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1.
为建立冷冻原肠中细菌基因组DNA的直接提取法,采用震荡洗脱、金属网过滤和梯度离心相结合的方法,对2份冷冻原肠样品进行前处理;对经前处理后的原肠样品,采用酚/氯仿法提取细菌基因组DNA,然后进行琼脂糖电泳和OD_(260)/OD_(280)比值测定;以细菌基因组DNA为模板,用PCR技术扩增细菌16S rDNA并构建克隆文库,并从2个文库中各随机挑取3个菌落进行16S rDNA的PCR鉴定和DNA测序。结果显示:样品提取的DNA浓度、纯度较高,OD_(260)/OD_(280)比值介于1.8～2.0;挑取的6个菌落中,1个为阴性,剩余5个为阳性,为肠球菌属(Enterococcus)和魏斯氏菌属(Weissella)的5种细菌。结果表明,本研究提取的原肠细菌基因组DNA质量较好,可用于非培养法研究冷冻原肠中细菌的多样性。本研究解决了因缺乏原肠细菌基因组DNA提取方法,无法进一步应用现代分子生物学方法研究冷冻原肠细菌的多样性、菌群组成结构和动态变化等难题。 相似文献
2.
为了研究拜城油鸡盲肠细菌物种多样性,本研究采用基于16SrDNA基因序列系统发育分析的免培养方法进行细菌物种多样性分析,以盲肠内容物样品总DNA为模板,利用细菌通用引物扩增16SrDNA基因,构建16SrDNA基因克隆文库,并对文库中的插入序列进行RFLP分析。结果表明:随机挑选的252个克隆为阳性克隆,阳性率为65.7%,经过RFLP筛选出95个不同图谱的重组克隆并测序,比对分析后发现:拜城油鸡盲肠细菌分属于厚壁菌门(Firmicutes)(65.26%)、拟杆菌门(Bacteroidetes)27.37%)和变形菌门(Proteobacteria)(4.21%)。在纲水平有梭菌纲(Clostridia)、拟杆菌纲(Bacteroidia)和ε-变形菌纲(Epsilonproteobacteria)相对含量最多,分别占总菌的64.21%、26.32%和4.21。在科水平上以瘤胃菌科(Ruminococcaceae)(21.05%)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)(20%)和理研菌科(Rikenellaceae)(12.63%)相对含量最多,为优势科。在属水平上仅有31.58%的序列可以鉴定到属,Lachnoclostridium的相对含量最多,占总菌的12.63%,其次为另枝菌属(Alistipes)和瘤胃梭菌属(Ruminiclostridium)。拜城油鸡盲肠内容物中的细菌组成具有丰富的多样性,并有新细菌分类单位的潜在资源,值得进一步进行开发研究。 相似文献
3.
为了解褐黄血蜱的带菌情况及其公共卫生意义,本研究在无菌条件下采集褐黄血蜱中肠内容物,提取细菌总DNA为模板,采用通用引物PCR扩增细菌16S r DNA V3区,经DGGE电泳回收DGGE 16个优势条带,并选取其中13个条带进行测序分析,结果显示,选取条带分别与立克次氏体属、柯克斯氏体属、假单胞菌属、葡萄球菌属、大肠杆菌属等高度相似。采用传统细菌学方法,从中肠内容物培养分离到2株细菌,经鉴定其中1株为蜡样芽胞杆菌。对各地区褐黄血蜱半饱血雌成蜱和吸血雄成蜱中肠菌群结构分析结果表明其带菌情况基本相同,但饱血雌成蜱3个地区间具有较大的差异;而饱血雌蜱和其它两种状态下的蜱肠道菌群也有差异。贝纳柯克斯氏体、菊欧文氏菌、肺炎克雷伯菌及软腐果胶杆菌是褐黄血蜱中肠内的优势菌。本研究利用PCR-DGGE技术分析褐黄血蜱中肠内容物,为蜱传播疾病的研究奠定基础。 相似文献
4.
采用松鼠源肠道样品进行细菌分离培养和细菌16SrRNA基因PCR扩增、测序分析,并进行纸片扩散法药敏试验。结果显示,在33只赤腹松鼠肠道中分离出117株细菌,赤腹松鼠肠道内细菌类群主要有葡萄球菌属(金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、松鼠葡萄球菌)、埃希菌属(大肠埃希菌)、芽胞杆菌属(蜡样芽胞杆菌、Weihenstephanensis芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、Samanii芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌)、肠球菌属(粪肠球菌)、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌)、假单胞菌属(荧光假单胞菌)、明串珠菌属(肠膜样明串珠菌);粪肠球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对大部分试验药物高度敏感,其他细菌对部分受试药物耐药。赤腹松鼠肠道细菌种群具有多样性,且存在天然耐药现象。本研究为进一步研究野生动物体内细菌携带天然耐药基因提供了素材,也为森林旅游开发的安全性评估及环境保护提供了参考。 相似文献
5.
