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1.
为研究宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况，同时了解宠物犬携带blaCTX-M基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征，本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌，通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株，运用PCR检测blaCTX-M基因，药物敏感性试验测定blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型，PFGE分型和全基因组测序技术分析blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示，共分离到7株blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌，3株来自宠物肛拭子，4株来自宠物鼻拭子；药敏试验结果显示，7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药，但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示，其中3株细菌相似度为100%，而另外4株细菌相似度差异较大（<30%）。全基因组结果显示，7株菌共有5个ST分型，blaCTX-M基因分离的亚型为CTX-M-14型（n=5）和CTX-M-3型（n=2），同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出，目前宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低，但其多重耐药性较严重，本研究分离的耐药基因blaCTX-M、blaSHV亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足，需进一步关注宠物细菌耐药性，为后续防控提供依据。 相似文献
2.
《中国畜牧兽医》2020,(5)
为揭示广东地区鹅场动物和环境源大肠杆菌的耐药情况及超广谱β-内酰胺酶CTX-M的流行与传播特征,本研究从广东省江门及阳江市共10处鹅场采集鹅及环境样品199份,采用MALDI-TOF-MS法分离鉴定大肠杆菌。采用琼脂稀释法对菌株进行耐药性分析,采用PCR法检测头孢噻肟耐药菌中bla_(CTX-M)基因及其基因环境,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、接合转移和质粒复制子分型等方法探究bla_(CTX-M)基因的传播特征。结果显示,共获得196株大肠杆菌,对氨苄西林、多西环素、氟苯尼考和链霉素耐药率均超过50%,第三代头孢菌素耐药率为10%～25%,其中头孢噻肟耐药菌有49株(24.6%)。阳江地区大肠杆菌对受试药物的耐药率高于江门,且动物源高于环境源,尤其是头孢噻肟和头孢噻呋均存在显著差异(P0.05)。头孢噻肟耐药菌中共检出19株携带bla_(CTX-M)基因,包括bla_(CTX-M-55)(n=17)、bla_(CTX-M-27)(n=1)和bla_(CTX-M-65)(n=1),且bla_(CTX-M)基因阳性菌均可对5～11种药物耐药,呈现多重耐药的表型。bla_(CTX-M-55)基因环境均为ISEcp1-bla_(CTX-M-55)-orf477,且在ISEcp1与bla_(CTX-M)基因之间有3种长度的间隔序列;而bla_(CTX-M-27)和bla_(CTX-M-65)的基因环境均为ISEcp1-bla_(CTX-M-27/65)-IS903。19株bla_(CTX-M)基因阳性菌呈现10种PFGE谱型,存在一种主要流行的谱型(47.4%),其包括多种来源菌株,暗示存在克隆传播现象。12株(63.2%)bla_(CTX-M)基因阳性大肠杆菌中bla_(CTX-M)基因转移成功,bla_(CTX-M)基因阳性接合子携带的复制子型为IncFⅡ(n=10)和IncHⅠ2(n=2),且存在多西环素和氟苯尼考耐药表型与bla_(CTX-M)基因共转移现象。研究发现,阳江鹅场大肠杆菌耐药情况较为严重,bla_(CTX-M)基因存在一定的流行性且以bla_(CTX-M-55)亚型为主,bla_(CTX-M)基因阳性菌的克隆传播和质粒及插入序列ISEcp1介导的水平传播是导致该基因在鹅场大肠杆菌中扩散的主要原因,应引起高度重视。 相似文献
3.
