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DNA旋转酶基因gyrA中喹诺酮耐药决定区碱基变换在大肠杆菌对喹诺酮的耐药性方面起着十分重要的作用.采用PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术可对大肠杆菌gyrA基因QRDR的突变进行有效检测.本文以142株猪源致病性大肠杆菌氟喹诺酮药物敏感菌株为样本,测定了细菌对喹诺酮药的MIC值,结果表明142株猪源大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率分别为78.8%,56.3%,65.5%,76.8%.猪源大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药率高,且耐药菌株MIC值较大.菌株WJPE2-1(对环丙沙星的NIC为0.5μg/mL)的诱导耐药试验,结果表明,在通过药物浓度梯度连续诱导过程中获得了MIC为2,8,64,128μg/mL的四株诱导菌株,诱导菌株4对ENR、NOR、OFL、CIP的MIC值分别增加到诱导前的32,128,128,256倍,且4株诱导菌株对CIP、ENR、NOR、OFL的MIC值均呈现递增.根据GenBank注册的大肠杆菌gyrA序列设计引物,横跨gyrA的第40和118密码子位置,包含完整的QRDR,从27株不同MIC值的大肠杆菌株、ATCC25922、4株诱导耐药菌株均获得约300bp的PCR产物.采用291的交联度、12%的聚烯酰胺浓度,1×TBE,凝胶中添加5%的甘油的条件,对诱导菌株、药物敏感菌株及不同耐药水平的分离菌株进行SSCP分析,结果表明,诱导菌株的谱型与敏感对照菌不同,低MIC值菌株SSCP谱型与敏感对照与敏感对照一致性高;耐药菌株的谱型多数与敏感对照不同.四株诱导大肠杆菌PCR产物的SSCP谱型均与对照不一致,检出率为100%;27株不同耐药性的猪源大肠杆菌中,7株敏感大肠杆菌共有6株的SSCP谱型与标准敏感菌株对照一致,符合率为85.7%;20株耐药大肠杆菌其谱型与标准敏感对照一致的菌株为2株,检出率为90.0%.序列比较结果表明,敏感菌株WJPE2-1的PCR产物与敏感对照有2个碱基(第91,111位氨基酸残基位置)的差异,序列同源率为99.16%(236/238).诱导菌株1与2表现在第83位氨基酸编码序列由tcg突变为ttg,菌株3、4与菌株1、2的差异表现在第87位氨基酸编码序列由gac突变为tac.进一步分析发现,菌株WJPE2-1在第91位及111位的突变均为同义突变,即密码子的变换没有引起氨基酸残基的改变.在诱导菌株中,1与2的gyrase的第83位氨基酸残基由Ser→Leu,菌株3、4的gyrase还在第87位氨基酸残基由Asp→Tyr.表明由于QRDR内碱基的改变,引起DNA旋转酶氨基酸的变化,导致大肠杆菌产生氟喹诺酮药物的耐药性. 相似文献
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为探讨氮磷营养盐对环境大肠杆菌(E.coli)耐药性的影响及其机制,本试验通过建立模型生态系统研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素(CHL)产生耐药表型的影响,并对分离到的耐药菌株和敏感菌株进行cat基因检测.结果显示,添加不同剂量氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药性,46株耐氯霉素大肠杆菌cat基因的阳性率为89.13%;16株对氯霉素敏感的大肠杆菌未检出cat基因.结果表明,模拟生态系统中加入氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药;氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素耐药与cat基因有关. 相似文献
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为了给凉山州特色畜禽临床用药及耐药性监测提供理论依据,试验采用微量肉汤稀释法对分离自凉山州不同动物的214株大肠杆菌(包括建昌鸭源80株、建昌马源72株、德昌水牛源62株)进行土霉素、阿米卡星、氟苯尼考等13种抗菌药物的敏感性试验,以确定其耐药谱型。结果表明:214株大肠杆菌耐药严重,对大部分药物耐药率达到70%以上;仅对阿米卡星、左氧氟沙星较敏感,多重耐药多集中在10~12耐。说明凉山州特色畜禽源大肠杆菌耐药情况较为严重,应增加耐药性监测力度宣传力度,指导合理用药。 相似文献
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上海市动物源性大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验 总被引：1，自引：0，他引：1
