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胶体金法检测猪旋毛虫病的敏感性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
将3组试验仔猪分别人工感染旋毛虫幼虫1000条／头、5000条／头和25000条／头,感染后每7d抽血1次,采集全血和血清;感染后46d,将试验猪全部剖杀,取全血、血清和膈肌肉待检。所有样品均用胶体金试纸检测猪旋毛虫抗体和抗原,膈肌肉样品并需用显微镜检查有无旋毛虫包囊。结果表明,最早可于感染后21d,在低感染量试验组的1头仔猪的血清中检出阳性抗体;血清样品的抗体检出率高于全血样品;在血液和血清中未检出虫体抗原;抗体试纸条的检测结果较为准确可靠,而且敏感性明显强于抗原试纸条。建议在检疫检验工作中使用抗体试纸条检测血清或肌肉样品。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(5):931-935
基于上转发光免疫层析(UPT-LF)技术,旨在建立UPT-LF快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法。采用间接法制备UPT-LF试纸条,通过共价偶联使二抗山羊抗猪IgG和上转发光纳米颗粒(UCP)结合,并加入样品垫和被检血清结合,以旋毛虫肌幼虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因(WM5)表达的蛋白WM5为猪抗旋毛虫IgG特异性结合抗原,WM5(2 g/L)与兔抗山羊IgG(0.5 g/L)喷点于分析膜上作为UPT-LF试纸条检测带(T)与质控带(C),该试纸条命名为Tsp-UPT-LF。Tsp-UPT-LF通过对95份阴性血清检测,确定Tsp-UPT-LF的Cutoff值为0.099。Tsp-UPT-LF和ELISA分别对273份旋毛虫感染猪血清样本进行检测,总符合率为92.31%,一致性系数Kappa(K)值为0.837,表明两种方法具有高度一致性。Tsp-UPT-LF检测旋毛虫、猪囊虫、华支睾吸虫感染的猪血清Tsp-UPT-LF呈现对旋毛虫良好的特异性。Tsp-UPT-LF检测感染50 000条旋毛虫肌幼虫28 d猪血清为阳性,T/C值0.109,122 d阳性最强,T/C值为0.207,至425 d时阳性值有所下降,抗旋毛虫IgG阳性率为71.4%。本研究建立了基于UPT-LF技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法,为猪旋毛虫即时感染检测、确保食品安全提供了一种可参考的检测方法。 相似文献
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猪旋毛虫McAb快速ELISA法的应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究用保存在小鼠中的猪旋毛虫、旋毛形线虫（Trichinella spiralis)、犬旋毛虫、本地毛形线虫（Trichinella nativa)四种不同来源的旋毛虫隔离种接种断乳仔猪，定期用ELISA法检查抗体出现情况，剖杀后用鲜肉及冷冻不同时间的肉制成肉汁，进行ELISA抗体检测。结果表明：用ELISA法检出阳性的时间为：猪旋毛虫和T.spiralis在16天以后，犬旋毛虫和T.nativa在24天以后；鲜肉肉汁ELISA检测结果与其血清结果基本相同；冷肉肉汁检疫中，短期内冷冻对ELISA检测结果影响也不大。 相似文献
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以纯化的PRV抗原为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立了可检测PRV血清抗体的间接ELISA诊断方法。标定抗原的最佳包被量为0.802μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为60min,判定标准为OD 450nm值大于0.357为阳性,小于0.296为阴性,在0.296与0.357之间为可疑。该方法检测其他6种常见猪病病毒(CSFV、PCV-2、PRRSV、PPV、JEV、TGEV)的阳性血清均为阴性;与商品化ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为90.0%、87.1%、92.3%。本研究建立的PRV间接ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,为PRV免疫猪群抗体监测、快速诊断和PR流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。 相似文献
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A blocking enzyme-linked immunosorbent assay (B-ELISA) was developed to detect antibodies to Mycoplasma meleagridis (MM) in turkey sera. This assay was based on two mouse monoclonal antibodies recognising all MM strains tested but none of seven avian mycoplasmal species tested. Furthermore, their binding to the Tween 20 antigen was inhibited by serum from MM-infected birds. The B-ELISA test format was optimized. The cut-off was determined using a set of sera from MM-free turkeys. This B-ELISA was then compared with a commercial indirect ELISA (I-ELISA). Specificities of the two ELISA tests were not significantly different (100 or 99%, respectively). The sensitivity of B-ELISA was significantly higher than the I-ELISA when I-ELISA suspicious results were considered as negative. Testing sera