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1.
为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。 相似文献
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《新疆农业大学学报》2019,(2)
旨在表达马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)的SrtA蛋白并分析其免疫效果。以该菌基因组为模板,用PCR方法扩增SrtA基因,构建重组质粒pET-28a-SrtA,诱导表达SrtA,并以纯化蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体水平效价及抗体亚型。首次免疫后第45天,对免疫小鼠用S.equi攻毒,测定免疫保护力、菌体载量和脾细胞表面CD4~+T和CD8~+T分子的表达,并对脏器进行病理组织学观察。结果表明,成功表达了SrtA蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白分子量为27 kDa。初次免疫45 d后,小鼠血清抗体效价达1∶218 700,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主;脾淋巴细胞中CD4~+T和CD8~+T细胞表达量升高;攻毒保护率可达75%;SrtA免疫可降低攻毒小鼠肺、脾、肝、肾组织的荷菌量。SrtA免疫可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。 相似文献
3.
【目的】评价中国不同地区猪源马链球菌兽疫亚种分离株抗原性的差异,为猪链球菌病疫苗的研制提供指导。【方法】取从国内10省市分离的10株猪源马链球菌兽疫亚种分离株,分别制备灭活疫苗,免疫12周龄ICR小鼠,用同源菌株和ATCC35246株攻击。【结果】以同源菌株攻击免疫小鼠,除CG-74-63株外,其余菌株的保护率均在90％以上;而以异源菌株ATCC35246进行攻击,免疫小鼠的免疫保护率为80%～100%。【结论】中国不同地区的猪源马链球菌兽疫亚种分离株的抗原性差异不大,单一菌株制备的疫苗具有保护性。 相似文献
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为研究马链球菌马亚种新疆分离株 ZX 表面蛋白的免疫原性,用化学法提取该菌的表面蛋白,用 SDSG PAGE检测提取的表面蛋白,并将提取的表面蛋白与该菌免疫实验兔后产生的抗体及康复马血清反应,利用 WestG ernGblotting和 ELISA试验分析其免疫原性.结果表明,SDSGPAGE电泳可检测到分子量为45,34,33,30,27,20,16 kDa 7条主蛋白带.提取的7条蛋白带多数可与全菌免疫兔的抗体及康复马体内的抗体发生特异性的结合.用提取蛋白和全菌包被 ELISA对马血清的检测表明,二者的阳性吻合率在86．0％.表明提取的表面蛋白具有理想的免疫原性. 相似文献
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马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验 总被引：7，自引：0，他引：7
将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。 相似文献
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为研究马链球菌马亚种新疆株SeM基因的分子特征,分析新疆地区马链球菌马亚种的分子流行特征以及为马腺疫的防治提供依据,对分离并鉴定的5株马链球菌马亚种提取基因组、扩增并克隆其SeM基因(GenBank登录号分别为:KJ486792、KJ486793、KJ486794、KJ486795、KJ486796),采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行疏水性、抗原性及三级结构分析,并与Genbank登录菌株的SeM基因序列进行系统进化分析和比较。克隆获得的SeM基因长度为1 530bp,包含1个1 527bp的完整开放阅读框,编码509个氨基酸;新疆分离株SeM基因与Genbank登录分离株SeM基因同源性为98.0%~99.4%。结果表明,新疆分离株KJ486793、KJ486796与美国分离株亲缘关系较近,属同一个进化分支,另外3株新疆分离株KJ486792、KJ486795、KJ486794构成一个独立分支。 相似文献
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猪源马链球菌兽疫亚种中国分离株类M基因特性分析 总被引：2，自引：1，他引：2
