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猪Ⅰ型干扰素融合表达及其抗病毒活性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术将猪I型干扰素PoIFN-α和PoIFN-β成熟肽基因进行连接,构建表达载体pET30a-PoIFN-α/β进行融合表达,利用细胞病变抑制试验检测融合干扰素rPoIFN-α/β抗病毒活性,并与非融合干扰素rPoIFN-α和rPoIFN-β进行比较分析。结果表明,在PK-15细胞上,融合干扰素rPoIFN-α/β表现出较强的抗病毒活性,其对VSV、PRRSV、CSFV、PRV、PPV、PASTV、PEDV和TGEV的抗病毒活性明显高于非融合干扰素,体现了一定的叠加效应,可以用于猪病毒性疾病的防治。 相似文献
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干扰素作为一类具有多种生物学功能的细胞因子,已经在人类疾病的防治中得到广泛应用.在兽药行业,大量的临床试验证明了干扰素激活免疫系统快速、广谱的有效性,但干扰素蛋白的活性和使用成本一直是制约其在兽药中应用的重要因素.为了探索人工重组的干扰素在兽医临床上应用的可行性,本文应用果蝇胚胎细胞表达系统筛选出了稳定表达猪干扰素α(rPIFNα)的细胞系,利用Western blot分析了细胞筛选前后的分泌蛋白的表达情况.结果显示,稳定表达细胞系的rPIFNα表达量较高,通过细胞试验证实,分泌表达的rPIFNα具有较强的抗病毒作用.本研究首次利用果蝇胚胎表达系统稳定表达猪干扰素,对干扰素在临床上应用是一个有益的尝试. 相似文献
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在猪规模化、集约化养殖过程中,影响其养殖质量、猪肉品质、安全性以及规模养殖效益的一个重要方面即为病毒性疾病。现阶段,治疗猪病毒性疾病的途径与方法有多种,其中干扰素的应用,不仅治疗过程迅速、疗效良好,而且其在对于包括猪在内的脊椎动物病毒性疾病治疗过程中,还能起到诱导抗病毒性蛋白的作用,以提升脊椎动物的自身免疫力水平。为此,文章将关注点放置在干扰素在治疗猪病毒性疾病中的应用方面,通过从干扰素的作用机制和生物活性等分析入手,探讨其在治疗猪病毒性疾病中的具体应用。 相似文献
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猪α干扰素基因在毕赤酵母中的分泌表达 总被引：12，自引：0，他引：12
将猪α干扰素(PoIFN-α)基因克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,电转化毕赤酵母KM71H菌株,抗生素ZeocinTM浓度梯度筛选高抗性转化子,以PCR鉴定阳性重组菌株。筛选出的高拷贝重组菌株分别通过BMGY/BMMY培养基和YPG培养基,用甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot印迹杂交结果证实,表达产物为重组PoIFN-α融合蛋白,经细胞毒性试验检测(WISH/VSV系统),表达产物的抗病毒活性为4.1×104IU/mL。 相似文献
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猪α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定 总被引：1，自引：0，他引：1
利用基因工程技术,将编码梅山猪α-干扰素成熟蛋白基因(mPoIFNα,501 bp)亚克隆到含分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建成分泌型重组表达载体pPIC9K-mPoIFNα。用化学方法(LiCl)将线性化的mPoIFNα与ssDNA共转化入毕赤酵母菌株GS115,转化子经MD平板筛选和PCR鉴定后,得到的阳性菌株再以高浓度的G418筛选多拷贝重组子。该高拷贝菌株经1%甲醇连续诱导4 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测,结果表明在毕赤酵母中猪α-干扰素获得分泌型表达,表达产物约为20 000,在GS115中的表达量约为40mg/L,占GS115表达的可分泌型总蛋白的40.1%。对表达产物进行理化分析发现,重组酵母菌表达的蛋白耐酸(pH2),对热(56℃)部分敏感,并能被特异性抗猪α-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。细胞病变抑制法(CPE50)测定干扰素生物活性,试验结果表明rPolIFNα具有较高的抗病毒生物活性,在MDBK中的抗VSV比活性为8.0×106U/mg。 相似文献
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干扰素是由干扰素产生细胞（interferon—producing cells,IPCs）所分泌的一类具有高度生物学活性的糖蛋白,具有广谱的抗病毒、抗肿瘤、抗细胞增殖和免疫调节等功能。目前,猪病毒性传染病依然是制约养猪业发展的一类重要且难以控制的疾病,由于猪干扰素对猪病毒性传染病具有防御和抑制作用,有关猪干扰素的应用研... 相似文献
