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为精确定位鲍疱疹病毒(HaHV-1)在宿主不同组织器官中的分布,明确HaHV-1的组织亲嗜性和侵染进程,实验基于环介导等温扩增技术(LAMP)和原位杂交技术建立了HaHV-1的原位LAMP检测方法。利用该方法研究了HaHV-1人工感染实验不同时间节点,病毒在杂色鲍主要器官的分布规律和组织亲嗜性。并对已报道的HaHV-1 LAMP扩增引物进行优化,实现对载玻片上原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,筛选最佳显色时间等原位杂交反应条件,最后通过免疫酶标技术分析HaHV-1在组织样本内的分布情况。结果显示,HaHV-1原位LAMP检测方法最适显色时间为60 min。利用该方法对攻毒后24、36、48、60和72 h,HaHV-1在杂色鲍外套膜、鳃、肝胰腺和腹足神经节4种样本的组织分布情况进行检测和分析。病毒阳性信号最早于36 h出现在腹足神经节,48 h在部分外套膜样本中观察到病毒阳性信号,分布局限于外周神经中。在感染实验后期,病毒阳性信号出现在肝胰腺结缔组织中。病毒阳性信号出现的部位常有大量细胞渗出和浸润,渗出的细胞中可见被病毒感染的血淋巴细胞。本研究建立的HaHV-1原位LAMP检... 相似文献
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笔者初步研究了企鹅珍珠贝（Pteria penguin）组织蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）的基因克隆和功能,通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因（命名为pgCTSD）。该基因cDNA全长1 767 bp,其中5＇UTR为38 bp,3＇UTR为553 bp,ORF为1 176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽（Met1-Ala18）、前体域（Leu19-Lys47）和成熟域（Tyr48-Ser392）三部分,分子量为42.3 kDa,等电点为8.04。pgCTSD氨基酸序列与大珠母贝（Pinctada maxima）pmCTSD的相似性最高（79%）,与其他物种的相似性为59%～75%。荧光定量分析表明,空白对照组中pgCTSD mRNA在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,且在闭壳肌中表达量最少,肝胰脏中最高。与试验对照组相比,脂多糖（LPS）刺激6 h后性腺和肝胰脏显著下降,闭壳肌的表达量虽不大但增加显著,外套膜和鳃组织变化不显著;哈维弧菌（Vibrio harveyi）刺激6 h后肝胰腺和外套膜显著下降,闭壳肌和鳃显著上升,性腺无显著变化。肝胰腺中pgCTSD对LPS和弧菌刺激的应答反应表明pgCTSD可能参与了免疫反应。 相似文献
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采用免疫组织化学SABC法对短蛸（Octopus ocellatus）消化系统和部分器官中μ受体（mu opioid receptor）进行定位研究。结果表明,短蛸腕、漏斗、外套膜腹面、口球、嗉囊、胃盲囊、肠、直肠、前唾液腺、后唾液腺、肝胰脏均呈μ受体阴性,但食道内上皮、外膜、结缔组织和胃角质层有μ受体分布,外套膜背面、腕间膜的上皮或近上皮部位呈μ受体阳性。μ受体在短蛸不同部位分布密度的不同,可能与各器官的功能不同有关。 相似文献
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软体动物血蓝蛋白的结构和免疫功能的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
软体动物是动物界中仅次于节肢动物的第二大门类物种,种类繁多,体制差异大。它们的循环系统和呼吸系统也具有多样性,尤其是体内负责运输氧气的蛋白差别很大,分别为血蓝蛋白和血红蛋白。血蓝蛋白主要分布于头足纲、大部分腹足纲 相似文献
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南美白对虾人工感染细菌后肝胰脏中主要变化蛋白的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
以采自汕头的南美白对虾为研究对象,运用病原菌人工感染、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF/MS)、生物信息学和免疫印迹(Western-blot ting)等现代分子生物学方法,探索和鉴定对虾感染后肝胰脏中的主要变化蛋白。结果表明,南美白对虾人工感染溶藻酸弧菌6h之后,实验组和对照组肝胰脏的SDS-PAGE图谱出现12条明显差异条带,其中分子量分别为75kDa(命名为p75)和73kDa(命名为p73)的两种蛋白变化最为明显,进一步研究显示,p75和p73分别为血蓝蛋白的两个不同的亚基。提示,肝胰脏中的血蓝蛋白可能在对虾抗感染免疫中发挥重要的作用。 相似文献
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以邻苯二酚为底物研究部分理化因子对杂色鲍（Haliotis diversicolor）血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果表明,血蓝蛋白酚氧化酶活性最适温度34℃、最适pH6．4;铜离子（Cu^2＋）能极其显著增强血蓝蛋白的酚氧化酶活性,增强率为264％,而乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、镁离子（Mg^2＋）和锌离子（Zn^2＋）则能极其显著地抑制其活性,EDTA的抑制效率最高,抑制率为52．8％,Mg^2＋和Zn^2＋的抑制率分别为27．8％和25％。钙离子（Ca^2＋）对血蓝蛋白酚氧化酶活性影响不显著。 相似文献
