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以聚乙酸乙烯酯胶乳为微载体，以犊牛睾丸细胞培养的猪瘟兔化弱毒为抗原，研制猪瘟聚乙烯乙烯酯胶乳免疫监测抗原，用于快速检测猪瘟免疫抗体和猪瘟母源抗体。 相似文献
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1猪瘟疫苗的制作与分类猪瘟疫苗系用猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞,主要是家兔、乳兔和牛睾丸等细胞培养,收获感染家兔的脾脏及淋巴结或乳兔的肌肉及牛睾丸等实质脏 相似文献
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以纯化的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）重组M蛋白免疫新西兰兔，制备免疫血清，用间接ELISA测得免疫血清效价达1：14000。通过间接ELISA进行病原检测，表明制备的免疫血清与全病毒具有较好的特异性。用免疫血清进行病原间接免疫荧光检测，TGEV感染的细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色闪亮荧光，且荧光强度强，而未接种病毒的细胞培养物未见有黄绿色闪亮荧光，表明用所制备的抗TGEV重组M蛋白的免疫血清进行病原间接免疫荧光检测具有较高的特异性，为TGEV准确快速诊断与鉴别奠定了基础。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2017,(5)
为获得可用于诊断的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白重组抗原,对CSFV-E2的多个B细胞抗原表位进行重构和表达。将人工合成的E2蛋白多抗原表位基因与p ET-28a(+)载体连接后,转化至宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析蛋白可溶性,His亲和层析柱纯化蛋白并进行抗原性检测。重构后的猪瘟病毒E2基因多抗原表位基因大小约500 bp,PCR、双酶切鉴定结果显示与预期相符;重组蛋白为可溶性表达,大小约23 k Da;Western blot结果显示,重组蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性,可作为诊断抗原用于猪瘟病毒感染动物的血清抗体检测。 相似文献
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本研究以牛传染性鼻气管炎gE基因的原核表达产物为抗原建立检测IBRV抗体间接ELISA检测方法.通过DANStar比对分析牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白序列,通过亲和层析对重组表达产物进行纯化,经Western blot检测证明重组表达产物能被IBRV标准性鼻气管炎gE蛋白长度为500 bp的特异性肽序列,随后构建了pC... 相似文献
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Trizol法提取猪瘟兔化弱毒株(C株)总RNA,根据GenBank中E0基因序列设计特异性引物,扩增克隆E0基因,插入原核表达载体pET-32a(+),转化进BL2l(DE3)内进行表达。将表达的重组pET-E0蛋白通过His亲和层析柱纯化,以纯化后的蛋白为诊断抗原,包被96孔聚乙烯平板,通过探索抗原包被量和血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法。通过对蛋白表达条件和ELISA反应条件的优化,确定E0蛋白能在BL2l(DE3)内高效表达,表达量达30%,蛋白分子质量约为50 ku,且蛋白以可溶性形式存在。纯化后蛋白浓度为2 mg/mL;抗原最适包被量为300 ng;血清最适稀释度为1∶50。经阻断试验、交叉反应试验和与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合性(83%)试验证明,建立的E0-ELISA简便、特异、稳定,为研制开发E2标记疫苗的应用和推广提供配套的检测方法。 相似文献
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制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应抗体。以5?S做稀释液,以RT-PCR检测阳性样本的冰冻切片确定其最大稀释度为1/60,最佳工作浓度为1/30,阻抑试验证明荧光为特异荧光。用标记的荧光抗体检测活体扁桃体样本39份,检出阳性11份,与IDEXX猪瘟抗原检测试剂盒复核结果完全吻合。结果表明,本实验所制备的猪瘟荧光抗体具有很高的灵敏性和特异性,可用于猪瘟净化中扁桃体组织抹/涂片检测。 相似文献
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牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
通过IPTG诱导的大肠埃希菌表达重组牛干扰素-γ融合蛋白(BovIFN-γ),利用GlutathioneSepharose 4 Fast Flow亲和层析柱进行融合蛋白的纯化,纯化后的融合蛋白BovIFN-γ作为抗原免疫Balb/c小鼠,经5次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,间接ELISA筛选,有限稀释法克隆亚克隆获得分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定。获得一株稳定分泌BovIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9,细胞培养上清和腹水效价可达1∶3 200和1∶160 000。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2019,(5)