为掌握上海市动物源性大肠杆菌的耐药情况及耐药规律,对2013—2015年在门诊畜禽中分离到的大肠杆菌进行药敏试验。共分离到236株大肠杆菌,其中猪源164株、禽源72株。选用15种抗生素,采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,对大肠杆菌进行药物敏感试验。结果表明,无论是猪源大肠杆菌,还是禽源大肠杆菌,对大多数抗生素的耐药程度均较高。其中,对磺胺异噁唑、复方新诺明、恩诺沙星和大观霉素等抗生素的耐药情况较为严重;对丁胺卡那霉素和阿莫西林/棒酸2种抗生素较为敏感,耐药率低于20%。从耐药谱型来看,猪源大肠杆菌较禽源大肠杆菌具有更加复杂的耐药谱型。 相似文献
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为了全面了解山西省奶牛乳腺炎的主要致病菌及其耐药情况,本研究对山西省榆次、清徐、祁县、太谷、山阴、永济及太原郊区奶牛场1 300头奶牛乳腺炎进行流行病学调查。随机从不同规模的奶牛场采集乳腺炎奶牛奶样120份,进行病原的分离培养、鉴定及药敏试验。结果:120份样品共分离出8种402株病原菌,经鉴定主要病原菌为大肠杆菌78株(19.4%),大肠杆菌ESBL阳性株18株(4.5%),葡萄球菌88株(21.9%)、链球菌95株(23.6%)、小型原藻40株(10.0%)、克柔念珠菌45株(11.2%)。对试验用12种药物,大肠杆菌耐药的有1种,敏感的有11种;大肠杆菌ESBL阳性株(耐β内酰胺酶)敏感的有2种,耐药的有10种;链球菌耐药的有5种,敏感的有7种;葡萄球菌耐药的有2种,敏感的有10种。对5种抗真菌药物,小型原藻敏感的有1种,耐药的4种;克柔念珠菌敏感的2种,耐药的3种。结论:近年来真菌和大肠杆菌ESBL阳性株导致的奶牛乳腺炎的比例有所增加;其他几种细菌都有不同程度的耐药性。 相似文献
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从11株地方分离株和标准株中筛选出8株埃希氏大肠杆菌(血清型包括 O_1,O_2.O_(78),O_(74),O_(35))作为制苗菌株,采用超声辐射法灭活,制成大肠杆菌超声辐射灭活多价油苗,并与甲醛灭活苗和氢氧化铝苗进行了免疫效果比较.试验表明,雏鸡接种0.5m1/只、成鸡接种1.0ml/只超声灭活多价油苗的保护率(92.3%)显著高于甲醛油苗(80.0%)和甲醛氢氧化铝苗(66.7%).接种后10天的抗体水平(几何均值1:55.7)已明显超过临界水平(1:16),接种后2～3周达最高水平,并可持续18周。 相似文献
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本研究采用纸片扩散法，检测从平邑7家生猪养殖场分离的21株大肠杆菌对庆大霉素、恩诺沙星、阿莫西林、氟苯尼考、多四环素、黏菌素6种抗生素的敏感性。结果显示，平邑7家生猪养殖场的21株猪源大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率为14%，敏感率为57%；对庆大霉素的耐药率为14%，敏感率约为72%；对阿莫西林的耐药率为100%；对氟苯尼考的耐药率为71%，敏感率为0；对多四环素的耐药率为43%，敏感率为29%；对黏菌素的敏感率100%。不同生猪养殖场猪源大肠杆菌耐药性不同，个别养殖场猪源大肠杆菌耐药性很高，出现了多重耐药性（对5种抗生素耐药）。建议该养殖场根据药敏结果，采用精准用药和轮换用药方式来防治猪源型大肠杆菌疾病，避免抗生素乱用，进一步推进兽用抗菌药减量化使用和兽用抗菌药综合治理。 相似文献
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为了解畜禽源大肠杆菌的耐药状况,2011—2012年从患病和健康食品动物中分离鉴定大肠杆菌935株,包括健康猪源606株、患病猪源114株、患病鸡源51株、患病水禽源(鸭和鹅)164株。试验采用琼脂稀释法测定了不同动物来源的大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性。结果发现,大肠杆菌耐药严重,对大部分药物的耐药率超过70.0%,其中氨苄西林、复方新诺明和四环素的耐药率均达到了80.0%以上;仅对头孢西丁、黏菌素和阿米卡星较敏感,但患病水禽源大肠杆菌对阿米卡星的耐药率达到了52.4%,明显高于其他动物。健康畜禽源大肠杆菌对多数抗菌药的耐药率低于患病畜禽源大肠杆菌,表明抗菌药物的使用增加了病原菌对第3代头孢类药物和氟喹诺酮类药物的耐药率,势必增加临床治疗难度。 相似文献
