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反向遗传学技术及在RNA病毒研究中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
RNA病毒的反向遗传学技术是指由病毒的cDNA克隆获取RNA病毒的一项技术,该技术通过人为加入DNA基因片段,实现了在DNA水平上对RNA病毒基因组的人工操作。反向遗传系统可以对RNA病毒直接进行遗传操作,为RNA病毒的分子生物学研究提供了一种强大的工具。自20世纪70年代后期第一例RNA病毒感染性克隆构建成功以来,RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这在很大程度上归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立。文章介绍了反向遗传学技术的基本特点、技术方法及其在正、负链RNA病毒的基因功能、致病机制及新型病毒载体等方面的研究及应用情况。 相似文献
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反向遗传操作技术是最近几年迅速兴起的一项分子生物学技术,它将解决对RNA病毒基因组难以操作的多年难题,并为负链RNA病毒的研究开创新的途径,使负链RNA病毒得以深入认识。目前,该技术已应用于多种负链RNA病毒的研究,特别在探寻甲型流感病毒基因组复制、转录和研发新型疫苗上发挥着重要作用,使甲型流感病毒研究工作取得了巨大进步,为大流感的再次流行及防控增添了新的研究方法和防控策略。文章就甲型流感病毒基因组特征、致病机理、新型疫苗及病毒载体的研究等最新进展进行了综述,重点介绍了反向遗传操作技术在甲型流感病毒中的应用。 相似文献
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反向遗传学(Reverse genetics)是由基因结构认识基因功能的科学,与之相关的研究技术称为反向遗传学技术(Reverse genetic manipulation).RNA病毒的反向遗传学是采用病毒的遗传物质,在培养细胞或易感宿主中重新拯救出活病毒或类似病毒物质.能够拯救病毒的遗传物质称为感染性克隆,一般是在细菌质粒中含有整个病毒基因组的cDNA拷贝,使得cDNA本身或从cDNA体外转录所得的RNA具有感染性.自1978年第1例RNA病毒Qβ噬菌体的成功拯救以来,各类RNA病毒的分子生物学研究取得了长足的进展,这主要归功于各种RNA病毒反向遗传系统的建立和发展. 相似文献
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RNA病毒反向遗传学的研究方法和应用 总被引：1，自引：0，他引：1
本文介绍了RNA病毒反向遗传学的主要研究方法,RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展及其在分子病毒研究和疾病防制种的应用及发展前景,着重介绍了感染性克隆构建的过程和拯救病毒时可能会遇到的问题。 相似文献
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小RNA病毒属于单股正链RNA病毒,包括肠道病毒属、鼻病毒属、心脏病毒属、口疮病毒属和肝病毒属等几个主要的属.口蹄疫病毒(FMDV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、丙型肝炎病毒(HCV)、脑心肌炎病毒(EMCV)是该科病毒的典型代表.小RNA基因组的末端具有非编码区(UTR),是病毒基因组复制的主要调控位点,3'非编码(3'UTR)区是复制酶的第一结合位点,其二级结构在病毒的翻译与复制过程中具有重要作用,该区是病毒复制酶识别并结合的位点,主要起始负链RNA的合成,3'UTR在病毒的翻译过程及感染性病毒粒子的形成过程中起着十分重要的作用.因此,研究小RNA基因组的3'端结构和功能可为确定复制与表达位点在非编码区的具体位置和主要特征,以及其他正链小RNA病毒基因组复制的研究奠定了理论基础. 相似文献
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反向遗传操作作为一种新兴技术在RNA病毒的研究中发挥着重要作用,本文介绍了RNA病毒反向遗传学的研究方法以及RNA病毒反向遗传技术的最新研究进展和应用前景. 相似文献
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Noda T Aoyama K Sagara H Kida H Kawaoka Y 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2005,67(3):325-328
Electron tomography (ET) is a new technique for high resolution, three-dimensional (3D) reconstruction of pleiomorphic macromolecular complexes, such as virus components. By employing this technique, we resolved the 3D structure of Ebola virus nucleocapsid-like (NC-like) structures in the cytoplasm of cells expressing NP, VP24, and VP35: the minimum components required to form these NC-like structures. Reconstruction of these tubular NC-like structures of Ebola virus showed them to be composed of left-handed helices spaced at short intervals, which is structurally consistent with other non-segmented negative-strand RNA viruses. 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reporoductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）基因组5′非翻译区（untranslated region,UTR）对病毒复制转录等过程至关重要,但其发挥作用的机制尚不清楚。本实验室将欧洲型PRRSV 5′UTR替换入北美型PRRSV弱毒株感染性克隆pAPRRS的骨架中,构建pAPLV5。经过DNA转染入MARC-145细胞系中,两次传代后,拯救出嵌合病毒vAPLV5。通过对嵌合病毒的全长测序发现,嵌合病毒基因组较亲本病毒发生了碱基突变,突变主要集中于Nsp2和Nsp9位置。将Nsp9位置（病毒的RNA依赖的RNA聚合酶,RNA-dependent KNA povymerase,RdRp）的4处突变位点引入嵌合病毒的感染性克隆pAPLV5,所构建的4个突变嵌合克隆转染MARC-145细胞后无需传代即产生细胞病变（cytopathic effect,CPE）,且P0代病毒滴度较原嵌合病毒vAPLV5高。通过半定量负链和亚基因组检测发现,突变嵌合病毒的RNA合成水平也较亲本嵌合病毒高。由此推测PRRSV 5′UTR功能可能与RdRp相关,异源的5′UTR通过突变RdRp来发挥其调控作用,完成病毒拯救过程。 相似文献
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新城疫是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一,特别是对养鸡业造成重大经济损失。利用分子生物技术已研究出了很多基因工程疫苗用于预防鸡新城疫,比如基因工程活载体疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗等。近年来随着反向遗传操作技术的发展,新城疫病毒已经被开发成病毒载体,可以携带外源基因研制新城疫病毒活载体疫苗,表达IBDV和IBV的新城疫活载体疫苗已经成功研制。本文将从新城疫病毒的分子生物学及疫苗方面进行综述。 相似文献
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RNA重组是RNA病毒普遍存在的变异方式之一,但仍有很多关键性问题尚未阐释清楚。目前认为重组机制主要有两种,复制型重组机制即模板转换（template-switch）,又称为copy-choice机制;另一种为非复制型重组机制,即断裂连接机制（breakage-religation）和类似于剪接的反酯作用（splicing-like transesterification）机制。由于重组在病毒进化变异过程中发挥着不同的作用,阐明重组机制有助于研究病毒进化变异和复制转录等生命周期过程。本文拟就RNA重组类型、重组机制、对RNA病毒重组的研究、重组的生物学意义及应用4个方面,综述RNA病毒重组机制及其研究进展。 相似文献
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Daito T Fujino K Watanabe Y Ikuta K Tomonaga K 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2011,73(9):1243-1247
