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1.
从临床"高热综合征"病例分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syn-drome,PRRSV),经分离培养、血清学鉴定和分子病毒学鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒,并命名为DZ0908。设计了针对病毒Nsp2基因和GP5基因的引物,扩增出目的基因。通过序列比对进行遗传变异分析,该分离株Nsp2基因序列中第483位和第535~563位氨基酸存在缺失,GP5相对保守,该毒株属于PRRSV变异株,为该病毒的进一步研究奠定了基础。 相似文献
2.
《中国兽医学报》2015,(10):1578-1583
从河北省新乐市某猪场采集疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的病料,通过Marc-145细胞培养,RT-PCR检测等方法鉴定,确认分离到1株PRRSV,暂命名为HB-XL株。进一步对其ORF5与NSP2基因克隆测序,经同源性比较及系统进化树等分析,表明该毒株ORF5与NSP2基因与国内流行的缺失变异株遗传关系较近,与国内外经典美洲型毒株及基因重组毒株QYYZ遗传关系较远且与欧洲型LV毒株处于不同分支;ORF5基因编码的200个氨基酸的第13、151位均为具有强毒特性的精氨酸(R),第137位为具有野毒特性的丝氨酸(S);与经典美洲株相比,该毒株NSP2基因分别发生3个碱基和87个碱基的不连续缺失。说明HB-XL株属于美洲型PRRSV并存在不断变异的趋势。 相似文献
3.
为了解宁夏地区感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的基因型和遗传变异情况,收集2008~2014年宁夏4个地区临床疑似发病猪的血清和组织,病毒核酸提取后用特异性引物进行RT-PCR扩增、凝胶电泳和测序,鉴定9份阳性样品。并与国内外猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒代表毒株进行序列比和遗传进化分析。结果表明,9个毒株的ORF5基因中7株属于美洲IV型,2株属于美洲I型。说明宁夏流行的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒均属于美洲型,但病毒亚型之间已发生变异,为PRRSV遗传进化分析和疫病防控提供了新的参考。 相似文献
4.
5.
为了解2013-2014年我国东北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,研究对东北地区3个省份29个地区采集的123份样品进行了检测,并对20份阳性样品的GP5和部分NSP2基因进行了RT-PCR扩增、测序、遗传进化及序列比对分析。结果表明:我国东北地区PRRSV阳性率为16%,与国内外已发表的10株PRRSV参考株相比,GP5基因的核苷酸同源性为84.4%~100%。GP5氨基酸序列分析表明,大多数毒株在氨基酸高变区、中和表位和诱导表位发生了变异,主要变异为:C24→Y24,F25→L25,V27→A27,L28→I28,N34→G34/S34/D34。LN283株GP5和NSP2基因遗传进化树的不同结果表明,LN283株可能涉及PRRSV基因重组。HLJ13株NSP2基因PCR扩增产物有2条相差90 bp的目的条带,且NSP2基因遗传进化树显示两条序列分别属于CH-1a亚群和HuN4亚群,推断HLJ13株可能为经典和高致病性混合感染株。GP5和NSP2遗传进化及氨基酸序列分析结果表明,所有病毒株均属于北美洲型,且以HP-PRRSV为主,经典株与变异株共存。本研究结果可为我国东北地区PRRSV遗传进化研究及疫病防控提供参考。 相似文献
6.
《中国兽医杂志》2019,(4)
为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在广东流行毒株的分子遗传变异情况和发展趋势,通过RT-PCR方法,对2016—2017年采自广东省各地906份疑似病料进行PRRSV检测,并对其中9株PRRSV的NSP2和ORF5基因进行测序及遗传变异分析。结果显示,有399份样品被检出为阳性,阳性率达到44%;通过NSP2和ORF5基因序列比对和遗传进化分析,发现广东流行毒株主要为美洲型PRRSV,且全部9株与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)高度同源;其中7株的NSP2蛋白存在与HP-PRRSV相同的1+29个氨基酸的不连续缺失特征;9株GP5蛋白的2个重要抗原相关区域的氨基酸位变化特征与HP-PRRSV一致,与美洲型代表株VR-2332相比变异明显。结果表明,PRRSV在广东流行的情况仍比较严重,当前HP-PRRSV依然是广东的优势病毒株,提示对PRRSV的流行和变异进行持续监测是有必要的,还应加强对其致病机理和新型疫苗研发等的深入研究。 相似文献
7.
