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鸭瘟抗体检测方法研究 总被引：12，自引：0，他引：12
将鸭瘟组提病毒经Sephadex G200柱层析纯化后作为包被抗原，以健康鸭IgG提纯后免疫羊，制备羊抗鸭IgG，并用过碘酸钠法进行辣极过氧化物酶标记，建立了检测鸭瘟病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。经对不同血清样品的检测，表明此方法特异性高，重复性好，操作简便，适于大批鸭群抗体水平监测和流行病学调查，为合理免疫和科学预防提供了技术手段。 相似文献
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将鸭瘟病毒（DPV）CHv株经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心和蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对其进行了标准化研究,确定了最佳工作条件,研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性进行了研究。结果显示,4.75μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好的特异性和敏感性,1∶100稀释的待检血清样品反应后D405 nm值换算为抗体效价的标准直线方程为y=1.573＋3.552x（r=0.953,n=40）。试剂盒在4℃保存3个月或-20℃保存10个月后各项性能都很好。应用该试剂盒对皮下注射、口服和滴鼻免疫DPV弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗DPV特异性IgG抗体效价进行了测定,皮下免疫鸭于第6 d,口服和滴鼻免疫鸭于第9 d可在血清中检测到DPV特异性抗体,且至第60 d时依然可检测到高效价抗体。证实,该试剂盒可用于鸭瘟的血清流行病学调查和鸭场免疫抗体水平的监测。 相似文献
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取9只人工感染兔瘟病毒免的肝、脾、肾、心、肺等组织，经福尔马林固定，用生物素蛋白过氧化物复合体的直接免疫组织化学法检p免疽病毒抗体。结果，在坏死变性肝组织细胞，一系列肝附件、肝细胞荣和脾脏中均检测到免枯病毒抗体，并为对被检肝溶浆作免瘟病毒的W～蛋白印迹分析和病毒粒子免疫室电镜观察所证实。因此，免疫组织化学法是检测兔瘟病毒抗体简便而有效的方法。免疫组织化学法检测组织中兔瘟病毒抗体@俞渭章 相似文献
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利用抗小鹅瘟病毒酶标单克隆抗体建立了一种新的诊断方法一免疫酶琼脂扩散试验.该方法在检测小鹅瘟病毒抗原时,灵敏度比常规琼脂扩散试验高256倍左右.可直接检出鹅胚尿囊液及病料组织中的小鹅瘟病毒.15例自然病例肝组织的检验结果与病毒分离结果一致.在检测血清抗小鹅瘟病毒抗体时,灵敏度比常规琼脂扩散试验提高256倍。该方法灵敏、简便、快速、准确,适用于小鹅瘟临床诊断及免疫鹅抗体水平的监测. 相似文献
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猪乙型脑炎（Epidemic Encephalitis B）是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）引起的一种急性人兽共患传染病,猪主要特征表现为高热、流产、产死胎和公猪睾丸炎,感染率较高,发病率和死亡率较低,对国内养猪业和公共卫生都带来了巨大威胁。间接ELISA抗体检测方法具有价格低廉、操作简单、高通量、敏感性高、特异性强等优点,是猪乙型脑炎血清学抗体水平检测的主要方法。研究利用猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒对2012-2013年采集于山东、河南、河北等地的526份免疫猪血清样品进行了抗体检测,并进行了间接ELISA抗体检测试剂盒与乳胶凝集试验抗体检测试剂盒的符合率研究。旨在评价猪乙型脑炎间接ELISA抗体检测试剂盒的临床适用性及准确性,进而评价其临床应用效果,同时掌握我国猪乙型脑炎疫苗的群体免疫效果,了解我国部分地区猪乙型脑炎的免疫现状,为猪乙型脑炎的综合防控提供参考依据。 相似文献
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猪口腔液应用于检测猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体监测在国内尚处于起步阶段。通过研究在猪场利用猪口腔液监测商品猪的PRRS抗体,并同时采集血液,比较口腔液和血液中PRRS抗体水平,进而为猪PRRS抗体监测提供新思路。对母猪和仔猪免疫PRRS弱毒疫苗,免疫后分不同时间段分别进行耳缘静脉采血和使用自制口腔液采样套装采集口腔液。然后利用2种ELISA试剂盒分别检测口腔液和血液PRRS抗体。结果表明,利用商品化ELISA试剂盒进行口腔液和血液中的PRRS抗体水平检测发现其具有相关性,尤其是免疫6周后,使用2种试剂盒检测的口腔液和血清中PRRS抗体结果符合率可达100%,故可选择测定免疫6周后口腔液抗体用于PRRS免疫效果评价。所以,猪口腔液采样是一种实用、有效的猪群PRRS抗体监测方法,可根据监测需求确定监测方案。 相似文献
