分离纯化到猪体内的IgE是研究猪过敏反应ELISA检测方法的前提和基础。IgE在正常人血清中浓度极低,正常猪血清中IgE含量还未见有确定报道。本试验研究的目的是通过人工感染方法对感染绦虫试验猪血清样品中的IgE进行提取,并且通过SDS-PAGE电泳对血清中提取的IgE进行鉴定,从而建立猪血清IgE的最佳提取方法。 相似文献
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《畜牧与兽医》2016,(9):67-71
以健康猪血为原料从其中分离纯化抗菌肽和免疫球蛋白,将抗菌肽与免疫球蛋白联合应用于罗斯308肉鸡进行应用研究。720羽健康肉鸡随机分为4组,每组设3个重复,每个重复60羽,设正常对照组、抗菌肽、免疫球蛋白、两者混合物组,已拌料方式饲喂,检测各组鸡体重;各组分别随机抽取10羽鸡,取每只鸡的胸腺、脾脏和法氏囊,称重并计算脾脏指数、法氏囊指数、胸腺指数;取鸡腹腔巨噬细胞检测吞噬指数和吞噬率;静脉采血后检测鸡血清中Ig G、Ig M及补体C3、C4水平。结果表明:抗菌肽与免疫球蛋白联合使用组的肉鸡与对照组、单独添加抗菌肽组和单独添加免疫球蛋白组相比:平均日增重显著增高(P0.05),料重比显著降低(P0.05),肉鸡脾脏指数、巨噬细胞吞噬率和血清中Ig G、Ig M、补体C3含量显著提高(P0.05)。结果提示,日粮中添加抗菌肽和免疫球蛋白可以提高肉鸡生产性能并改善免疫功能。 相似文献
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从猪血中提取高质量基因组DNA的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
经研究改进 ,建立了一种从猪血中提取高纯度全基因组DNA的有效方法。经 2 %琼脂糖凝胶电泳检测 ,DNA带型整齐集中 ,无拖尾现象 ,证明DNA分子片段完整 ,没有降解。紫外分光光度计检测 ,DNA的OD2 60 /OD2 80 达 1.75± 0 .0 5 ,证明所提DNA质量较好 ,用于PCR扩增 ,可以得到满意的扩增效果 ,且避免了用苯酚等剧毒试剂 ,是一种理想的DNA提取法 相似文献
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非洲猪瘟病毒(ASFV) B318L是ASFV编码的晚期蛋白，具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用，本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L，经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 (DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中，采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白，利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达，采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性，采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示，在约60 ku处出现特异性条带，且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达；纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带，经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血，采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb)，经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果，采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示，制备的... 相似文献
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人血清中分离纯化鸡IgG、IgM的实用方法 总被引：4，自引：0，他引：4
本试验用绵羊红细胞免疫鸡,免疫后5天采血,制备富集IgM血清。应用硫酸铵粗提、Sepharose-4B分子筛层析方法,从富集IgM的鸡血清一次性分离提取高纯度的IgM及纯度较高的IgG,DEAE－52纤维素离子交换层析进一步纯化,获得电泳纯的IgG。经鉴定该方法制备的IgG,IgM完全可以满足免疫学实验要求,从一份血清样品中同时纯化IgG、IgM两种免疫球蛋白,既省时又节省原料。 相似文献
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利用联产工艺从动物血液中提取生物活性物质 总被引：2，自引：0，他引：2
向猪血中加入抗凝剂,将血浆和血细胞分离,从血浆中提取生物活性物质.首先用硫酸铵以"三阶段盐析法"分步从血浆中提取粗纤维连接蛋白(FN)、粗免疫球蛋白和血浆杂蛋白;然后用丙酮和醋酸钠等从血细胞中提取血红素,并用氯仿、吡啶和冰醋酸等进行有机萃取纯化;最后再从溶血过滤所得的初级残渣中提取超氧化物歧化酶(SOD),并用丙酮等进行有机萃取纯化.结果表明,从1 000 mL猪血中可提取粗FN、免疫球蛋白、血浆杂蛋白、血红素和SOD分别为100 mg、5.0 g,33.0 g,10.2 g和1 945.3 U,并证明免疫球蛋白具有与抗生素同样的抑菌作用. 相似文献
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北京鸭胸腺和法氏囊中淋巴细胞膜蛋白成分的初步比较 总被引：7，自引：0，他引：7
北京鸭屠宰后,取其胸腺、法氏囊,经淋巴细胞分层液分离后,再经尼龙棉柱得到胸腺细胞(T-C)和法氏囊细胞(B-C),其中一部分用以提取细胞膜蛋白,并用SDS-PAGE电泳进行鉴定分析.用完整细胞和提取的膜蛋白分别作为包被抗原,兔抗鸭胸腺淋巴细胞多克隆抗体(RADTS)和兔抗鸭免疫球蛋白(Ig)轻链多克隆抗体(RADLCS)作为第一抗体进行间接ELISA试验,对所提膜蛋白成分加以区分、比较.结果表明:北京鸭T-C、B-C膜上存在多种共同的膜蛋白成分,并且胸腺细胞上有类似于Ig轻链的成分,但其数量低于法氏囊细胞上的数量. 相似文献
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为了分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并制备该蛋白的多克隆抗体,试验用rProtein A FF亲和层析和Superdex200 Increase 10/300GL分子筛的方法分离纯化鲤鱼血清免疫球蛋白M(IgM),并通过SDS-PAGE对纯化蛋白的部分特性进行分析;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多抗血清,用ELISA法检测抗血清效价。结果表明:从鲤鱼血清中分离纯化出鲤鱼IgM蛋白,纯化后纯度可达99.53%;重链和轻链的分子质量分别为81.3 ku、26.4 ku;兔抗鲤鱼多抗效价高达1∶640 000以上。说明试验所采用的rProtein A FF亲和层析法可提取到高纯度的鲤鱼IgM,适合在实验室纯化鱼类IgM。 相似文献
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为了从妊娠4~5个月健康孕牛血清中分离得到纯化的早孕因子(EPF),通过DEAE-Sepharos F.F离子交换层析,CM–Sepharose F.F离子交换层析,Con A-Sepharose 4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl 6B亲和层析分离纯化技术,从孕牛血清中分离出纯化出EPF。采用玫瑰花环抑制实验(Ea-RIT)对各阶段产物EPF活性进行检测,最终纯化出具有早孕因子活性的HE-2成分。将HE-2经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)出现分子量为53.6KU蛋白质条带。该方法得到分离纯化的EPF,为进一步研制早孕因子单克隆抗体的制备做准备。 相似文献
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长白猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化 总被引：1，自引：0，他引：1
对猪血清用PEG-6000进行预处理后,用甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的猪MBL样品.然后进行还原性的10%SDS-PAGE电泳,测定分子量与纯度.得到纯化的猪血清MBL分子有3种单体,分子量分别为33kDa、36kDa和56kDa.表明猪血清中MBL是以多聚体形式存在,而且具有糖基化位点.本研究为进一步研究猪MBL的生物学特性提供了基础. 相似文献
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应用建立的SDS—蔗糖密度梯度超速离心法,纯化了从兔肝组织中粗提的兔病毒性出血症病毒。通过血凝、电镜观察、SDS-PAGE、琼脂双向免疫扩散、免疫印迹等试验,证明SDS—蔗糖梯度柱分离的病毒纯度高,具有4种结构多肽。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(2)
为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。 相似文献