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为了掌握重庆地区养鸡场大肠杆菌、沙门氏杆菌的耐药情况,试验选取10种抗生素对分离到的110株大肠杆菌、14种抗生素对分离到的8株沙门氏杆菌进行药敏试验,测定大肠杆菌的耐药基因,比较分析大肠杆菌耐药表型与耐药基因的关系。结果表明:多黏菌素对所有大肠杆菌均敏感,4株大肠杆菌对环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟耐药,20株大肠杆菌对恩诺沙星耐药,24株大肠杆菌对卡那霉素耐药,28株大肠杆菌对链霉素耐药,40株大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考耐药,72株大肠杆菌对磺胺甲口恶唑耐药;在110株大肠杆菌中80. 00%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占32. 73%,对7种药物耐药占7. 27%,多重耐药性主要集中在二到四重,占63. 64%。沙门氏杆菌对环丙沙星、氨曲南、头孢噻肟敏感;而对氯霉素、磺胺异口恶唑、氨苄西林、四环素、复方新诺明、头孢唑啉、多西环素均耐药; 8株沙门氏杆菌中100%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占12. 50%,对8种药物耐药占12. 50%,多重耐药性主要集中在四到八重,占87. 50%。大肠杆菌药敏试验和耐药基因的检测结果表明,磺胺类耐药基因与耐药表型符合率较高,为75. 00%(72/96)。β-内酰胺类中头孢噻肟耐药基因与耐药表型符合率较低,为6. 78%(4/59);阿莫西林耐药表型与耐药基因符合率为67. 80%(40/59)。大部分检测的基因在受试菌株中具有较高的流行性,表明这些基因在编码受试菌株耐药性中发挥非常重要的作用。说明分离的大肠杆菌沙、门氏杆菌耐药性十分严重。 相似文献
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奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解宁夏地区奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药表型及同源性特征,本试验采用肉汤微量稀释法测定了16种抗菌药物对66株奶牛乳房炎分离大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC),同时进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究.结果显示,66株大肠杆菌对氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素、头孢菌素类抗生素和磺胺甲氧嘧啶的耐药率都比较高,而对阿米卡星、卡那霉素、多粘菌素、氟苯尼考及喹诺酮类药物则比较敏感.分离菌株最多耐受15种药,且主要以8耐、5耐和7耐为主.66株大肠杆菌中有54株能被PFGE分型,可分为A-a 27个型.分型结果显示,宁夏地区的奶牛场分离的菌株之间既存在垂直传播也存在水平传播,同一养殖场不同奶牛之间和不同养殖场的奶牛之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播. 相似文献
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猪源大肠杆菌耐药性与I型整合子关系研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的为了解猪源大肠杆菌中I型整合子的流行情况,探讨I型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌I型整合酶基因（int11）并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含I型整合子,检出率77．31％。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp-3149bp。7类I型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78．15％大肠杆菌菌株的I型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因（aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB）最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因（dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27）,此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因1nuF、cm1A6、aar-3、off.结论I型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;I型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。 相似文献