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通过SPF鸡胚进行鸭瘟病毒培养和增殖,采用反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法(sucrose-density-gradient-centrifugation,SDGC),纯化后病毒粒子作为ELISA包被抗原,从而建立了鸭瘟病毒间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。经对不同血清样品的检测,表明此方法具有操作简便、敏感性高、特异性好的优点,特别适用于大批鸭群的抗体检测和流行病学调查,为合理免疫和疫病预防提供有效的技术手段。 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(3)
应用RT-PCR技术扩增了猪瘟病毒的E0基因片段,并将其分别克隆到pGEX-4T-1与pET-28a载体,获得了pGEX-4T-1-E0与pET-28a-E0重组表达质粒。以IPTG诱导表达的纯化GST-E0和His-E0重组蛋白为包被抗原,建立检测猪瘟病毒E0抗体的间接ELISA方法。采用方阵滴定法,确定出GST-E0抗原和His-E0抗原的最佳包被量分别为50 ng/孔和100 ng/孔,血清最佳稀释度为160倍。对80份猪瘟阴性血清样品进行了检测与统计学分析,确定出GST-E0和His-E0重组蛋白的间接ELISA方法的临界值分别为0.167和0.176。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,本试验建立的基于GST-E0和His-E0蛋白的间接ELISA方法均具有特异、敏感和重复性好等优点。应用GST-E0和His-E0的间接ELISA方法及IDEXX E2抗体检测试剂盒平行检测88份猪血清样品,结果显示基于GST-E0和His-E0的间接ELISA方法与IDEXX试剂盒的符合率分别为78.41%和84.09%。以猪瘟病毒接毒细胞为抗原,应用免疫荧光试验(IFA)对His-E0间接ELISA和IDEXX检测试剂盒检出的阴性与阳性血清样品进行了验证,结果IFA与His-E0间接ELISA方法的符合率为93.18%;IFA与IDEXX试剂盒的符合率为90.91%,表明本试验所建立的基于His-E0的间接ELISA方法用于检测猪瘟抗体优于IDEXX公司检测E2抗体的试剂盒。该方法为鉴别E2亚单位疫苗免疫后的猪群中是否存在野毒感染提供了技术手段。 相似文献
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《中国畜牧兽医文摘》2015,(1)
本文采用猪瘟抗体间接ELISA和阻断ELISA检测试剂盒对320份血清样本进行猪瘟抗体检测,符合率达80.63%,对检测结果不一致的样品,利用抗体中和试验(FVNT)做定性检测,结果表明,间接ELISA试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ELISA试剂盒,猪瘟间接ELISA试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。 相似文献
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分别采用A、B、C三个公司的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对168份临床免疫鸡血清和标准阴阳性血清进行新城疫抗体监测方法的比对试验与研究,比较间接ELISA和血凝抑制(HI)两种试验方法的相关性。研究结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化间接ELISA抗体检测试剂盒的检测结果与血凝抑制(HI)试验的阳性符合率分别为98%、96.7%、90.2%;阴性符合率分别为86.7%、80%、86.7%;阴阳性总体符合率分别为97%、95.2%、89.9%;A、B、C三个公司的ELISA抗体检测试剂盒的检测时间分别为2.5、3、3h。产品价格分别为1100、800、700元。比较发现,间接ELISA方法是一种快速、敏感、特异的血清学诊断方法,不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒在敏感性、特异性和检测时间上均存在较大的差异,综合分析,B公司生产的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒成本较低,敏感性较高,可以用于临床样本的大规模检测。 相似文献
