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1.
据谢氏(1990)报道的分离 E.tenella 裂殖子的方法,采用0.25%trypsin+0.75%Taurodeoxy-Choli Acid 消化液消化、纱布过滤、离心洗涤等程序,探讨分离 E.necatrix.E.acervulina 和 E.brunetti 裂殖子的效果。结果得出:E.acervulina E.brunetti E.necatrix 收获裂殖子的产量平均每只鸡为0.6～2.8亿、0.3～0.5亿、5.8～37.5亿。最适收获上述三种球虫裂殖子的时间为人工接种后80～84小时、95小时、120小时。作者认为采用此法能获得大量纯化的裂殖子,可供生化、免疫等方面的研究应用。本文还对人工接种剂量及鸡龄与收获裂殖子效果进行了讨论与分析。 相似文献
2.
EtMIC-2表达产物对鸡三种艾美耳球虫的保护试验 总被引：5，自引：1，他引：4
鸡艾美耳球虫病由隶属顶复门7种艾美耳球虫（E.tenella、Enecatrix、E.acervulina、E.naxima、E.brunetti、E.praecox、E.mitis）引起，常混合感染，有很高的发病率和死亡率，轻者则影响鸡的增重和饲料转化率。微线是顶器的结构之一，位于子孢子和裂殖子前端，EtMIC-2是其50kDa左右的酸性蛋白，在虫体入侵时表达，该蛋白可能在虫体入侵时起重要作用。用Pet载体经原核表达该蛋白，7、14日龄经口服、肌注不同剂量工程活菌和菌体裂解蛋白二次免疫鸡，免疫后1周用3种艾美耳球虫（E.tenella、E.acervulina、E.maxima）攻虫，发现相对增重率随菌体蛋白含量增加呈现增加趋势。E.tenella攻虫表现最有效的是口服PBS200ug活菌组为96%，E.ac-ervulina、E.maxima分别为96%、87%。从攻虫后7～14d卵囊排出曲线看，每天排卵囊数和相对卵囊产量均低于红对照；相对卵囊产量,E.tenella攻虫后，口服PBS 200ug活菌组最低，为17%，E.acervulina、E.maxima攻虫后，口服PBS 200ug裂解菌组最高，分别为90%、93%。从增重与卵囊产量来看，EtMIC-2对E.tenella、E.ac-ervulina和E.maxima这3种球虫有一定的免疫保护作用，尤其口服200ugPBS活菌时，对E.tenella保护作用最明显。说明来源于E.tenella子孢子的Etmic-2基因的表达产物对E.tenella、E.acervulina和E.maxima3种球虫有一定的免疫保护作用。 相似文献
3.
为研究柔嫩艾美耳球虫不同发育时期Etron2基因的转录水平差异,选取E.tenella生活史中的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子、第二代裂殖子,分别提取总RNA,反转录为cDNA;选择Etactin作为参照基因,Etron2为目的基因,设计实时荧光定量PCR的引物,分析在E.tenella生活史中不同发育阶段Etron2转录水平的差异。结果显示Etron2在未孢子化卵囊中转录水平最高,然后分别是裂殖子、孢子化卵囊和子孢子。在柔嫩艾美耳球虫发育过程中,Etron2基因可能在未孢子化卵囊阶段被转录储备,随着宿主细胞的刺激,得以大量表达,在入侵过程中发挥作用。 相似文献
4.
给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。 相似文献
5.
将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。 相似文献
6.
鸡球虫病四价活疫苗对毒害艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫的免疫效果观察 总被引：2，自引：0，他引：2
为评价一种商品化鸡球虫病四价活疫苗[柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫]对E.necatrix和E.tenella的免疫保护效果,本研究基于试验鸡血便记分、存活率、相对增重率、病变值、卵囊值及抗球虫指数(ACI)等指标对其免疫效果进行检测.结果表明,免疫攻虫组抗E.necatrix和E.tenella的ACI分别为157.3和135.6,均低于160,表明该球虫疫苗抗两种球虫的效果均为低效.然而,免疫攻虫组鸡血便数量、血便记分、增重、卵囊产量和病变记分等指标均优于阳性对照组.综合指标显示,该疫苗对E.necatrix和E.tenella具有一定的免疫保护力,但单纯采用疫苗并不能够达到防控鸡球虫病的目的. 相似文献
7.
巨型艾美耳球虫免疫对其它几种球虫的血清学反应和临诊抗感染交叉保护力的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
为探讨鸡艾美耳球虫种间交叉免疫这一尚有争议的问题,本文用ELISA方法检测了巨型艾美耳球虫（Eimeriamaxima）免疫血清与其它主要虫种（柔嫩艾美耳E．tenella、毒害艾美耳E．necatrix及堆型艾美耳球虫E．acervulina）抗原的血清学反应,同时观察了E．maxima免疫（1×104个卵囊/只）鸡遭受上述虫种大剂量（1×105个卵囊／只）强毒攻击后的死亡率和肠道病变,对临诊交叉保护力进行了评估。结果表明,E．maxima免疫血清与E．tenellaE．acervulina可溶性抗原有不同程度的交叉反应;E．maxima免疫后用E．tenella,E.acervulina,E.necatrix大剂量强毒攻击,分别有70％、40％、6％的鸡获得了完全保护;25％、60％、27％的鸡获得了部分保护。 相似文献
8.