from experimentally MM-infected animals showed that serum plate agglutination (SPA) test detected positive birds before both ELISA methods. Samples were collected in MM-infected commercial flocks and analyzed by SPA, ELISAs, MM-PCR or culture. Results showed that the sensitivity of the B-ELISA appeared superior to the I-ELISA. Moreover, the ability to detect maternal antibodies makes it a useful tool for eradication or control of MM infections. 相似文献
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A total of 384 sheep serum samples collected from two organised sheep farms was tested by dot immunobinding assay (DIA) and indirect enzyme-linked immunosorbent assay (I-ELISA) for the presence of bluetongue virus (BTV) antibodies. The results of both these assays were compared to find a sensitive, specific, rapid, easily performed and economical test for the diagnosis of bluetongue disease. DIA detected BTV antibodies in 210 samples (54.94%) and I-ELISA detected 157 positive samples (40.88%). Competitive ELISA (C-ELISA) was performed to check the discrepancies in I-ELISA and DIA. On the basis of these tests the overall agreement, relative specificity and sensitivity between ELISA and DIA were 75%, 87.6% and 100%, respectively. DIA was found to be a rapid, sensitive, easily performed and economical test as compared to ELISA. 相似文献
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间接ELISA检测奶牛乳房炎多联苗抗体方法的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
利用超声波破碎法制备无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌可溶性抗原。对3种破碎抗原最佳包被浓度及包被条件、血清样品工作浓度、封闭液、酶标二抗的最佳工作浓度及作用时间等反应体系进行筛选和优化，初步建立了间接ELISA法检测奶牛乳房炎多联苗3种菌血清抗体的方法。对24头泌乳牛进行抗体检测，结果表明该3种抗原反应体系一致，3种抗原最适包被浓度为4—6μg／mL．血清样品最佳稀释度为1：200，该方法具有快速、简单、特异性和重复性好等优点。 相似文献
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目的获得能够用于制备旋毛虫病快速检测试纸条的EsAg的单克隆抗体。方法应用旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原（ESAg）免疫诱导Balb／c小鼠,使小鼠产生较强的免疫应答,将免疫小鼠的脾细胞与NS0瘤细胞融合,利用Es45、ES49抗原通过间接ELISA对大量杂交瘤细胞培养上清的筛选,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的4株杂交瘤细胞。结果ES45和ES49（分子质量分别为45ku,49ku）分别被Ts-2D4、Ts-4C5和Ts-4H6、Ts-2G8单克隆抗体识别,与猪肺丝虫（Metastrongylus pudendotectus．MP）、囊虫（Cysticercus cellulosae,CC）、细颈囊尾蚴（Cysticercus tenuicollis,CT）、蛔虫（Ascaris suum,AS）、弓形虫（Toxoplasma gondii,TG）、住肉孢子虫（Sarcocystis miescheriana,SM）抗原反应测试表明,4株单抗与参试抗原均无交叉反应,所有单抗上清ELISA平均效价为1：1120,腹水ELISA平均效价为1．1×10^6,亲和力常数的平均值为6．12×10^9 L／mol。以金标免疫吸附试纸条原理为基础,利用制备的单抗成功研制了旋毛虫病快速检测试纸务,操作快速、无需设备及试剂,可以作为旋毛虫病的实时监测工具。结论ESAg单抗用于制备旋毛虫病快速诊断试纸条是理想的试剂。 相似文献
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旨在建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法。经琼脂糖凝胶层析纯化大豆抗原蛋白,以不同剂量皮下注射免疫小鼠,采用方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法,利用该方法检测小鼠免疫后血清抗体水平。通过方阵滴定法确定11S蛋白最佳包被浓度为5.0μg/mL,血清稀释倍数为1∶800;7S蛋白抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清稀释倍数为1∶1 600;两者的批内、批间系数均小于10%,重复性较好,通过ELISA法确定11S和7S蛋白的最佳免疫次数为2次,免疫剂量为1 000μg/kg。结果表明本试验初步建立大豆抗原蛋白抗体检测间接ELISA方法,具有很强的特异性、敏感性和重复性,可用于大豆抗原蛋白过敏反应的临床检测。 相似文献