【目的】阐明国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因的特性，为疫苗研制提供指导。【方法】利用PCR技术，扩增国内9省市从1974～2003年分离的9株马链球菌兽疫亚种类M基因，并进行克隆、测序及序列分析。【结果】发现7株类M基因长度为1 137 bp，含一个阅读框，CG-74-63和CP-0104株的长度分别为1 143 bp及1 125 bp。除1株关节炎分离株CP-0104外，引致败血症的8株菌类M基因的核苷酸同源性高达95.4%～99.9%，推导的相应氨基酸序列同源性高达92.1%～100%。9株猪源菌与马源菌株及人源菌株类M基因的核苷酸同源性分别为81.6%～87.0%、81.7%～91.8%。9株猪源分离株类M蛋白信号肽、C末端细胞锚定区的序列均高度同源；除CP-0104外，其余8株高变区高度同源。【结论】国内不同区域猪源马链球菌兽疫亚种分离株类M基因同源性高。 相似文献
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《新疆农业大学学报》2018,(4)
为制备马腺疫链球菌(Streptococcus equi subspecies equi)GAPDH蛋白的多克隆抗体,研究其免疫保护作用。以S.equi分离株为研究对象,利用PCR技术扩增其GAPDH基因并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌。诱导表达重组蛋白,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以纯化后的GAPDH重组蛋白免疫小鼠,用酶联免疫吸附法、攻击保护试验检测其免疫效果。结果显示,成功构建了pET-28a-GAPDH原核表达载体,纯化获得30 kDa重组蛋白。该蛋白质能特异性识别该菌抗血清,诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,在初次免疫后第45天,抗体水平效价可达1∶24 300,攻击保护率可达87.5%。该GAPDH重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护效果。 相似文献
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《新疆农业大学学报》2017,(1)
为比较金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)重组质粒ClfA、FnBPA-A以不同组合方式和不同剂量免疫昆明小鼠的免疫效果。提取构建的ClfA、FnBPA-A重组质粒,分别以不同组合和不同剂量免疫昆明小鼠。通过ELISA法检测血清中抗体水平、效价以及对S.aurues的识别能力;通过攻毒后的免疫保护力、脏器菌体含量以及病理组织学观察评价不同免疫策略的免疫效果。结果显示ClfA、FnBPA-A以及联合组免疫后均能产生有效免疫应答和免疫保护力。各项免疫指标的检测均显示联合免疫组的免疫效果优于ClfA、FnBPA-A单独免疫组,高剂量免疫组的免疫效果优于低剂量免疫组。高剂量联合免疫组抗体效价可达1∶12 800,高于其他免疫组,免疫保护力可达100%。脏器菌体含量以及病理组织学观察结果也表明高剂量联合免疫组(ClfA+FnBPA-A)有较强抵抗S.aurues感染的能力。 相似文献
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【目的】停乳链球菌（Streptococcus dysgalactiae）可引起猪关节肿大和运动障碍，大大降低饲料报酬和猪场经济效益，近年研究提示停乳链球菌类马亚种（Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis）是一种潜在的人兽共患病病原。对猪源停乳链球菌类马亚种进行研究，可为防治该病提供数据，具有公共卫生意义。【方法】2022 年 3 月广东省某规模化猪场出现仔猪关节肿大和跛行症状。为确定病因，无菌采集发病仔猪关节液进行细菌分离培养，对优势菌进行形态观察、生化鉴定、16S rDNA 基因序列分析、小鼠致病性试验及抗生素敏感性试验，并对其毒力基因进行 PCR 鉴定。【结果】根据分离菌株的形态特征、生化特性，结合 16S rDNA 序列测定与在线 BLAST 分析结果，确定其为链球菌属的停乳链球菌类马亚种。药敏试验结果表明，分离菌株对头孢曲松、头孢克洛、青霉素 G、头孢氨苄、头孢吡肟、环丙沙星、磺胺异恶唑、大观霉素、恩诺沙星敏感，对丁胺卡那、多西环素、多粘菌素 B、诺氟沙星、氨苄西林次敏感，而对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、林可霉素、阿莫西林表现出耐药性。毒力基因 PCR 鉴定结果表明，分离菌株的基因型为 eno+napr+cfb-lmb+bca-bac-scpB+cyl+。小鼠致病性试验结果表明，分离菌株导致小鼠内脏病变和死亡，具有显著的致病性。【结论】首次报道了华南地区有关致病性猪源停乳链球菌病例，研究结果为临床猪源停乳链球菌病的防治提供参考。 相似文献