应用16SrDNA克隆文库的方法,分别建立健康和患子宫内膜炎水牛子宫内细菌的16SrDNA克隆文库,并通过序列分析和同源性比对确定细菌的系统发育学地位。结果显示,产后14d水牛子宫内的细菌主要属于梭杆菌门(Fusobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)和变形菌门(Proteobacteria)。患子宫内膜炎组(M组)中有38.89%克隆的属于梭杆菌门(Fusobacteria),序列比对分析表明,这些序列和Fusobacterium necrophorum subsp有最高的的相似度(99%)。另外46.67%的克隆属于拟杆菌门(Bacteroidetes),其中Bacteroides heparinolyticus和Porphyromonas levii在这个门中所占比例最大,分别为55.95%和42.86%,属于厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteri)的克隆较少,所占比例分别为7.22%和6.67%,但是这2个门中的细菌种类相对丰富。仅仅只有0.56%属于放线菌门(Actinobacteria)。健康组(H组)中,26.56%的克隆属于梭杆菌门(Fusobacteria),并且和Fusobacterium necrophorum subsp的相似度最高(99%),32.81%的克隆属于Firmicutes,这些克隆中的61.9%与Clostridium cadaveris的相似性最高(≧97%),35.94%的克隆属于Bacteroidetes,其中56.52%的序列与Bacteroides heparinolyticus相似性最高(99%)。克隆中属于Proteobacteria的比例较低(4.69%)。结果表明,Fusobacterium necrophorum subsp、Bacteroides heparinolyticus和Porphyromonas levii可能是引起水牛产后子宫内膜炎的主要致病菌。厚壁菌门细菌Clostridium cadaveris,拟杆菌门细菌Porphyromonas somerae、Bacteroides pyogenes可能有利于子宫内膜的恢复。 相似文献
6.
《中国兽医学报》2015,(7):1099-1102
采用PCR-DGGE技术分析了镰形扇头蜱雌成蜱中肠内容物、唾液腺、虫卵的菌群结构。无菌条件下采集镰形扇头蜱雌成蜱中肠内容物、唾液腺、虫卵,提取细菌总DNA;以通用引物扩增细菌16SrDNA V3区;DGGE电泳,回收、克隆、测定DGGE优势条带。结果表明,饱血和半饱血雌蜱中肠菌群结构相同,中肠内容物、唾液腺和虫卵部分细菌相同;9条明显条带的序列分别与柯克斯体属(Coxiella sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、涅斯捷连科菌属(Nesterenkonia)、共生菌(Symbiotic bacteria)和未培养土壤细菌的16SrDNA V3区序列高度相似。分离到2株细菌,为模仿葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌。 相似文献
7.
利用MiSeq测序技术分析锦江牛瘤胃细菌多样性 总被引：1，自引：0，他引：1
《动物营养学报》2016,(1)
本研究旨在利用MiSeq高通量测序技术揭示锦江牛瘤胃细菌组成及多样性。选用3头装有永久性瘤胃瘘管的锦江牛成年公牛[体重(400±20)kg],采集瘤胃液样品后提取细菌DNA,对瘤胃细菌的16S rDNA序列V4~V5区进行MiSeq测序,分析物种的丰度、分布及α-多样性。结果表明:3个样本共获得56 763条高质量16S rDNA序列,946个分类操作单元(OTU),锦江牛瘤胃细菌丰富度指数Chao指数、Ace指数分别为836、841,α-多样性指数Shannon指数、Simpson指数分别为4.96、0.021 5;经过物种注释,15个门、23个纲、26个科以及44个属在所有样品中被鉴定。在门水平,拟杆菌门(Bacteroidetes)(64.37%)、厚壁菌门(Firmicutes)(21.20%)和变形菌门(Proteobacteria)(7.59%)数量最多;在纲水平,主要包括拟杆菌纲(Bacteroidia)(52.88%)和梭菌纲(Clostridia)(17.03%);在科水平,主要包括普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)(36.26%)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)(9.33%)和毛螺菌科(Lachnospiraceae)(4.89%);在属水平,优势细菌主要包括普雷沃氏菌属(Prevotella)(28.97%)、帕拉普氏菌属(Paraprevotella)(3.08%)、理研菌属(Rikenella)(2.28%)、梭菌_Ⅳ(ClostridiumⅣ)(1.77%)、解琥珀酸菌属(Succiniclastium)(1.62%)和瘤胃球菌属(Ruminococcus)(1.53%)。结果证明,锦江牛瘤胃细菌多样性相对较低;锦江牛瘤胃中最优势菌门是拟杆菌门,其次是厚壁菌门;普雷沃氏菌属是锦江牛瘤胃中最优势细菌属。 相似文献
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《动物营养学报》2016,(6)