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为探讨育珠对壳基质蛋白基因表达的影响,开展了合浦珠母贝（Pinctada fucata）N19和Prismalin-14基因在育珠贝和非育珠贝中的荧光定量表达研究。结果显示,N19和Prismalin-14在育珠贝与非育珠贝的闭壳肌、肝胰脏、性腺、肠、鳃等组织中均无表达,在外套膜均有表达;N19在珍珠囊表达,而Prismalin-14则不表达。N19勺Prismalin．14在育珠贝外套膜的表达量均大于非育珠贝,表明育珠可能对某些壳基质蛋白的表达具有一定的促进作用。其中Prismalin-14在育珠贝外套膜的表达量最高（P〈0．01）,是非育珠贝外套膜Prismalin-14的1．23倍,是育珠贝外套膜N19的25．04倍,是非育珠贝外套膜N19的41．04倍,推测在珍珠贝生长过程中,对Prismalil7-14的需求量可能比N19大。N19在育珠贝珍珠囊中表达量最高（P〈0．01）,是育珠贝N19外套膜的11．58倍,是非育珠贝外套膜的18．97倍,推测在珍珠形成的过程中,对N19的需求量可能比贝壳自身生长对N19的需求量大。 相似文献
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卵形鲳鲹不同组织同工酶表达的差异 总被引：2，自引：0，他引：2
运用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对卵形鲳鲹（Trachinotusovatus）6组织（肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脑、脾脏）的5种同工酶（EST、LDH、MDH、ME和AST）进行了初步研究，并对5种同工酶的同工酶位点及其酶谱表型进行了分析。结果表明，卵形鲳够的5种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。EST由2个基因位点编码，Est-1在这6种组织中都存在，Est-2只存在于肝脏和。肾脏中；LDH由3个基因位点编码，共检测到3条谱带，Ldh-2只存在于肾脏中；MDH由2个基因位点编码，Mdh-1表达为MDH1和MDH22条酶带，Mdh-2表达为MDH31条酶带，在肝脏中的活性最强；ME由1个基因位点编码，只检测到1条酶带，肝脏的含量丰富；AST由2个基因位点编码，只在肝脏和肾脏中检测到，共检测到3条谱带。 相似文献
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凡纳滨对虾精氨酸激酶的多克隆抗体制备及组织特异性表达分析 总被引：1，自引：0，他引：1
精氨酸激酶（arginine kinase,AK）在调节无脊椎动物磷酸精氨酸与ATP之间能量平衡的过程中具有重要作用。在前期工作基础上,设计特异引物,以凡纳滨对虾肌肉组织cDNA为模版,克隆得到了1 071 bp的凡纳滨对虾精氨酸激酶的完整开放阅读框;将它克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化BL21 (DE3) 菌株,经诱导后表达出GST-AK融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗血清,经检测该抗原与抗体识别良好。利用得到的抗体对凡纳滨对虾AK在蛋白质水平上的特异性表达进行分析发现,精氨酸激酶在对虾的肌肉、心脏、神经、血细胞和胃组织中具有高的表达量,而在眼柄、肝胰腺、鳃和皮肤组织中表达量较低。为进一步研究精氨酸激酶在对虾体内的功能奠定了基础。 相似文献
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对盐藻细胞反复冻融和超声波破碎获得超氧化物歧化酶粗酶液,再经丙酮沉淀、70℃热处理、DEAE-52柱层析获得纯化超氧化物歧化酶,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测出1条超氧化物歧化酶谱带。该纯化超氧化物歧化酶在紫外光区的吸收峰波长259 nm和可见光区的吸收峰波长671 nm与报道的Cu/Zn-SOD基本一致,并且它对H2O2和KCN均敏感,说明盐藻中的超氧化物歧化酶为Cu/Zn-SOD类型。 相似文献
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鲤春病毒血症病毒糖蛋白的截短表达及其免疫原性分析 总被引：2，自引：1，他引：1
为了揭示鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域,本研究对SVCV的糖蛋白基因进行截短表达,并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过SOSUI以及DNAStar 6.0软件对SVCV糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后,采用RT-PCR对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增,并构建重组表达质粒p GEX-Gtr,对其进行诱导表达后获得截短的SVCV糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后,作为免疫原制备兔抗血清,采用ELISA法检测其效价,采用免疫印迹以及间接免疫荧光技术检测该重组蛋白的免疫原性。研究结果显示,截短表达的糖蛋白编码基因长1317 bp,编码439个氨基酸(29~467),推测分子量为49.6 k D。利用该重组蛋白制备的兔抗血清,其与重组蛋白的反应效价为1∶64000,。免疫印迹及间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清与SVCV-HN株能发生特异性反应,表明该重组蛋白与天然的病毒表面糖蛋白的免疫原性无差异。上述研究结果表明,截短表达的重组蛋白具有很好的免疫原性,可应用于免疫诊断技术研发与基因工程疫苗的研制。 相似文献