《畜牧兽医学报》2017,(11)
蛋白质翻译后O-糖基化修饰普遍存在于真核生物、细菌和古细菌,多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(polypeptide:N-acetylgalactosaminyltransferase 2,ppGalNAc-T2)是O-糖基化反应的限速酶。基因组数据分析揭示艾美耳球虫具有O-糖基化反应途径。为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)蛋白质翻译后糖基化修饰及其关键酶的药靶效用,对Et ppGalNAc-T2基因进行了克隆,并检测其在E.tenella不同发育阶段的表达动态。根据EuPathDB中所预测Et ppGalNAc-T2基因序列设计引物,以RT-PCR方法扩增获得Et ppGalNAc-T2的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pGEX-6p-1进行诱导表达。提取E.tenella广东株未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段的总RNA,以qRT-PCR法检测Et ppGalNAc-T2转录水平的动态变化。结果表明,Et ppGalNAc-T2的全长ORF为1 983bp,编码660个氨基酸,在E.coli Transetta(DE3)可溶性表达。qRT-PCR结果显示,Et ppGalNAc-T2转录水平随发育阶段不同而有显著差异,子孢子阶段表达水平最高、而在孢子化卵囊则几近不能检出。结果为进一步研究EtppGalNAc-T2的功能提供了试验基础。 相似文献
9.
《畜牧与兽医》2016,(10):7-12
为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组蛋白去乙酰化酶2A(Et Sir2A)的生化功能及其对生活史发育的潜在调节作用,以柔嫩艾美耳球虫甘肃株为例,检测其在不同发育阶段表达量的差异。以基因组数据预测的编码序列为模板设计引物,采用RT-PCR的方法扩增得到Et Sir2A的全长ORF,构建p MAL-C2X-Et Sir2A重组表达质粒并进行原核表达;提取未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段/时期的总RNA,采用qRT-PCR方法检测Et Sir2A的转录动态变化。测序结果显示,克隆的Et Sir2A ORF序列全长909 bp,编码302个氨基酸,并能在大肠杆菌原核系统中成功表达;qRT-PCR结果显示,Et Sir2A在不同发育阶段mRNA转录水平差异显著,在未孢子化卵囊阶段最高,第二代裂殖子阶段最低。结果为进一步研究Et Sir2A功能和开发新型抗球虫药物提供了数据基础。 相似文献
10.
新疆阿拉尔某鸡场球虫种类调查 总被引：1，自引：0，他引：1
为了了解阿拉尔市某鸡场鸡球虫种类及感染情况,采用群体采样法分别采集新鲜粪便并检出阳性粪便,对检出的阳性粪便采用饱和盐水漂浮法和离心沉淀法进行卵囊分离;显微镜下观察卵囊、最短孢子化时间、最小潜在期和病理变化,进行虫种鉴定。最后得出该鸡场感染有堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）、巨型艾美耳球虫（E．maxima）和柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）,该鸡场球虫感染严重,且为混合感染。 相似文献
11.
鸡胚接种毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix的免疫研究 总被引：1，自引：1，他引：1
给15、17、19日胚龄的鸡胚经羊膜腔分别接种不同剂量的毒害艾美耳球虫Eimeria necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子,出雏后在无球虫环境中笼养,收集2~7日龄间全部粪便,以饱和盐水漂浮法检查卵囊的产生,并于17日龄时以1.2×105个/鸡的同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、病变计分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果表明,孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种后对鸡胚的孵化率无明显影响,所有接种组在出雏后2~7日龄间均能检获后代卵囊,攻虫后各免疫组的相对增重率由攻虫对照的38%~42.9%提高到73.2%~90.5%,病变计分减少率达50%~74.9%,相对卵囊产量为攻虫对照组的28.1%~60.2%,表明以一定剂量的E.necatrix孢子化卵囊、孢子囊或子孢子经羊膜腔免疫接种鸡胚,可诱导鸡在出雏后笼养条件下对同源艾美耳球虫的免疫保护力;比较不同剂量、不同胚龄的免疫效果,发现在试验设定条件下于17日胚龄接种8×104个子孢子/胚的效果最好。 相似文献
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33个小型鸡场球虫流行病学调查 总被引：3，自引：0，他引：3
对天津、河北、山东等地33个小型养鸡场做了球虫病原学流行调查。根据卵囊形态，最短潜在期．裂殖体部位和大小，病变等具有鉴别意义的特征做综合鉴定。结果显示，33个鸡场都有球虫的感染。共鉴定出7个种．其中有28个鸡场有堆形艾美耳球虫(E．acervulina)，占84．84％．26个场有柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)．占78．78％．25个场有巨型艾美耳球虫(E．maxima)，占75．8％，早熟艾美耳球虫(E．praecox)，和缓艾美耳球虫(E．mitis)，布氏艾美耳球虫(E．brunetti)和毒害艾美耳球虫(E．necatrix)各1个场有．各占3％。只有一个鸡场单独感染一种球虫．其余都是混合感染2种或2种以上球虫，其中有2个鸡场混合感染4种球虫。 相似文献
