大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因(fedA)的克隆与序列测定     

芦银华  徐建生  成大荣  董国雄  李俊宝 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2001,22(3):59-61

利用PCR技术 ,分别从产F18ab菌毛的猪水肿病大肠杆菌分离株G及产F18ac菌毛的大肠杆菌 8813株中扩增出 5 10bp左右的F18菌毛A亚单位基因 (fedA)。将这 2个PCR扩增产物按预定阅读框架克隆入pGEX 6p 1载体的谷胱甘肽S 转移酶 (GST)基因的下游 ,筛选获得阳性重组质粒 ,并对质粒中的插入序列进行测定。序列分析表明 :F18ab与F18ac的fedA基因的核苷酸序列同源性为 97.6 % ,推导的氨基酸序列同源性为 94.7% ,两者的主要区别在于F18acfedA基因的第 36 3bp处比F18ab多 3个核苷酸 ,并出现一个新的酶切位点 (NgoMI)  相似文献   

鸭IL-18基因克隆与序列分析     

韩先干  黄青云  尹会方  邓宪方  柯艳坤 《安徽农业科学》2008,36(9):3545-3547

[目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果]测序结果表明,广东水鸭的IL-18基因开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,分子量为23.2 kDa。序列分析表明,所获得的广东水鸭IL-18基因与GenBank中香港鸭的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为100%。它与鸡和火鸡的核苷酸同源性分别为86.9%和87.1%,而氨基酸同源性分别为96.5%和97.0%。[结论]进化树分析结果表明,鸭IL-18基因与鸡和火鸡进化关系较近。  相似文献   

大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因（fedA）的克隆与序列测定   总被引：6，自引：0，他引：6  

芦银华  徐建生等 《江苏农业研究》2001,22(3):59-61

利用PCR技术，分别从产F18ab菌毛的猪水肿病大肠杆菌分离株G及产F18ac菌毛的大肠杆菌8813株中扩增出510bp左右的F18菌毛A亚单位基因（fedA）。将这2个PCR扩增产物按预测阅读框架克隆入pGEX-6p-1载体的谷胱甘肽S－转移酶（GST）基因的下游，筛选获得阳性重组质粒，并对质粒中的插入序列进行测定。序列分析表明：F18ab与F18ac的fedA基因的核苷酸序列同源性为97.6%，的氨基酸序列同源性为94.7%，两者的主要区别在于F18ac fedA基因的第363bp处比F18ab多3个核苷酸，并出现一个新的酶切位点（NgoMI）。  相似文献   

河南良杂猪白细胞介素-18成熟蛋白基因的克隆及表达载体的构建     

郑兰兰  崔保安  贾云飞  陈瑞亮  陈红英  吕晓丽 《河南农业大学学报》2007,41(2):200-203

采集6月龄河南良杂猪的脾脏,分离淋巴细胞后直接提取总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行T-A克隆、测序,获得了河南良杂猪IL-18基因成熟蛋白序列.序列测定表明,pIL-18成熟蛋白基因核苷酸长度为474 bp,编码157个氨基酸.将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pQE30,构建重组质粒pQE-IL18,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确.  相似文献   

中国荷斯坦奶牛IL-18基因的克隆与真核表达研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

乔军  孟庆玲  陈创夫  才学鹏  刘佳旭  任艳  张辉 《江苏农业科学》2009,(4)

为了克隆并表达中国荷斯坦奶牛白介素18(interleukin,IL-18)基因,用牛白介素18基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后荷斯坦奶牛外周血单核细胞(PBMCb)总RNA进行RT-PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,将目的基因亚克隆到真核表达载体pGFP-C1中,构建了重组质粒pGFP-IL-18,转染BHK-21细胞,检测目的基因是否表达.结果:该基因全长582 bp,编码193个氨基酸,与羊、犬和猪IL-18基因相比,核苷酸序列有较高的同源性,但与小鼠和鸡IL-18基因相比有明显的种属差异,转染48 h后,可在转染细胞胞浆中检测到黄绿色的荧光,表明已成功克隆了中国荷斯坦奶牛IL-18基因,并实现了该基因在真核细胞中的表达.  相似文献   