Borna disease virus (BDV) is a non-segmented, negative-strand RNA virus that is characterized by nuclear replication and persistent infection. A unique feature of BDV is that it releases only a small number of infectious particles from infected cells. Although these characteristics might make it difficult to obtain a large amount of recombinant viruses in a reverse genetics system, the mechanism underlying the budding or assembly of BDV particle has remained largely unknown. In this study, as a first step toward understanding the virion formation of BDV, we investigated the intracellular distribution and mobility of the fluorescent marker fusion envelope glycoprotein (G) of BDV in living cells. Expression analysis revealed that fusion proteins seem to cleave into functional subunits and localize in the endoplasmic reticulum (ER)/Golgi apparatus, as well as the authentic BDV G. Furthermore, we demonstrated using fluorescence recovery after photobleaching analysis that BDV G fluorescence shows rapid recovery in both the ER/Golgi and plasma membrane regions, indicating that BDV G fusion protein may be a useful tool to investigate not only the maturation of BDV G but also the budding and assembly of BDV particles in living cells. 相似文献
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The influenza A virus genome consists of eight segments of negative-strand RNA. In previous study, we generated a recombinant influenza virus with nine segments by reverse genetics. In present study, we evaluated characteristics of the recombinant influenza virus. The recombinant virus exhibited similar property to wild-type virus on virion morphology, virion composition, plaque phenotype and other aspects. Whereas, the recombinant virus propagated to lower titers than did wild-type virus in cells and mice, and there was decreased protein level and vRNA incorporation in the recombinant virions compared to wild-type H9N2 virions. Our results indicated that influenza A virus with eight segments exhibits more advantages than the virus with nine segments. 相似文献
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Darpel KE Monaghan P Simpson J Anthony SJ Veronesi E Brooks HW Elliott H Brownlie J Takamatsu HH Mellor PS Mertens PP 《Veterinary research》2012,43(1):40
ABSTRACT: Bluetongue virus (BTV) is a double stranded (ds) RNA virus (genus Orbivirus; family Reoviridae), which is considered capable of infecting all species of domestic and wild ruminants, although clinical signs are seen mostly in sheep. BTV is arthropod-borne ("arbovirus") and able to productively infect and replicate in many different cell types of both insects and mammalian hosts. Although the organ and cellular tropism of BTV in ruminants has been the subject of several studies, many aspects of its pathogenesis are still poorly understood, partly because of inherent problems in distinguishing between "virus replication" and "virus presence". BTV replication and organ tropism were studied in a wide range of infected sheep tissues, by immuno-fluorescence-labeling of non-structural or structural proteins (NS2 or VP7 and core proteins, respectively) using confocal microscopy to distinguish between virus presence and replication. These results are compared to gross and microscopic pathological findings in selected organs from infected sheep. Replication was demonstrated in two major cell types: vascular endothelial cells, and agranular leukocytes which morphologically resemble lymphocytes, monocytes/ macrophages and/or dendritic cells. Two organs (the skin and tonsils) were shown to support relatively high levels of BTV replication, although they have not previously been proposed as important replication sites during BTV infection. The high level of BTV replication in the skin is thought to be of major significance for the pathogenesis and transmission of BTV (via biting insects) and a refinement of our current model of BTV pathogenesis is discussed. 相似文献
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重组在RNA病毒中很常见,但有关重组的许多关键问题目前尚无法解释。本文主要针对RNA重组的发生机制及其影响因素,解释重组频率发生变化的原因,阐述RNA重组未来仍需解决的问题。RNA重组是RNA病毒特殊的遗传信息交换方式,其频率在不同的RNA病毒中显著不同。目前,研究者普遍认为重组发生的机制可分为复制型、非复制型重组以及重配,并且借助新方法和新技术,逐渐了解了影响该过程的病毒和细胞因子。有研究表明,RNA病毒中RNA的重组和重配率非常高,这与RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的保真性相关。因此,深入了解病毒重组机制并发现其中的规律,可实现对新型病毒以及新疫情的预警预报,从而有预见性地控制疫病的发生和流行。 相似文献