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采用药敏纸片扩散法,检测了2008～2012年于山东省不同地区鸡场临床分离鉴定的96株大肠杆菌对23种抗生素的耐药性.结果表明:96株大肠杆菌均出现不同程度的耐药性,其中对哌拉西林、利福平的耐药率最高(均在90％以上),其次对头孢拉定、头孢唑啉和四环素的耐药率也较高(均在84％以上),同时这些菌株对头孢吡肟、头孢他啶、阿米卡星的敏感率较高,其中对头孢西丁的敏感率最高(78.125％).通过所得的药敏试验结果可以在一定程度上指导临床用药.分析不同年份、不同地区菌株的耐药情况,有助于对大肠杆菌耐药性趋势进行预测. 相似文献
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从89株临床分离鸭源大肠杆菌中选择5株氨基糖苷类高水平耐药菌,应用实时荧光定量RT-PCR方法测定其主动外排基因acrD mRNA水平,选用1株中介株、1株敏感株和大肠杆菌ATCC25922作为对照,分析其mRNA转录水平与耐药强度的相关性。结果显示,5株耐药菌的acrD mRNA相对表达量均高于中介株和敏感株,其相对表达量分别是2.00、1.96、2.22、1.84、4.39,敏感对照株为1.67,中介对照株为1.75,除4号菌株外,其余4株耐药菌相对表达量和标准菌株ATCC25922具有显著性差异;同是高度耐药的4号菌和5号菌存在较大差异,5号菌相对表达量是4号菌的2.39倍,这说明对氨基糖苷类不同耐药程度的菌株acrD基因的转录、表达存在差异,且与耐药水平呈正相关,但同时存在其他重要耐药机制介导氨基糖苷类耐药。 相似文献
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为分析广东地区猪源大肠杆菌耐药性及其系统进化背景,试验于2011年从患病猪分离出264株大肠杆菌,包括粪便源131株和肝源133株,采用琼脂稀释法测定18种抗菌药物的敏感性,多重PCR法确定系统进化关系,并对不同来源菌株的耐药性和系统进化背景进行分析比较。结果发现,大肠杆菌多重耐药现象严重,共存在128种耐药谱型。分离菌株对氨苄西林、复方新诺明、萘啶酸和四环素高度耐药,对黏菌素、头孢他啶和阿米卡星较敏感。种群进化分析结果表明,分离菌株主要分布在共生型的A组和B1组（91.66%）,且不同来源菌株的种群进化分布差异不显著(P＞0.05)。结合药敏试验结果发现,不同进化组别的分离菌株对特定抗菌药物的耐药性存在显著差异（P＜0.05）。通过对大肠杆菌耐药性及其系统发育群进行综合分析,为兽医临床用药提供依据。 相似文献
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目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。 相似文献
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我国苜蓿品种的适宜辐射剂量 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验以0－140KR^60CO-γ射线辐射我国25个苜蓿种和品种的干种子,研究苜蓿的辐射敏感性,确定苜蓿的适宜辐射剂量,结果表明,种子的活力指数,根长,幼苗存活率,苗高,株高,青草产量与剂量呈负相关,不同苜蓿品种辐射过敏感性存在显著差异。应用模糊聚类分析法将25个品种的辐射敏感性分为极敏感型,敏感型,中间型,迟钝型和极迟钝型五类,以苗高为指标,苜蓿品种的适宜辐射剂量在50－135KR之间,不同品种之间相差2－3倍。 相似文献
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《中国兽医杂志》2019,(11)
为检测北京市某动物医院1例宠物犬顽固性腹泻的原因,通过采集肛门拭子进行细菌分离鉴定试验,分离出1株大肠杆菌,命名为37-Canine株。通过细菌形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列分析、大肠杆菌荧光PCR致泻型检测等方法对该病原菌进行分析,并采用K-B药敏纸片法及耐药基因PCR检测测定其耐药情况。结果表明:37-Canine株经PCR电泳试验,16S rDNA测序分析,与GenBank中大肠杆菌参考株16S rDNA基因序列的同源性达到99%,进化树显示与AP018488.1参考株被划为一支;经大肠杆菌致泻型荧光PCR检测为EIEC-EPEC-EHEC的杂合型菌株,具有致泻性;对临床常用药物头孢曲松钠、头孢噻肟、诺氟沙星3种药物敏感,对多黏菌素B、庆大霉素2种药物中度敏感,对阿莫西林、磺胺嘧啶、氨苄西林3种药物耐药;经耐药基因PCR检测显示,37-Canine株携带氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类耐药基因,出现多重耐药。本试验为临床宠物犬顽固性腹泻病例合理使用抗生素及犬源大肠杆菌的防治提供了参考依据。 相似文献