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为研究马链球菌兽疫亚种对家禽的致病性,采集流行地区发病鸡和鸽的肺脏,分离了8株链球菌,并利用染色镜检、生化试验和PCR方法进行鉴定,结果为3株属马链球菌兽疫亚种,5株属粪肠球菌。在此基础上,选择1株马链球菌兽疫亚种内蒙分离株,经腹腔注射途径人工感染SPF (Specific pathogen free chicken) 鸡和肉鸡,攻毒后死亡率分别为40%和80%。剖检观察到出血性肺炎、气囊炎和心包炎,尤其是肉鸡出现60%的支气管栓塞病变,这与临床病理学变化相似。此外,采用微量肉汤测定法测定8个临床分离菌株测定对15种药物的最小抑菌浓度(Minimum inhibition concentration,MIC),结果显示10株链球菌对于氟苯尼考、莫西沙星、甲磺酸加替沙星、乳酸环丙沙星及强力霉素高度敏感,MIC值均小于7.813 μg/mL。分离株对于泰乐菌素、磷霉素钠、螺旋霉素和阿莫西林高度耐药,MIC值大于250 μg/mL。试验提示马链球菌兽疫亚种可能是家禽气囊炎一个重要的病原之一,临床防治中应使用敏感性高的抗菌素。 相似文献
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为了解马腺疫链球菌新疆流行株的基因型、菌株的遗传多样性和系统发育特征,采集新疆地区某马场患病马匹下颌组织病样,分离马腺疫链球菌（Z422、JMC111）,并对分离菌株进行生化特性和耐药特性检测,然后进行16S rRNA基因序列比较和SeM基因分子分型。结果显示,2株分离菌均为马链球菌马亚种,对头孢噻呋、头孢西丁、左氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、磺胺异恶唑敏感,对青霉素、头孢呋辛、氨苄西林、克拉霉素耐药。基于16S rRNA基因序列的分析显示2株菌均归属于 Ⅰ 群,基因分型鉴定为新的SeM基因型：seM 208和seM 209。 相似文献
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为制备猪丹毒丝菌灭活疫苗并评价其对小鼠的免疫效力,将3株受试菌株(AEr21、AEr31和AEr32)培养至稳定期,经终质量浓度为2 mg/L甲醛灭活后,用矿物油佐剂ISA 201 VG制备成猪丹毒丝菌灭活疫苗,并与商品化疫苗分别免疫小鼠。应用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体水平和细胞因子含量(IL-4、IL-10、MCP-1、TNF-β、IFN-γ),流式细胞术测定CD4~+/CD3~+、CD8~+/CD3~+ T细胞亚群百分比,采用灌胃和腹腔注射方式测定免疫保护率,并采集小鼠脏器(肺脏、肝脏、脾脏、肾脏)制备病理组织切片,观察病理变化。结果显示,AEr21、AEr31、AEr32全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组二次免疫小鼠后的血清IgG抗体效价分别为1∶3 200、1∶6 400、1∶1 600、1∶6 400、1∶3 200(以全菌体超声裂解物为包被抗原)和1∶3 200、1∶6 400、1∶3 200、1∶25 600、1∶6 400(以重组SpaA为包被抗原);商品化弱毒疫苗组诱导小鼠产生的细胞因子水平和CD4~+/CD3~+、CD8~+/CD3~+ T细胞比例最高,与灭活疫苗组差异显著,各灭活疫苗组间差异均不显著;AEr21、AEr31、AEr32全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组对灌胃和腹腔注射攻毒小鼠的免疫保护率分别为80%、100%、100%、100%、100%和80%、100%、60%、100%、100%;AEr21和AEr32全菌体灭活疫苗组的病理组织变化较AEr31全菌体灭活疫苗组和商品化弱毒疫苗组、灭活疫苗组更显著。表明受试菌株(AEr31)与矿物油佐剂ISA 201 VG制备成的猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫小鼠后不仅可产生较高水平的细胞免疫和体液免疫,还可完全抵抗强毒株的攻击。 相似文献
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【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。 相似文献