广西鹅γ干扰素基因的克隆与序列分析     

胡丽萍  胡晓静  付薇  徐贤坤  何丹  刘棋  熊毅 《广西农业科学》2010,41(6):602-605

为进一步研究鹅干扰素（IFN）的分子生物学特性及抗病毒作用机理,提取经刀豆素（ConA）刺激培养的鹅外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增获得鹅IFN-γ基因,将其克隆至pMD18-T载体并进行序列测定分析。结果表明,克隆获得的广西鹅IFN-γ基因与GenBank上已公布的鹅IFN-γ基因核苷酸序列的同源性均高于99.2%、氨基酸同源性均高于98.2%;与其他动物的IFN-γ基因核苷酸及氨基酸序列比较,亲缘关系越远,同源性越低。  相似文献   

牛粘膜病病毒E1基因的克隆及原核表达     

何海娟  王君伟  李昭春  杨玉菊  杨志 《东北农业大学学报》2006,37(5):656-661

参考BVDVVEDEVAC株的基因组序列及E2基因的测序结果设计一对引物,扩增出预期585 bp的目的片段。扩增产物克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列VEDE-VAC株比较,二者的核苷酸同源性为100%,推导氨基酸同源性为100%。测序结果经同源性比较,克隆得到的基因与VEDEVAC株同源性最高。系统发生树分析推测E1基因与VEDEVAC株在进化上比较接近。将E1基因定向亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中,对阳性重组质粒转化的大肠杆菌BL21进行诱导,E1基因获得了成功表达。  相似文献   

减蛋综合征病毒PVⅢ蛋白基因的克隆与序列分析     

张春杰  吴志明  李银聚 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2004,32(7):25-28

根据减蛋综合征病毒PV 蛋白基因序列设计了1对特异性引物,应用降落PCR法对PV 蛋白基因进行了扩增。将扩增产物克隆至pMD18-T载体中,经酶切和PCR鉴定,初步证明了目的片段的正确性。进一步核苷酸序列测定表明,所扩增的基因片段长度为0.756kb,共编码250个氨基酸。  相似文献   

猪Mx1基因cDNA的克隆及序列分析     

李想  沈学文  李文贵  毕峻龙  杨贵树  尹革芬 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,26(6):771-776

 为获得云南本地猪Mx1基因cDNA序列,根据GenBank中猪Mx1基因的参考序列,设计合成3对引物。以云南本地猪外周淋巴细胞为样本,采用RT-PCR方法进行分段扩增,对扩增片段进行克隆,测序分析及序列拼接。结果表明,扩增的云南本地猪Mx1基因cDNA全长2546bp,开放阅读框1992bp,编码663个氨基酸,与GenBank中他猪种Mx1基因序列对比,核苷酸序列的同源性为99.4%～99.8%,氨基酸序列的同源性为98.8%～99.5%。成功获得云南本地猪Mx1基因的cDNA序列,为研究云南本地猪Mx1蛋白的抗病毒活性及作用机制奠定了基础。  相似文献   

吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测     

栾杨  张守发  薛书江  贾立军  其木格 《安徽农业科学》2009,37(23):10922-10923

[目的]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆与序列分析。[方法]从细胞培养的吉林株虫体中提取犬新孢子虫DNA,根据已发表的犬新孢子虫鲥G1基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR技术,扩增大新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,对经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。[结果]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆后,获得阳性重组质粒。克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列（AF132217）的同源性为99．0％,氨基酸序列同源性为98．8％。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达。[结论]该试验成功克隆重组质粒,为建立犬新孢子虫的高效表达系统奠定了基础。  相似文献