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1.
从组织细胞制备、不同试验细胞（ｐｋ１５，ＳＴ）及不同维持液组成成份三个方面对ＴＧＥＶ在组织细胞上增殖情况进行了比较。结果表明，用含１５％ＦＢＳ培养液进行ＳＴ或ｐｋ１５细胞传代并制备悬液，操作方便，能形成良好单层，利用ＴＧＥＶＣＰＥ判定；ＳＴ细胞在病毒增殖和检测毒价两方面均较ｐｋ１５细胞分别高２个滴度和１个滴度以上；维护液中提高血清含量（８％ＦＢＳ）或含一定量胰酶对ＴＧＥＶ增殖效果影响不大。 相似文献
2.
用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原 相似文献
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4.
我们对国外引入的ＩＢＤ弱毒疫苗进行了分离，复制和测定，该病毒可接种ＳＰＦ鸡胚增殖，致难胚死亡，并产生ＩＢＤ病变；在ＳＰＦ鸡胚ＣＦＦ上繁殖，产生ＣＰＥ变化，并可被行异性ＩＢＤ抗血清中和；琼脂扩散与ＩＢＤ（＋）血清有明显的沉淀线，因此说明所分离的毒株是ＩＢＤ病毒，并测得其毒价为１０＾－６ＴＣＩＤ５０。 相似文献
5.
应用鸡病毒性关节炎病毒Ｕ．ＣｏｎｎＳ１１３３株，建立了检测鸡病毒性关节炎病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。用该法检测三组接毒鸡的关节液，接毒后３天即可检出阳性，阳性率为５８．３％；发病严重的４～１１天阳性检出率达９５７％，１４天阳性率为５０％；１７天阳性率为３１．３％；２０天以后则全部为阴性。用该法对大肠杆菌（Ｅ．ＣｏＬｉ）、葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、败血支原体（ＭＧ）、滑膜支原体（ＭＳ）、新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、传染性脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）进行检测，结果均为阴性。试验表明，我们建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，能早期、特异、敏感地检出鸡病毒性关节炎病毒抗原，从而解决了对该病早期诊断及类症鉴别带来的困难。 相似文献
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传染性支气管炎病毒在鸡胚成纤维细胞中适应及复制的生物学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
将传染性支气管郯病毒ＩＢＶ－ＮＨ、Ｔ、Ｈ５２、Ｍ４１适应鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,连续传代获得毒价稳定细胞适应毒并对其生物学特性进行研究。观察了ＩＢＶ致ＣＥＦ细胞病变效应的特征,测定ＴＣＩＤ５０滴度为１０６．０～１０６．０。细胞培养病毒提纯后负染置电镜下进行形态学观察,见到典型的冠状病毒粒子。病毒经胰酶处理显示出血凝特性,该血凝性能被特异性血清所抑制。表明ＣＥＦ细胞病变（ＣＰＥ）确为ＩＢＶ所致。通过对４株ＩＢＶ在ＣＥＦ细胞中最佳培养时间及繁殖量关系的摸索,证实了３６～７２ｈ释放到培养液中有活性的病毒粒子达高峰,ＴＣＩＤ５０最高可达１０７．０／ｍｌ。 相似文献
7.
猪传染性胃肠炎病毒在组织细胞上增殖的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
从组织细胞制备，不同试验细胞及不同维持液组成成份三个方面对ＴＧＥＶ在组织细胞上增殖情况进行了比较。结果表明，用含１５％ＦＢＳ培养液进行了ＳＴ或ｐｋ１５细胞传代并制备悬液，操作方便，能形成良好单层，利用ＴＧＥＶ ＣＰＥ判定；ＳＴ细胞在病毒增殖和检测毒价两方面均较ｐｋ１５细胞分别高２个滴度和１个滴度以上；维护液中提高血清含量或含一定量胰酶对ＴＧＥＶ增殖效果影响不大。 相似文献
8.