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为了满足我国现阶段猪伪狂犬病病毒(PRV)高频突变引发新疫情诊断的需求,本实验通过生物信息学分析比较,设计合成了针对PRV g B糖蛋白高度保守的抗原优势表位区肽段,命名为g B872。以此肽段为包被抗原,经条件优化建立了新型的PRV-g B间接ELISA抗体检测方法。该ELISA方法检测结果显示,其仅对PRV血清检测为阳性,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒(O型)、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等主要猪源病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较强的特异性;最低检测下限血清稀释度为1∶128,高于IDEXX PRV/ADV g B抗体检测试剂盒检测下限稀释度(1∶4),表明该方法敏感性高;批内、批间重复性试验结果显示,变异系数均低于10%,重复性良好。利用该方法与Bio Chek PRV-g B抗体检测试剂盒检测90份临床血清样品,对比结果分析显示,两者阳性符合率为100%,阴性符合率为97.67%,总体符合率为97.78%;同时,采用该方法与IDEXX-g I(gE)和IDEXX-g B试剂盒分别对野毒感染血清和疫苗免疫血清同时检测,该方法可以准确识别野毒阳性血清和疫苗免疫阳性血清,与IDEXX两种试剂盒的结果一致。本研究建立的间接ELISA检测方法对PRV疫苗免疫效果评价、流行病学调查及防控提供了可靠的方法。 相似文献
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小鹅瘟病毒VP3基因真核表达质粒在小鼠中的免疫效果 总被引：1，自引：0，他引：1
检测小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因真核表达质粒在小鼠中的免疫效果。大量提取本实验室已构建的含有GPVVP3基因的真核表达质粒pVAXI／VP3和空载体pVAXI,分两组进行两点肌肉注射免疫小鼠,共免疫4次。利用MTY法检测免疫小鼠的T细胞增殖活性,间接ELISA法检测免疫小鼠血清中GPV特异性抗体的水平。淋巴细胞增殖指数,免疫小鼠与正常小鼠差异不显著。间接ELISA检测结果表明,pVAXI／VP3质粒免疫组小鼠血清中GPV特异性抗体水平,显著高于空载体对照组和阴性对照组。已构建的GPVVP3基因真核表达载体可以诱导小鼠产生明显的体液免疫,为小鹅瘟核酸疫苗的研究奠定基础。 相似文献
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分别采用商品化的酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测试剂盒和血凝抑制（HI）试验方法对152份临床血清样本和标准阴阳性血清进行新城疫病毒（NDV）抗体检测。比较间接ELISA和HI两种方法的相关性。研究结果表明，间接ELISA和HI两种方法呈显著相关，二者间的相关系数为0．9261：间接ELISA和HI两种方法检测NDV抗体的阳性符合率为96．8％，阴性符合率为92．9％，间接ELISA方法是一种敏感、特异、快速的血清学诊断方法，可以用于临床样本的大规模检测． 相似文献
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本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体的间接ELISA方法。将BVDV的非结构蛋白NS3基因克隆到原核表达载体pET-32a中进行表达,将纯化后的蛋白作为包被抗原,优化ELISA条件,建立了BVDV抗体间接NS3-ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检测,结果均较好。用所建立的NS3-ELISA方法检测从广西各牛场采集的475份牛血清样品,检出率为24.8%,与商品化试剂盒比较,符合率为97%。结果表明,本研究建立的NS3-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,适用于BVDV的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。 相似文献
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使用国产的4种猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒(VP1-ELISA)、猪口蹄疫O型液相阻断ELISA检测试剂盒(LB-ELISA)、猪口蹄疫正向间接血凝试剂盒、猪O型口蹄疫病毒ELISA抗体检测试剂盒(O-ELISA)同时检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后的50份血清样品,阳性率分别为98.0%、94.0%、54.0%、90.0%。同时使用农业部规定的3种试剂盒分别检测20份血清样品的抗体滴度发现,VP1-ELISA试剂盒和LB-ELISA试剂盒阳性符合率为95%,平均抗体滴度相差0.7,与IHA试剂盒符合率为55%,平均抗体滴度相差3.8,故LB-ELISA试剂盒可以用来评价合成肽疫苗免疫的抗体,而IHA试剂盒不能用来检测合成肽疫苗免疫的抗体。 相似文献
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将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。 相似文献