为研究耐药相关基因在肉鸡养殖场中的分布流行情况，本研究以河北省肉鸡养殖场待出栏肉鸡为研究对象，采用随机抽样方式采集肉鸡泄殖腔拭子样品264份，粪便污染地面样品9份，进行blaNDM、blaOXA、blaCTX-M、armA、fexA、cfr、mcr-1、qnrS 8种耐药基因和int1、ISCR1 2种与耐药基因散布密切相关基因的实时荧光定量PCR检测。结果显示，10种基因在273份样品中均有不同程度检出，检出率在4.03%~97.07%之间，检出率最低的为armA基因，最高的为int1基因；样品中有基因共存情况，并以3种耐药基因共存的情况最多，有4份样品存在1种耐药基因，6份样品未检出任何耐药基因，没有样品共存8种耐药基因；通过数据分析，共得到41种不同的耐药基因谱型，其中常见的耐药基因谱型为blaCTX-M-fexA-mcr-1和blaOXA-blaCTX-M-fexA-cfr-mcr-1-qnrS；分析发现样品携带两种及以上耐药基因时，与耐药基因散布相关的int1和ISCR1元件检出率越高，耐药基因在样品中检出的种类越多；耐药基因blaOXA、blaCTX-M、fexA、cfr、mcr-1、qnrS与int1基因的共存有统计学意义（P<0.05）；耐药基因blaNDM、blaOXA、blaCTX-M、fexA、cfr、qnrS与ISCR1元件的共存有统计学意义（P<0.05）。本研究为畜牧兽医养殖行业耐药性监测工作提供了基于样品的新型实时荧光定量PCR检测方法，为有效预防耐药菌、耐药基因产生、控制耐药性的快速传播提供了可靠的数据支持。 相似文献
4.
试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品，采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定，用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性，采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示，从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌；大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%，多重耐药率为15.5%，其中对多黏菌素耐药率为52.2%，对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%，而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示，β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%，其中全部为blaTEM-1基因，blaCTX-M基因携带率为32.4%，其中主要为blaCTX-M-15基因，没有检测到blaSHV、blaOXA基因；多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%；喹诺酮类耐药基因中aac（6'）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%，qnrB基因携带率为20.8%，没有检测到qnrA和qnrC耐药基因；对8种毒力基因检测分析结果显示，仅Hly毒力基因没有被检出，Ecs3703、Irp2基因的检出率较高，分别为90.1%和63.4%，71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子，检出率为15.5%，11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构，最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明，山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重，携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌，Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用，可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。 相似文献
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【目的】探明京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行情况,筛选敏感药物。【方法】于2020年12月至2021年7月从京津冀地区部分牛场采集146份犊牛腹泻样本,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检及16S rRNA测序进行大肠杆菌分离鉴定;采用PCR方法对分离菌进行毒力基因（F17、K99、F41、STa、stx1、irp2和fyuA基因）和耐药基因（aac（6'）-Ⅰb、blaCTX-M、blaTEM、OqxB、tetA和sul1基因）检测;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。【结果】分离菌在鉴别培养基上的生长形态及革兰氏染色镜检结果均符合大肠杆菌生理生化特性,分离菌16S rRNA测序结果呈单一峰值,对拼接序列在NCBI中进行BLAST比对后发现,与大肠杆菌相似性均>96%,确定分离菌为大肠杆菌。试验共分离鉴定大肠杆菌142株,其中有88株携带毒力基因,占61.97%（88/142）,毒力基因F17、K99、F41、STa、stx1、irp2、fyuA阳性率分别为24.65%、0.70%、0、2.11%、1.41%、45.07%和21.83%,其中F17、irp2、fyuA为优势毒力因子,同时携带多重毒力因子的大肠杆菌检出率较低。aac（6'）-Ⅰb、blaCTX-M、blaTEM、OqxB、tetA和sul1 6种耐药基因皆被检出,blaTEM基因检出率最高,为45.77%,aac（6'）-Ⅰb和OqxB基因检出率最低,均为9.15%,分离菌株主要携带1~3种耐药基因。药物敏感性试验结果显示,142株分离菌对诺氟沙星敏感率最高,其次为环丙沙星,对青霉素敏感率为0,耐药现象严重,耐2种以上抗菌药物的菌株达86.62%。【结论】京津冀地区犊牛腹泻大肠杆菌毒力基因与耐药基因流行广泛,耐药普遍,多重耐药现象严重。本研究可为京津冀地区犊牛腹泻的防治提供理论依据。 相似文献
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本研究旨在探索奶牛养殖环境中产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lactamases，ESBL）耐药菌的流行特征。2020-2021年，采集6个内蒙古和宁夏牧场共160份牛奶、乳区皮肤拭子和环境来源的多种类型样本，分别进行了β-内酰胺酶检测、产ESBL耐药菌的分离鉴定、药敏试验以及菌株的全基因组测序。结果显示：24份奶样的检测结果显示，各牧场β-内酰胺酶阳性率为75%~100%。其中，5个牧场的153份样本共分离出6种产ESBL耐药菌，这些产ESBL耐药菌对阿莫西林（100%）、头孢噻肟（91.0%）和头孢他啶（78.2%）均具有较高耐药率；全基因组显示，14株产ESBL大肠杆菌携带多种耐药基因，以blaCTX-M（100%）携带率最高。通过对内酰胺酶阳性奶样进行分析，发现造成牧场奶样β-内酰胺酶阳性的主要菌株是产ESBL鲍曼不动杆菌，并且该耐药菌携带有blaCTX-M、blaTEM、blaOXA型β-内酰胺类耐药基因。本研究明确了内蒙古和宁夏牧场养殖环境中产ESBL耐药菌的流行特征，并对造成内蒙古1个牧场牛奶内酰胺酶阳性原因进行了追溯研究。 相似文献