青海藏羊血清运铁蛋白多态性的研究 总被引：8，自引：1，他引：7
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对青海省三角城种羊场和达日县的１９６份藏羊血样进行了血清运铁蛋白多态性的研究。结果发现：①在被检藏羊的血清运铁蛋白位点上共发现ＴＦ￣Ｉ，ＴＦ￣Ａ，ＴＦ￣Ｇ，ＴＦ￣Ｂ，ＴＦ￣Ｌ，ＴＦ￣Ｃ，ＴＦ￣Ｄ，ＴＦ￣Ｍ，ＴＦ￣Ｅ，ＴＦ￣Ｑ和ＴＦ￣Ｐ１１个等位基因，其中ＴＦＣ（０．３２４０），ＴＦ￣Ｂ（０．２６７９）和ＴＦ￣Ｄ（０．２１６８）为优势等位基因；②共发现ＴＦＩＥ，ＴＦＡＡ，ＴＦＡＢ，ＴＦＡＣ，ＴＦＡＤ，ＴＦＡＭ，ＴＦＧＢ，ＴＦＧＬ，ＴＦＧＣ，ＴＦＧＤ，ＴＦＢＢ，ＴＦＢＣ，ＴＦＢＤ，ＴＦＢＭ，ＴＦＬＣ，ＴＦＬＤ，ＴＦＬＥ，ＴＦＣＣ，ＴＦＣＤ，ＴＦＣＥ，ＴＦＣＱ，ＴＦＣＰ，ＴＦＤＤ，ＴＦＤＭ，ＴＦＤＥ和ＴＦＤＱ２６种基因型，其中ＴＦＢＣ（２０．４１％）、ＴＦＣＣ（１３．７８％）和ＴＦＢＤ（１１．７４％）为优势基因型。 相似文献
9.
青海细毛羊血清运铁蛋白多态性的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对４０１只青海细毛羊的血清运铁蛋白多态性进行了研究。结果表明：①青海细毛羊血清运铁蛋白座位上有ＴＦＡ，ＴＦＧ，ＴＦＢ，ＴＦＣ，ＴＦＤ，ＴＦＭ，ＴＦＥ和ＴＦＱ８个等位基因，其中ＴＦＣ（０．３８７８）和ＴＦＡ（０．２４９４）为优势等位基因；②已发现ＴＦＡＡ，ＴＦＡＧ，ＴＦＡＢ，ＴＦＡＣ，ＴＦＡＤ，ＴＦＡＭ，ＴＦＡＥ，ＴＦＡＱ，ＴＦＧＧ，ＴＦＧＢ，ＴＦＧＣ，ＴＦＧＤ，ＴＦＢＢ，ＴＦＢＣ，ＴＦＢＤ，ＴＦＢＭ，ＴＦＣＣ，ＴＦＣＤ，ＴＦＣＭ，ＴＦＣＱ，ＴＦＤＤ，ＴＦＤＭ，ＴＦＤＥ２３种基因型，以ＴＦＡＣ（２０．９５％）的出现频率最高；③ＴＦ座位的基因杂合度为０．７３８１；④在公羊组和母羊组，ＴＦ基因型与体重、毛长和产毛量之间无显著性联系。 相似文献
10.
用细胞结合疫苗（ＣＡ）接种的雏鸡对传染性喉气管炎（ＩＬＴ）可获得很高的免疫保护力，用ＣＡ疫苗或无细胞（ＣＦ）疫苗接种的雏鸡，可分别在血清中检出病毒中和抗体及ＩｇＧ和ＩｇＭＥＬＩＳＡ抗体。但在接苗雏鸡的气管冲洗液中未检出抗体，接种ＣＡ疫苗的银鸡比接种ＣＦ疫苗的雏鸡能产生更明显的抗体应答，抗体效价与ＩＬＴ强毒攻击产生的保护不呈正相关，皮下接种ＣＡ苗或ＣＦ苗后，可于接种后１～６天从肝，脾，胸腺，肺或其它 相似文献
11.
超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟和体外受精的研究 总被引：4，自引：0，他引：4
以ＴＣＭ１９９＋１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥＰＥＳ＋青霉素（６ｍｇ／Ｌ）＋链霉素（５ｍｇ／Ｌ）为基础培养液（ＢＭ），再分别加入不同成分，配成５种卵母细胞成熟液：（Ａ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ；（Ｂ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ（２．５ｍｇ／Ｌ）；（Ｃ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２（１ｍｇ／Ｌ）；（Ｄ）ＢＭ＋１０％ＦＣＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２；（Ｅ）ＢＭ＋１０％ＥＧＳ＋ＨＣＧ＋Ｅ２＋颗粒细胞（１．５×１０６～３．０×１０６个／ｍＬ）。在３８．５℃、５％ＣＯ２下培养２６ｈ，排卵后第１天卵巢卵母细胞体外成熟率分别为６７．６７％（２０／３０），６０．４２％（２９／４８），８３．６７％（４１／４９）和８０．８２％（５９／７３），排卵后第５天卵巢卵母细胞，在培液Ｄ中体外成熟率为７１．４３％（４５／６３）。排卵后第１天的９８枚卵巢卵母细胞，体外成熟体外受精卵裂率为２１．４３％，２１枚２细胞胚移植５头受体获２头羔羊。研究表明，超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟卵母细胞，并可通过体外受精获得试管山羊 相似文献
12.