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鳜鱼生长性状遗传参数的估计 总被引：1，自引：0，他引：1
为深入了解选育过程中鳜鱼(Siniperca chuatsi)生长性状的遗传变化规律,本研究以来自湖南、江苏、广东的翘嘴鳜为基础群体,构建了21个同胞半同胞家系,利用动物模型对不同家系进行了遗传分析:鳜鱼210日龄体重、体长的遗传力为0.40、0.45,属于高遗传力;体高的遗传力为0.29,属于中遗传力。相关分析表明,鳜鱼体重?体长间的遗传相关为0.96;体长?体高间的遗传相关为0.92,体重?体高间的遗传相关为0.94,因此进一步选育采用个体选育或者个体选育与家系选择法相结合的方法都能获得较好的结果;对某一生长性状进行选育时,其他两个相关性状也会得到间接选育。经过选育鳜鱼F2群体平均体重遗传进展为7.5 g,较第一代增加7.5%,F3群体平均体重的遗传进展为9.75 g,较第二代增加9.0%。F3群体平均体长与F1比较无显著提高。F3群体平均体高的遗传进展为0.22 cm,较第一代增加9.9%。本研究旨在为提高鳜鱼育种效率提供重要参数,加速育种进程。 相似文献
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《Journal Of Aquatic Food Product Technology》2013,22(3):67-79
Abstract A liquid chromatography (LC) method was tested for simultaneously determining ATP-related compounds in sardines. The methodology consisted in extracting ATP and its degradation products; ADP, AMP, IMP, inosine, and hypoxantine from muscle tissue by perchloric acid solution. The mixture was homogenized, centrifuged, its pH adjusted, and the supernatant was analyzed by LC. An isocratic elution system was used and the mobile phase was a mixture of 0.01 M potassium dihydrogen phosphate with 0.001 M potassium chloride. ATP derivatives were thoroughly separated in less than 15 min of chromatographic elapsed time. This method was validated by assessing the following aspects: specificity, linear ity, r ecovery, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), UV detection wavelengths, and stability of nucleotides under frozen storage. The results demonstrated that ATP catabolites from sardines can be evaluated by using this methodology. 相似文献
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兴凯湖当壁镇湖区夏季浮游植物群落结构变化 总被引：1，自引：0，他引：1
2009年夏季对兴凯湖当壁镇湖区浮游植物群落结构进行研究。结果表明,兴凯湖当壁镇湖区浮游植物共计7门41种属,绿藻、硅藻的种类为主,分别占39.0%、24.4%;数量、生物量均值分别为192.97×104ind.L-1、2.4605mg.L-1,硅藻的数量、生物量最多（147.47×104ind.L-1、2.2818 mg.L-1）。优势种中硅藻、绿藻、蓝藻、黄藻门的种类均有,分别为扭曲小环藻（Cyclotella comta）、颗粒直链藻最狭变种（Melosira granulata）;普通小球藻（Chlorella vulgaris）、湖生卵囊藻（O觟cystis lacustris）;小形色球藻（Chroococcus minor）以及黄丝藻（Tribonemnsp.）。调查湖区,浮游植物的多样性较丰富（H＇均值2.09,J均值0.56）。比较2001年研究结果,兴凯湖当壁镇湖区夏季浮游植物的种类组成、数量变化不大;硅藻、隐藻优势种的比例下降,绿藻增加,优势种中丝状藻类比例增加;浮游植物的生物量有所上升,调查湖区鱼产潜力有升高趋势。 相似文献