本试验对笼养和散养蛋雏鸡和成年蛋鸡的小肠中细菌种类进行分析。取8周龄雏鸡和30周龄产蛋鸡整个小肠内容物,进行聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析,结合指纹克隆,研究鸡小肠细菌菌群的DNA指纹图谱。结果显示,共从蛋鸡的肠内容物中分离出39株细菌,有4个菌门,包括变形菌(2株,5.1%),拟杆菌(4株,10.2%),放线菌(5株,12.8%)和厚壁菌门(21株,53.8%),以及7个环境样品(不可培养细菌)。不同阶段蛋鸡不同肠段存在不同的细菌种类,在成年母鸡和自由放养鸡肠道中的细菌种类比雏鸡和笼养鸡丰富。所有分离细菌中,共分离得到10株乳酸菌,除陪伴粪球菌外,其余9株乳杆菌作为微生态制剂后备菌保存。结果提示,饲养模式和饲养阶段对蛋鸡肠道中细菌群落种类分布有很大影响,散养模式细菌群落更丰富,成年鸡较雏鸡肠道细菌多。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(11)
以1日龄岭南黄肉鸡(♂)为试验动物,研究在日粮中长期添加亚剂量硫酸新霉素对黄羽肉鸡回肠黏膜菌群动态变化与组成的影响。于1、7、14、21、28、35及42日龄分别从A组(饲喂基础日粮)和D组(饲喂基础日粮+50mg·kg-1硫酸新霉素)采集鸡回肠肠段并提取黏膜细菌基因组DNA,采用PCR-DGGE技术分析鸡回肠黏膜菌群结构,同时应用16SrDNA基因序列技术,建立42日龄鸡回肠黏膜细菌16SrDNA的随机克隆文库。DGGE图谱分析发现,A、D两组1~28日龄回肠黏膜细菌结构存在明显差异,其相似性为40%~60%;A、D两组肉鸡1~35日龄菌群结构发生变化的程度不同,A组的动态变化值(%change)为9%~33%,D组的动态变化值为17%~45%。分析回肠文库发现,A组文库有94个序列,共产生9个OTUs(Operational Taxonomic Units),其中未知菌属(微杆菌属)所占克隆总数比例最大为48.94%(46/94),其次是乳杆菌属占38.30%(36/94);D组文库有93个序列,共产生6个OTUs,其中乳杆菌属所占克隆总数比例最大为49.46%(46/93),其次是微杆菌属占45.16%(42/93);两组回肠文库中其他菌属的组成种类与数量存在差异,且未发现与大肠杆菌相关的序列。A组与D组42日龄肉鸡回肠黏膜菌群的组成及多样性存在差异,尤其是乳杆菌属的组成比例,这种差异可能是抗生素持续压力的影响所致。 相似文献
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研究为分离获得荷斯坦奶牛瘤胃内容物中的细菌,建立系统进化树,获取有益菌种。采用培养组学技术和16S rDNA分子鉴定方法相结合,对3头健康荷斯坦奶牛瘤胃内容物中细菌进行分离培养。共分离得到105株细菌,包括肠球菌属(Enterococcus)共15株14.29%,芽孢杆菌属(bacillus)共11株10.48%,不动杆菌属(Acinetobacter)共14株13.33%,葡萄球菌属(Staphylococcus)共22株20.95%,梭菌属(Clostridium)共1株0.95%,狭义梭菌属(Clostridium sensu stricto)共2株1.90%,短杆菌科(Brevibacteriaceae)共2株1.90%,链球菌属(Streptococcus)共11株10.48%,气球菌属(Aerococcus)共4株3.81%,柠檬酸杆菌属(Citrobacter)共14株13.33%,杆菌属(Brachybacterium)共1株0.95%,克雷伯氏菌属(Klebsiella)共1株0.95%,普罗维登斯菌属(Providencia)共3株2.86%,沙雷氏菌属(Serratia)共4株3.81%。结果中所占比例最高的菌属是葡萄球菌属;系统进化树分析和GenBank中的同源性比对结果发现,从细菌门、纲、目、科、属、种分析,分支明确;26个菌种同源性都在95.01%~100%之间。分离纯化出11株芽孢杆菌属(Bacillus)细菌具有潜在益生菌活性。可作为饲料添加剂饲喂荷斯坦奶牛。 相似文献
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魏静 《四川畜牧兽医学院学报》2009,(4):28-32
在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。 相似文献
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以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。 相似文献
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本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。 相似文献
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REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air. 相似文献
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