１９９７年３月下旬，上海市郊区某蛋鸡场发生以产蛋下降为第一指征的非典型新城疫，通过临诊调查、抗体测定、病毒分离与鉴定进行了确诊。结果：感染鸡群产蛋下降的幅度可高达５０％；新城疫ＨＩ抗体滴度高达１２ｌｏｇ２或以上；用泄殖腔棉拭接种鸡胚的分离物用标准血清鉴定为新城疫病毒（ＮＤＶ），初代尿囊液的ＥＬＤ５０为１０－７．５（０．２ｍＬ），１日龄ＳＰＦ鸡胚脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）分别为１．７２５和２．３２，其毒力接近标准毒株—ＮＤＶ北京株Ｆ４８Ｅ９。 相似文献
13.
新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的… 总被引：8，自引：4，他引：4
用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ 相似文献
14.
同步与异步接毒法在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中的比较 总被引：3，自引：1，他引：2
在应用鸡胚原代成纤维细胞（ＣＥＦ）培养鸡辣鹌鹑化弱毒（简称鹌系毒）细胞苗生产中,试验在制备ＣＥＦ同时接入种毒（简称同步法）,与细胞形成单层后再接毒（简称异步法）,两种方法相比较,结果同步法缩短了培养时间,简化了生产工艺。 相似文献
15.
分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验 相似文献
16.
BFF,rbGH对牛卵泡卵母细胞体外受精后发育的影响 总被引：12，自引：3，他引：9
利用屠宰黄牛卵巢，对２～５ｍｍ卵泡卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）、受精卵的体外培养（ＩＶＣ）进行了系列研究。结果表明，在成熟培养液中单独添加１０％Ｄ０ＥＣＳ（发情当天牛血清）获得了卵泡卵母细胞受精后较高的卵裂率（６４．７％）、桑椹胚发育率（３９．９％）和囊胚发育率（２４．８％），说明在成熟培养液中单独添加Ｄ０ＥＣＳ是可行的；在含１０％Ｄ０ＥＣＳ的成熟培养液中再添加１０％或２０％ＢＦＦ（牛卵泡液），均能提高受精卵的卵裂率以及桑椹胚和囊胚的发育率，以添加２０％ＢＦＦ效果较好，其囊胚发育率（３５．０％）显著高于对照组（２４．８％，Ｐ＜０．０５）；在卵泡卵母细胞成熟培养系统和受精卵共同培养系统中添加１０μｇ／Ｌ重组牛生长因子（ｒｂＧＨ），虽对体外受精卵的卵裂率无显著影响（Ｐ＞０．０５），但能显著提高卵裂胚的囊胚发育率（Ｐ＜０．０５） 相似文献
17.
新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达 总被引：5，自引：1，他引：4
用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致，说明是Ｆｃ基因的表达产物 相似文献
18.
通过转瓶培养ＩＢＲＳ２细胞，选择最佳接毒剂量、接毒时间和收毒时间生产出凝集价（ＨＡ）达２１２的猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）血凝抗原。用抗ＴＧＥＶＳ蛋白和 Ｍ蛋白的单克隆抗体与不同稀释度的ＴＧＥＶ血凝抗原等量混合，在 ３７℃作用 ３０分钟后接种ＩＢＲＳ２细胞和做中和试验（ＮＴ）和血凝抑制（ＨＩ）试验。结果表明ＴＧＥＶ血凝位点与中和位点一致，血凝素位于Ｓ蛋白Ａ位点或其附近。 相似文献
19.
用山羊关节炎－脑炎病毒（ＣＡＥＶ）接种２只绵羊，３￣４个月后，可观察到接毒绵羊发育迟缓和消瘦，其中１只绵羊在接毒后第８个月出现呼吸困难。未接毒对照绵羊发育正常。用ＣＡＥＶ琼扩抗原检测，２只接毒绵羊于接毒后第７周血清抗体阳转。病理剖检在１只接毒绵羊的多种器官中观察到比较轻微的病变，组织学检查可看到轻微的间质性肺炎、脑膜炎和滑膜炎的病变。实验结果表明，ＣＡＥＶ可感染绵羊，对绵羊有一定的致病性。因此用Ｃ 相似文献
20.
对人工感染ＩＢＤＶ雏鸡在接毒后不同时间应用卵黄抗体治疗，并在治疗后的不同时间进行ＮＤ免疫。对免疫后各组鸡的ＨＩ抗体检测显示：ＩＢＤＶ感染后３天治疗的Ｂ、Ｃ组鸡群ＨＩ抗体总体水平显著高于５天后治疗的Ｄ、Ｅ组（Ｐ＜０．０１）；卵抗注射后１０天接种疫苗的Ｃ、Ｅ组鸡群ＨＩ抗体总体水平明显高于３天后接种疫苗的Ｂ、Ｄ组（Ｐ＜０．０５）；除Ｃ组的ＨＩ抗体总体水平略低于对照组、但差异不显著（Ｐ＞０．０５）外，其余各组均不同程度地明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）。 相似文献