为了解河北省猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及毒株遗传变异趋势,应用RTPCR方法,对河北省10个地区的18个发病猪场进行调查,分别扩增出23株缺失部分NSP2基因和完整ORF5基因的毒株。序列分析结果显示,23株PRRSV NSP2基因均缺失了不连续的30个氨基酸,从而证实河北省存在美洲型PRRSV变异株的流行。23株PRRSV ORF5核苷酸序列与国内外已发表的基因序列绘制的遗传进化树表明:20个毒株与JXA1形成一个基因亚群;而另3个毒株与NADC30毒株形成一个基因亚群,并且变异最大,是以后的主要临床研究对象。推导编码氨基酸的比较结果表明,河北省流行的PRRSV毒株ORF5基因编码蛋白已发生较大变异,需在今后临床诊断与疫苗防控中引起重视。 相似文献
8.
河南某规模化猪场,按照每年4次高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗免疫接种,2016年11月,妊娠后期母猪陆续产死胎。为确诊病因,采集死产胎儿肺脏组织,采用RT-PCR方法,扩增PRRSV NSP2基因部分片段(根据产物片段大小,能区分高致病性与经典毒株)和ORF5全长基因,结果显示,NSP2片段扩增大小约为418bp,表明检测毒株是高致病性PRRSV毒株;ORF5全长基因扩增结果,与预期大小片段一致。为分析猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫失败的原因,利用DNA Star软件,将检测毒株ORF5基因序列与其他17种PRRSV毒株ORF5基因序列构建遗传进化树,并对检测毒株与其他9种高致病性PRRSV毒株ORF5基因推导的氨基酸序列进行分析、比较及GP5抗原性分析。结果显示,ORF5序列分析表明,检测毒株与2015年福建分离毒株FJYR、河南分离毒株TJbd14-2同源性最高,分别为97.2%和97.0%,与美洲型经典毒株VR-2332同源性为87.7%,与欧洲型毒株Lelystad virus、NMEU09-1亲缘关系最远,分别为62.8%和62.6%;根据ORF5DNA序列推导氨基酸序列分析表明,与其他9种高致病性PRRSV毒株相比,从病料中检测毒株的GP5共有13个位置发生变异;GP5抗原指数分析表明,第30-40、51-63位抗原性,相比其他9种高致病性PRRSV毒株显著降低,据此推测这是导致免疫失败的根本原因,导致该猪场母猪流产的病原为一种变异的美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征毒株。 相似文献
9.
猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传多样性是由ORF5/GP5和ORF7/N蛋白的变异造成的.目前对病毒进行全基因组的研究有限,重点只关注某个或某些毒株类型,且通常会根据一个分离株的结果来推断整个猪繁殖与呼吸综合征病毒群的特征.本研究对6个Ⅰ型分离株的ORF1a到ORF7基因进行了测序,使用系统发育分析和对已知线性B表位变异度分析来筛选其它有用的基因Ⅰ型全长序列.同时,在不同的细胞系统中评估了所有毒株对细胞活素的诱导能力.在6个缺失77个氨基酸的毒株中,2株的非结构性蛋白2(nsp2)是变异最大的区域；在ORF3和ORF4中也发现了缺失.系统发育分析表明,根据检测到有缺失的ORF和nsp9来对分离株分类结果不同.有趣的是,大部分文献预测的B细胞线性表位(尤其是出现在nsp2和GP4区域的),在本研究的一些分离株中是缺失或变异的.而且,nsp2有缺失的分离株中,4株可诱导TNF-α,3株可诱导IL-10.这些研究结果表明,猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因多样性是由nsp1、nsp2、ORFs 3和4造成的,这些变异也影响到了已知的病毒B细胞线性表位.因此,不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒可能在本质上具有不同的免疫学特征,这些研究数据加深了人们对于猪繁殖与呼吸综合症病毒多样性的理解. 相似文献
10.
为了解河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）流行毒株的遗传变异情况和发展趋势。通过RT-PCR方法,对2012―2013年采自河南省各地疑似病料进行PRRSV检测,并对阳性病料进行病毒分离鉴定及分子流行病学分析。结果显示：54份疑似病料中17份检测为阳性,阳性率为31.5%,并分离出3株PRRSV;通过完整的ORF5基因和部分NSP2基因序列遗传进化分析表明,河南地区流行毒株主要为美洲型PRRSV,且17份阳性样品中10份与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）高度同源、2份与经典PRRSV高度同源、另外5份与美洲流行毒株NADC30高度同源,该类毒株的NSP2基因在不同部位存在393个核苷酸缺失,国内尚未见相关报道。结果表明,2012―2013年河南地区PRRSV主要流行毒株为HP-PRRSV,同时出现了新的变异毒株,使河南地区乃至我国PRRSV变异种类更加多样化,提示加强PRRSV流行及变异的监测十分必要。 相似文献
11.