为控制本公司猪瘟疫苗中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的污染,采用RT-PCR方法对猪瘟疫苗生产的全过程进行控制。2012～2017年共检测4089头新生牛血清、152批新生牛牛睾丸、1255份猪瘟抗原、114批猪瘟疫苗,BVDV阳性数分别为115、34、78和2份。 相似文献
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我们曾在牛副结核ELISA中采用的亲和层析抗原,收到了较其它抗原更为满意的结果。该抗原的最大优点是特异性较好,但不足的是经盐酸-甘氨酸(pH2.8)解吸附后,其抗原性有所减弱,致使抗原的包被量反而大于过G200凝胶柱抗原,而且通过一次亲和层析柱收获的抗原量也是很有限的,给大批制备抗原带来一定困难。考虑到目前的牛副结核ELISA主要是排除牛草分枝杆菌以 相似文献
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《中国兽医学报》2014,(9):1486-1490
CFP-10和ESAT-6是牛分枝杆菌的免疫优势抗原,可诱导机体产生IFN-γ,在牛结核病的免疫诊断中发挥重要作用。本试验分别克隆了牛分枝杆菌CFP-10和ESAT-6基因,并将这2个基因融合扩增,构建重组表达质粒pET28a/CFP-10-ESAT-6,重组质粒在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达。重组蛋白主要以分泌表达的形式存在于表达上清中,收集上清中的目的蛋白进行Ni亲和层析柱和分子筛两步纯化,蛋白纯度分别达到90%和95%。将纯化的重组蛋白以2mg/L的质量浓度包被酶标反应板,用间接ELISA方法检测不同来源牛血清中的结核病抗体,结果表明,表达的重组融合蛋白具有良好的抗原活性,可有效识别阴、阳性结核病血清。 相似文献
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牛睾丸原代细胞是目前生产细胞型猪瘟弱毒疫苗的最主要细胞源.全国每年用于生产猪瘟弱毒疫苗的牛睾丸约为70万对,但牛的产仔具有相对严格的季节性,且同一个牛场每天的睾丸产量是极其有限的.这给疫苗生产厂家批量收集睾丸以及调剂生产周期等方面带来了困难.另外,经常不断的从外界送入生鲜睾丸组织,增加了药品生产质量管理规范(GMP)车间的污染频率,因此,进入GMP车间用于生产猪瘟疫苗的牛睾丸细胞最好是经检测无污染并能产出高效价病毒的合格细胞.但是,牛睾丸细胞传代次数是有限的.统计数据表明,牛睾丸细胞接种猪瘟病毒只适合传5代次[1]. 相似文献
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应用重组日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫病的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
在大肠杆菌BL21中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因，经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L；以间接ELISA法，检测血吸虫病因牛血清104份，阳性检出率为67．31％；以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验，得到的OD值与阴性血清相当。结果表明，以重组日本血吸虫组织蛋白酶L作为诊断抗原检测日本血吸虫病牛感染情况，有一定的应用前景。 相似文献
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孕牛血清中早孕因子的分离纯化 总被引：2，自引：0，他引：2
采用DEAE－Sepharose(DEAE-琼脂糖凝胶）、CM－Sepharose(CM-琼脂糖凝胶）等离子交换层析、抗孕牛全血清IgG-Sepharose 4B亲和层析等技术，分离纯化妊娠4－5个月健康孕牛全血清中的早孕因子（EPF），用玫瑰花环抑制实验对各阶段产物EPF活性进行检测。结果表明，经层析过柱后的CM－ⅡA提取物有EPF活性。经SDS－PAGE银染显色证实它含有分子量为21、67、80KD的蛋白，实验结果支持21KD的多肽为主要EPF活性物成分。同时实验表明了亲和层析对进一步纯化EPF是可行的。 相似文献
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以聚乙酸乙烯酯胶乳（ＰＡＬ）为微载体，以犊牛睾丸细胞培养的猪瘟（ＨＣ）兔化弱毒为抗原，研制猪瘟聚乙酸乙烯酯胶乳免疫监测抗原（ＨＣＰＡＬＡｇ），用于快速检测猪瘟免疫抗体（ＨＣＡｂ）和猪瘟母源抗体（ＨＣＮＡｂ）。研究证明，ＨＣ－ＰＡＬＡｇ具有特异性强，敏感性高、稳定性好、保存期长等特点。用其进行猪瘟免疫监测，具有简便经济，省时省力不需任何昂贵和专用特殊仪器等优点 相似文献
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通过重叠PCR合成猪瘟病毒EO基因,将该片段定向插入到pET-22b载体中,构建原核表达载体pET-22b／EO,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,比较不同诱导条件下的蛋白表达,确定其最佳表达条件。重组蛋白主要以包涵体的形式表达,Ni2 亲和层析柱纯化蛋白,逐步透析法复性。通过方阵试验确定包被抗原的最适工作浓度,为了测定EO蛋白的活性,本文初步建立了检测猪瘟血清抗体水平的间接 ELISA方法,为开发检测猪瘟抗体诊断试荆奠定基础。 相似文献
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猪常用疫苗基本特性及使用方法 总被引：1，自引：0，他引：1
(一)猪瘟疫苗免疫接种是预防和控制猪瘟的主要手段,目前我国瘟猪疫苗种毒均为猪瘟兔化弱毒,疫苗有组织苗和细胞苗2种类型。组织苗主要是利用猪瘟兔化弱毒接种3～5日龄乳兔,接种36小时后取乳兔的肝、脾及肌肉组织制成的疫苗。细胞苗是猪瘟兔化弱毒经犊牛睾丸细胞或ST细胞培养制成的疫苗,犊牛睾丸细胞有可能携带牛病毒性腹泻粘膜病病毒。生 相似文献