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本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因blaCTX-M和blaTEM、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。 相似文献
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为了解家庭农场供货模式下"养殖-销售"活禽产业链中各环节大肠杆菌耐药性及耐药基因流行情况,本研究共采集132份来自自贡市沿滩区某一农贸市场及其活禽供货的33家家庭农场的样品,通过细菌分离纯化、形态学鉴定、特异性引物PCR检测、系统发育群PCR检测、药敏试验及耐药基因鉴定等方法对细菌特性进行分析。研究结果显示,83株分离株在伊红美蓝培养基上形成带有金属光泽的黑色菌落,镜检显示为革兰阴性短杆菌,且特异性引物检测结果均显示阳性,因此,确定83株分离株均为大肠杆菌。系统发育群鉴定结果发现,83株分离株系统发育群集中于A群（53.02%）及B1群（20.48%）;药敏试验结果显示,83株菌株均为多重耐药菌,其中硫酸黏杆菌素、四环素耐药率最高,均为100%,氨苄西林、头孢呋辛、氨曲南、氟苯尼考耐药率均超过90%;耐药基因结果显示,mcr-1、mcr-3、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M-group 1、blaCTX-M-group 9、qnrS、aac（6'）-Ⅰb-cr、tetA和tetB等耐药基因均有检出,检出率均低于对应抗菌药的耐药率,符合预期结果。此外,统计结果显示,家庭农场细菌耐药率和耐药基因携带率低于农贸市场。本研究结果表明,农贸市场成为活禽产业链中耐药菌及耐药基因的集散地,可为指导禽大肠杆菌临床检测、诊断及合理用药提供试验依据,同时为评估活禽产业链耐药性传播风险提供可靠数据。 相似文献
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本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示，245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%（152/245），共鉴定出19种血清型，其中主要血清型有阿贡纳（Salmonella Agona，29/152，19.08%）、科瓦利斯（S.Corvallis，25/152，16.45%）以及肯塔基（S.Kentucky，20/152，13.16%）。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑（100%）、萘啶酸（90%）、四环素（75%）、氨苄西林（65%）、头孢他啶（55%）、环丙沙星（55%）的耐药率较高，有85%（17/20）的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示，95%（19/20）的菌株具有gyrA突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly），其中有57.89%（11/19）的菌株发生gyrA双突变（Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly），5.26%（1/19）发生gyrA三突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly）；100%（20/20）的菌株具有parC突变（Tyr62Ser、Ser85Ile）。45%（9/20）分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性（PMQR）基因（aac（6'）-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB），最常见的是aac（6'）-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因blaTEM-1、blaOXA-1和blaCTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示，肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性，部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重，对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重，具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能，为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。 相似文献
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旨在了解新疆牛、羊和骆驼源产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）的系统进化分群、血清群、毒力基因、耐药性及其遗传多样性,本研究采用PCR方法对牛、羊和骆驼源STEC进行了系统发育分群、血清群和毒力基因stx1、stx2（包括亚型）、eaeA、hlyA检测,通过K-B纸片法对分离株进行药物敏感性检测,并对其进行ERIC-PCR基因分型。结果表明：94株非O157 STEC以B1群为主,含9个血清群,包括O146（n=14）、O22（n=7）、O3（n=4）、O168（n=4）、O8（n=3）、O167（n=2）、O88（n=1）、O112ab （n=1）和O147（n=1）。毒力基因检测显示,46.8%（44/94）仅携带stx1,6.4%（6/94）仅携带stx2,46.8%（44/94）同时携带stx1+stx2。羊源STEC以携带stx1+hlyA为主（68.0%）;牛源STEC以携带stx1+stx2+hlyA为主（57.9%）;骆驼源STEC以携带stx1+hlyA为主（25.0%）。stx1a主要分布于牛源STEC,stx1c主要分布于羊源STEC。14株（14.9%）为耐药菌,对头孢他啶、四环素、头孢噻肟、氨苄西林和氨曲南的耐药率为3.2%~5.3%,对复方新诺明、头孢吡肟、哌拉西林-他唑巴坦、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸和多黏菌素B的耐药率为1.1%~2.1%。ERIC-PCR结果显示牛、羊和骆驼源STEC亲缘关系较近。牛、羊和骆驼携带多种已知血清群STEC,贮存丰富的毒力基因,存在感染人类的风险,应在屠宰加工过程中予以预防和控制。 相似文献