为了解广西地区的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异及流行情况,本实验室从广西某发病猪场采集到的猪肺脏组织中检测到1株PRRSV,命名为GXNN1839,并对该毒株进行病毒的分离鉴定、GP5和Nsp2的测序分析。结果显示:该毒株可在PAM细胞上分离增殖,有明显的细胞病变,通过IFA试验可以检测到细胞内PRRSV N蛋白的表达;对分离株的GP5基因测序和遗传演化分析显示,该毒株为美洲型PRRSV,且与美国病毒株NADC30在同一分支上,同源性分析表明,GXNN1839与北美病毒株NADC30的同源性最高,为93.1%,与我国分离的NADC30-like病毒株CHsx1401的同源性为91.7%,与VR-2332、CH-1a的同源性分别是87%、86.7%,与高致病性病毒株JXA1的同源性为86.7%,与欧洲株Lelystad-virus(LV)同源性为62.0%;Nsp2氨基酸序列对比显示,该毒株具有和北美毒株NADC30相同的131个氨基酸的不连续缺失(111+1+19)。该毒株的分离为下一步研究PRRSV NADC30-like病毒株致病性和了解广西地区的PRRSV的遗传变异及防控措施提供了借鉴意义。 相似文献
12.
为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的基因变异情况,采用RT-PCR方法对某猪场疑似患有猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪组织样品进行鉴定,测序获得全基因,并对该毒株的NSP2基因缺失特征同源性和遗传进化及重组情况进行分析。结果显示:该猪场感染猪体的病原体为PRRSV,该毒株被命名为180404-2fei;180404-2fei毒株的NSP2区存在131(111+1+19)个氨基酸的不连续缺失,与报道的类NADC30毒株缺失特征一致;180404-2fei的NSP2基因与NADC30毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为92.2%和90.1%,180404-2fei毒株的ORF5基因与NADC30的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为93.5%和92.0%;遗传进化和重组分析结果表明,180404-2fei毒株属于NADC30-Like亚群,可能是由NADC30与HP-PRRSV重组而来。本研究通过对一株类NADC30 PRRSV的全基因组序列进行分析,为研究PRRSV的遗传变异和PRRS的防控提供了参考依据。 相似文献
13.
An TQ Tian ZJ Zhou YJ Xiao Y Peng JM Chen J Jiang YF Hao XF Tong GZ 《Veterinary microbiology》2011,154(1-2):104-112
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), the causative agent of porcine reproductive and respiratory syndrome, is responsible for serious disease in pigs resulting in substantial economic losses in the porcine industry. An attenuated vaccine strain, HuN4-F112, was obtained by passaging virulent PRRSV strain HuN4 on Marc-145 cells (for 112 passages), and the full-genomic sequence was determined. To understand the molecular basis of attenuation of PRRSV, we compared and analyzed the genomic sequences of HuN4/HuN4-F112, together with those of other four virulent parental/attenuated vaccine strains. Among the 19 PRRSV proteins, two (NSP6 and NSP8) were highly conserved, without any mutations and considered irrelative to attenuation. The mutation rates of envelope-associated structural proteins were obviously higher than those of most non-structural proteins. It is interesting that the gene of the smallest structural protein, E protein, had the highest mutation rate among all of the structural genes analyzed, and also harbored a highly variable region. Our results indicate that determinants of PRRSV attenuation are multigenic products of both non-structural and structural genes. To our knowledge, this is the first report showing that the envelope-associated structural proteins (including E and GP2-GP5 proteins) may play a significant role. These findings contribute towards our understanding of PRRSV attenuation and will provide an important clue for further study. 相似文献
14.
为了给广西柳州预防和控制猪繁殖与呼吸综合症提供理论数据,本研究对利用RT-PCR方法扩增了该地区流行株LZ5和LZ6的NSP2和ORF5基因并进行测序分析,然后与GenBank中已发表的PRRSV毒株的NSP2和ORF5基因序列进行比较。结果显示,2株柳州地方流行株均属于美洲型,在NSP2基因第483位和535~563位氨基酸均存在30个氨基酸的不连续缺失,其NSP2和ORF5基因的核苷酸同源性分别为99.5%和99.7%,推导的氨基酸同源性分别为100%和99.5%;与近几年国内流行的高致病性蓝耳病代表性毒株之间的NSP2、ORF5基因核苷酸同源性分别为94.7%~96.2%和97.2%~98.0%,其推导的氨基酸同源性分别为92.0%~95.5%和94.5%~97.0%。序列分析结果表明此次柳州流行的PRRSV与2006年夏高热病引起的基因序列高度同源,在基因序列上并未显示出新的特性,在国内也缺乏明显的地域性差异。 相似文献
15.