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斯氏艾美耳球虫细胞化学的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
本文用组织化学技术对斯氏艾美耳球虫内生阶段和子孢子的细胞化学进行了研究。结果发现,多糖存在于第二代裂殖体、大配子体、大配子、合子、未孢子化卵囊和子孢子内。脂肪存在于第二代A型裂殖体、大配子、合子、未孢子化卵囊及子孢子内。整个内生发育阶段的虫体和子孢子均含有蛋白质。两型裂殖体、大、小配子体、合子和子孢子内均有Feugan反应阳性的DNA存在,而RNA存在于整个内生阶段和子孢子中。内生阶段虫体和子孢子均有ACP和SDH,然而ALP只存在于内生阶段,子孢子缺乏。 相似文献
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为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku。Real-timePCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段。另外,将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7ku大部分以可溶性存在。Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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安徽省部分地区鸡球虫种类及感染情况调查 总被引：2，自引：0，他引：2
目的了解安徽省五个县（区）鸡球虫种类及感染情况。方法采用群体采样法分别从个调查点采集新鲜鸡粪，检查粪样。阳性粪样采用饱和盐水漂浮和离心沉淀法进行卵囊分离。显微镜下观察卵囊进行虫种鉴定，并统计各调查点的鸡球虫感染率和感染强度等。结果检查172份鸡的新鲜粪样，得出鸡球虫感染率为100％；共检出7种球虫，经鉴定均隶属于艾美耳属，分别为毒害艾关耳球虫（Eimeria necatrix），堆型艾关耳球虫（E．acervulina），巨型艾关耳球虫（E．maxima），柔嫩艾美耳球虫（E．tenella），和缓艾美耳球虫（E．mitis），哈氏艾美耳球虫（E．hagani）和早熟艾美耳球虫（E．praecox）。结论鸡球虫在安徽省的这5个县（区）普遍存在，且有的调查点感染强度很高。 相似文献
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应用PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊子孢子cDNA表达文库中扩增得到鸡E.tenella杨凌株(YL)子孢子表面抗原3-1E基因。序列分析表明,E.tenella YL 3-1E基因的开放阅读框(ORF)为513个碱基,编码170个氨基酸,与报道的E.tenella甘肃株(GS)3-1E基因相似性为99.8%,两者推导的氨基酸序列相似性为99.4%;而与文献报道的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)美国株(US)3-1E基因序列的相似性为98.8%,推导的氨基酸序列相似性为98.8%。利用生物信息学和分子生物学软件对3-1E基因编码的蛋白进行结构预测,结果表明,该蛋白为结构松散的球状蛋白。将3-1E基因亚克隆到表达载体pGEX-4T-1,构建pGEX-3-1E重组质粒并在大肠杆菌BL21中进行表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表明成功地表达出了分子量为44.7 ku的融合蛋白。该研究为球虫基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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鸡球虫病是一种对养鸡业危害极大的寄生原虫病,病原包括9种艾美耳属球虫,其中以柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)及毒害艾美耳球虫(E.necatrix)致病性最强。集约化的商品肉鸡养殖场是球虫病暴发的最适宜场所。雏鸡感染球虫后,大量肠上皮细胞受损,出血。主要特征是患鸡消瘦、贫血和血痢。病愈的小鸡在长时间内不易复原,严重者死亡,其病死率有时高达40%。1病原及流行病学诊断1.1球虫生活史以柔嫩艾美耳球虫为例。鸡吞食了已孢子化的卵囊,卵囊壁在肌胃内被破坏,孢子囊进入小肠,子孢子逸出。到达盲肠的子孢子首先进入表层上皮细胞,再通过基底膜到达固… 相似文献
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海南省文昌鸡主要养殖地区鸡球虫种类及感染情况调查 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解海南省文昌鸡主要养殖地区鸡球虫种类及感染情况,采用群体采样法分别从各调查点采集新鲜鸡粪,检查粪样。阳性粪样采用饱和盐水漂浮和离心沉淀法进行卵囊分离,2.5%重铬酸钾培养保存。显微镜下观察卵囊进行虫种鉴定,并统计各调查点的鸡球虫种类、感染率和感染强度。结果显示,检查雏鸡(15～42日龄)、青年鸡(43～84日龄)和成年鸡(85～130日龄)粪样各300份,球虫的感染率分别为82.7%、78.0%和38.3%。共检出7种球虫,均属艾美耳属,分别为毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、哈氏艾美耳球虫(E.hagani)和早熟艾美耳球虫(E.praecox)。结果表明,球虫感染在海南省文昌鸡主要养殖地区普遍存在,雏鸡和青年鸡的感染率较高,且中度以上(包括中度)感染偏多;成年鸡的感染率相对较低,且多为轻度感染。 相似文献