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旨在了解新疆地区腹泻仔猪源大肠杆菌的系统进化分群、血清型及耐药性。本研究对154份腹泻仔猪粪便样品进行大肠杆菌的分离鉴定,采用多重PCR方法对分离株进行系统进化分群和O血清型鉴定,通过K-B纸片法对其进行药物敏感性检测并通过PCR方法进行耐药基因检测。结果显示：共分离到154株大肠杆菌,包括ETEC(n=24)、STEC(n=21)、EPEC(n=1)、EPEC/STEC(n=2)、ETEC/STEC(n=1)和ETEC/EPEC(n=1),其他104株。系统进化分群显示,多数菌株属于B1(37%)和A群(31%)。定型菌株44株,分别属于10种血清型,以O154、O12、O8、O141和O175为主要流行血清型。151株(98%)为多重耐药菌,对复方新诺明、四环素、氨苄西林、链霉素和氯霉素的耐药率为81%～100%,对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、庆大霉素、头孢曲松、环丙沙星和阿米卡星的耐药率为31%～66%,对左氧氟沙星、多黏菌素B、头孢他啶、头孢吡肟、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦和亚胺培南的耐药率为1%～19%。耐药基因tetA(88%)、tetG(60%)和cmlA(4... 相似文献
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为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况，指导临床进行合理用药，本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份，进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示，分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌，通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌，分离率为28.3%；其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性，致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示，所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高，耐药率为24.0%；对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之，耐药率为8%；对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%；对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感，可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示，blaTEM基因检出率为100%，表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明，西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药，提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药，减缓大肠杆菌耐药性的产生。 相似文献
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In order to get more information about the distribution of virulence genes and drug resistance genes of Escherichia coli(E.coli) isolated from calf diarrhea in some large-scale cattle farms in Heilongjiang,sensitive drugs were screened to analyze the preventive and therapeutic effect of sodium humate on E.coli.In this study,40 samples were collected and identified by separation and purification,staining microscopy,biochemical identification and molecular biology,and the virulence and drug resistance genes were detected by PCR and the drug sensitivity was detected by K-B test.The inhibitory effect of different concentrations of sodium humate on E.coli was measured by serial dilution and plate counts.Moreover,the protective effect of sodium humate on mice were studied through gastric administration.The results showed that 30 strains of E.coli were isolated,of which 25 strains had virulence genes and 8 virulence genes were detected out of 10,with detection rate of 83.3%.There were many virulence gene combinations.The highest detection rates for blaTEM and blaSHV genes were 100% and 13.3% respectively,and the detection rate of other resistance genes was also high.The results of drug sensitive test showed that 30 isolated strains were most sensitive to meropenem,followed by amikacin.The results of serial dilution and plate counts showed that 5% sodium humate was the most bacteriostatically effective,and the results of toxicity test showed that sodium humate could improve the survival rate of mice.This study provided a basis for the rational use of antibiotics and the clinical application of sodium humate in this area. 相似文献