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比较了3种苦马豆素(Swainsonine,SW)人工抗原对小鼠的免疫原性,筛选出最佳的蛋白载体,为制备疯草毒素疫苗奠定基础。活性酯法制备SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原,冷冻干燥后,紫外分光光度法测定偶联率。将56只昆系小白鼠随机分为SW-OVA大剂量组(A组)、SW-OVA小剂量组(B组)、SW-BSA大剂量组(C组)、SW-BSA小剂量组(D组)、SW-HSA大剂量组(E组)、SW-HSA小剂量组(F组)和空白对照组(G组),每组8只。A~F组分别接种3种SW人工抗原,首次免疫抗原的大、小剂量分别为50μg/只和100μg/只,第15天进行第2次免疫,抗原量均为第1次免疫抗原量的1.5倍,第29天进行第3次免疫,抗原量均为第2次免疫抗原量的1.5倍,G组对照,注射等量生理盐水。第28天开始检测血清中SW抗体效价。紫外光谱测定结果显示,本试验制备的SW-OVA、SW-BSA、SW-HSA 3种SW人工抗原偶联率分别为13、10和19。ELISA测定结果显示,A和B组的SW抗体效价一直保持很高的水平,A和B组小鼠血清的SW抗体效价于第98天分别到达最高峰13(log2)和12(log2);C~F组的SW抗体效价较低。结果证实,SW-OVA作为理想的免疫原,能够刺激小鼠的免疫应答,诱导产生很高的SW抗体,在防治动物疯草中毒方面具有理想的应用前景。 相似文献
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在前期筛选出2株毒力强、抗原性好、遗传稳定的猪链球菌2型(SS2)疫苗菌株(HF2、HF3株)并分别制成灭活疫苗(采用ISA 201 VG矿物油佐剂)的基础上,进一步与SS2商品化灭活疫苗(HA9801株,铝胶佐剂)同步免疫小鼠,利用间接ELISA、流式细胞术、免疫攻毒试验、细菌定植试验和病理组织学观察等方法测定小鼠血清中IgG抗体效价,细胞因子含量(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1),外周血中CD4+/CD3+、CD8+/CD3+ T细胞亚群含量,攻毒保护率,组织荷菌数和病理组织变化等指标。结果显示,二免7 d后,HF2、HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组的血清IgG抗体效价分别为1:25 600、1:12 800、1:25 600;HF2灭活疫苗组的IL-4、IL-10含量显著高于HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组,IFN-γ、TNF-β含量显著高于HF3灭活疫苗组,但MCP-1含量显著低于HF3灭活疫苗组;HF2和HF3灭活疫苗组的CD4+/CD3+ T细胞比率均显著低于HA9801商品化灭活疫苗组,但CD8+/CD3+ T细胞比率差异不显著;HF2、HF3灭活疫苗和HA9801商品化灭活疫苗对小鼠的攻毒保护率均为100%;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、脾脏组织荷菌数显著低于HF3灭活疫苗组;HF2灭活疫苗组小鼠的肺、肾、脾脏病理变化较HF3灭活疫苗组和HA9801商品化灭活疫苗组轻微。综合结果表明,由SS2(HF2株)制备的ISA 201 VG佐剂灭活疫苗免疫小鼠后不仅可产生较强的免疫应答,还可完全抵抗强毒株的攻击。 相似文献
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从辽南肉鸡场的病死鸡体内分离到5种不同菌株的病原菌。通过培养特性、菌落形态、染色特性、生化试验等一系列鉴定,确定这5种菌株中有1株为兽疫链球菌、2株为禽链球菌、3株为金黄色葡萄球菌。致病性实验表明2株链球菌呈β溶血,1株呈α溶血,呈α、β溶血的菌株对小白鼠的致病性为100%。将5种菌株单独进行药敏试验时抗生素对这些菌有较好的效果,并且选择药物范围较广。而用混合菌进行药敏试验时药物敏感效果均不显著。临床肉鸡两种菌混合感染时病程轻,则能治愈,重症鸡极少有治愈,需要淘汰,对肉鸡的养殖业造成很大的经济损失。 相似文献
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羊源链球菌的分离鉴定 总被引：3，自引：0，他引：3
为了确定重庆市山羊败血性链球菌病的病原，并研究其生物学特性，为有效防治该病提供科学依据和指导，作者从具有典型败血症和纤维素性胸膜肺炎病变的南江黄羊中分离到5株羊源链球菌，经血清学、生物学等试验证明为该病的病原。该菌革兰氏染色阳性、β溶血，瑞氏染色可见英膜，大多呈短链状。能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、杨苷；能水解淀粉和精氨酸；马尿酸钠水解、胆汁溶菌和美蓝还原试验阴性。以1号菌株制备的抗原能与病羊及康复羊血清产生凝集反应，而所有血清不能与羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种间接血凝抗原发生反应。分离菌腹腔接种小鼠全部致死。分离菌株对青霉素、磺胺甲基异恶唑具抗药性，对氨苄青霉素、环丙沙星、头孢曲松钠高敏。根据形态学、培养特性、生化特性及动物试验结果，初步认为属于马腺疫链球菌兽疫亚种。 相似文献