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) was divided into North American and European genotypes. NSP1 was an important non-structural protein of PRRSV, which was auto-cleaved from the replicase polyprotein into NSP1α and NSP1β subunits and played an important role in the immune suppression. In this study, six monoclonal antibodies (MAbs) against the recombinant PRRSV NSP1, expressed in Escherichia coli system, were screened out and identified. Western blot and IFA results indicated that 4 out of 6 MAbs recognized the recombinant NSP1α and 2 MAbs recognized NSP1β. Epitope mapping results indicated that MAb 4H2 recognized the linear epitopes E(54)EPLRW(59) in NSP1α, MAbs (2G5, 3E11 and 4D4) recognized the epitopes H(157)VLTNLP(163) in NSP1α, and MAbs 3C7 and 1H7 reacted with the epitopes 185aa to 232aa in NSP1β. Protein sequence alignment of NSP1 indicated E(54)EPLRW(59) was conserved in all North American PRRSV strains, whereas European type strains has variable amino acids in this region. The epitope H(157)VLTNLP(163) was relatively conserved among all PRRSV strains, except for a L162→S162 change in European type strains. The epitope 185-232aa was variable among North American PRRSV strains. These results may facilitate future investigations into the function of NSP1 of PRRSV and diagnostic methods for PRRSV infection. 相似文献
16.
为了解贵州省毕节地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因变异情况,于2017年从贵州毕节地区某疑似感染PRRSV猪群分离到1株PRRSV,将其命名为GZZJ201711毒株。采用RT-PCR分段扩增出PRRSV GZZJ201711株13个基因片段,分别连接到pMD19-T载体上进行测序,拼接后得到PRRSV GZZJ201711株全基因组长15 322 bp (去除polyA尾),包括5’UTR、ORFla-ORF7、3’UTR。序列分析表明,GZZJ201711株与欧洲型Lelystad virus(LV)株核苷酸同源性为60.3%,与美洲型毒株代表株ATCC VR-2332核苷酸同源性为89.2%,与HP-PRRSV(HUN4、JXA1、TJ)等毒株同源性在98.8%~98.9%之间。GZZJ201711株与高致病性毒株JXA1、HUN4、TJ属于同一小分支,其中与XJu-1、GDHY毒株遗传关系最近。GZZJ201711毒株的NSP2基因有30个氨基酸缺失,与JXA1、HUN4、TJ等HP-PRRSV毒株缺失位置一致。 相似文献
17.
从PRRSV-ZB病毒株感染细胞培养物提取总RNA样本,以Oligo(dT)反转录后,针对PRRSVN、M和GP5基因进行PCR扩增。结果表明:N基因扩增效果明显高于GP5和M基因(p<0.05),N、M、GP5基因的最小检测量分别为0.1ug,0.1ug和0.4ug。对N、M和GP5基因的稳定性或保守性进行分析可见,M和N基因相对保守,GP5基因相对变异较大。本实验以N基因作目的基因,对11个临床发病猪场进行PRRS病原核酸检测,均扩增出377bp特异性条带。 相似文献
18.
为了解广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株ORF5基因遗传变异情况,采用RT-PCR对2018年采自广东部分地区疑似患有PRRS的猪肺组织样品进行PRRSV ORF5基因扩增以及克隆测序,并进行生物信息学分析。结果表明,成功扩增出18株PRRSV流行毒株的ORF5基因片段。ORF5基因序列分析表明,18株PRRSV流行毒株ORF5基因核苷酸同源性为83.7%~99.8%,PRRSV流行毒株与参考毒株的同源性为62.1%~99.8%。基于ORF5基因的遗传进化树分析表明,18株PRRSV流行株均为美洲型毒株。其中,10株与以JXA1为代表的高致病性毒株亲缘较近,2株与新型高致病性毒株FZ16A相似;1株与以NT1为代表的疫苗返强毒株亲缘较近,1株与以R98为代表的疫苗毒株亲缘性较近,4株与广东新报道的GM2和QYYZ毒株亲缘性较近。DNA推导氨基酸序列分析表明,18株流行株的氨基酸序列与国内已报道的代表株相比发生不同程度的变异,GP5抗原表位上存在着差异。研究结果揭示了广东地区PRRSV有新型强毒株、重组毒株以及疫苗返强毒株的流行,提示养殖者谨慎、合理使用疫苗,防止疫苗毒株返强和毒株重组,为该地区防控PRRS提供参考。 相似文献