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利用PCR技术从猪瘟免疫猪血中提取基因组,并从中扩增出约500 bp的基因片段;将此基因片段克隆于大肠杆菌pMD18-T载体,经PCR、测序鉴定后,将其片段克隆于pET32a(+)载体进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,结果表明,猪α干扰素在pET32a原核表达载体中成功地获得了分泌表达,且表达蛋白在PK-15细胞上表现出较强的抗病毒活性,这为进一步研究猪α干扰素的功能和开发奠定了基础. 相似文献
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我国是世界养猪第一大国,同时也是猪病多而复杂的国家。猪的疾病,尤其是病毒性疾病仍然严重地危害着我国畜牧业的持续发展,部分人畜共患病毒病还直接危害着人类的健康。由于猪α干扰素具有广谱的抗病毒活性,且其具有速效多能、毒副作用小的特点,无疑是猪病毒性疾病预防和治疗的理想生物制品。近年来,许多科研工作者为了表达出高效、廉价的重组猪α干扰素,对猪α干扰素进行了深入研究。1猪干扰素的分类参照国际干扰素命名委员会制定的干扰素命名规则,即根据干扰素的动物来源进行初分类,再根据干扰素的抗原特性和分子结构的差异分成不同的型,… 相似文献
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利用RT-PCR方法从猪肝细胞总RNA中扩增出编码猪α干扰素基因,根据大肠杆菌偏嗜性及活性位点改造基因并克隆至原核表达载体p ET21a,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白诱导表达和鉴定。重组蛋白以包涵体形式表达,经变-复性及纯化处理后,获得多种不同基因型的高纯度猪α干扰素。用细胞病变抑制法在MDBK/VSV系统上进行抗病毒活性测定,结果表明经过基因改造的猪α干扰素(Po IFN-M6)具有更高抗病毒活性,约为2.97×108U/mg。本研究为猪α干扰素基因工程产品的研发及其在临床兽医的应用奠定基础。 相似文献
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本文探讨聚合体形式的猪干扰素α真核表达质粒(p VAX1-PIFNα)对猪PRRSV弱毒疫苗免疫作用的增强作用。在猪免疫PRRSV弱毒疫苗的同时,注射p VAX1-PIFNα重组表达质粒与多聚赖氨酸(PLL)的聚合体(PLL-p VAX1-PIFNα),以研究聚合体状态的干扰素对PRRSV免疫的增强作用。将分泌表达干扰素α的重组真核表达质粒p VAX1-PIFNα与PLL聚合,同时免疫PRRSV弱毒疫苗和PLL-p VAX1-PIFNα聚合体,使用ELISA试剂盒检测PRRSV中和抗体;另外,分离培养猪外周血白细胞(PBMC)进行体外试验,分析PLL-p VAX1-PIFNα聚合体刺激淋巴细胞后IFN-γ的分泌情况。中和抗体的结果表明,PLL-p VAX1-PIFNα的使用可明显提高PRRSV活疫苗诱导产生PRRSV中和抗体的能力;细胞试验的结果表明,经PLL-p VAX1-PIFNα刺激后,明显提高了淋巴细胞分泌表达IFN-γ的水平。在PRRSV疫苗免疫中,聚合体状态的猪IFNα重组表达质粒可有效提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,这一结果也为干扰素或其他重组蛋白在疫苗免疫中的应用提供了新的思路。 相似文献
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为了表达猪重组α干扰素(rIFN-α)并对它的生物学特性进行研究,本研究采用RT-PCR从猪脾淋巴细胞中扩增出猪IFN-α基因,以pPROExHTa为载体构建了表达重组质粒polFN-α,转化宿主菌BL21,经IPTG诱导猪rIFN-α获得了表达,其分子量约22 ku.该重组蛋白以包涵体形式存在,其表达量占总菌体蛋白7%.粟用Ni-Ni金属螯合亲和层析方法纯化,其纯度达到80%以上,包涵体经复性后,在WISH/VSV系统上,采用细胞病变抑制法测定表明,其稀释度在小于1:103时才有抗病毒活性.本实验表达的猪rIFN-α具有一定的抗病毒活性,为研究具有广谱抗病毒效应的猪干扰素具有重要意义. 相似文献
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猪α-1干扰素(poIFNα-1)对猪的很多病毒性传染病,如流行性腹泻、猪瘟、传染性胃肠炎等,以及对牛病毒性腹泻、小鹅瘟、羔羊腹泻等都具有较好的疗效,试验证实猪干扰素与牛羊等动物之间存在交叉活性。研究采用Escherichia coli大肠杆菌表达重组猪α-1干扰素,结果表明,此法不仅表达量高,而且成本低廉,工艺简单,生产周期短,极具推广价值。1试验材料1·1菌株已携带猪α-1干扰素基因的pBV220载体转化的Escherichia coliDH 5α菌株,-80℃保存,临用前筛选。1·2试剂蛋白胨(Sigma)、酵母粉(Sigma)、琼脂粉(Sig-ma)、尿素(Sigma)均为分析纯。ME… 相似文献
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猪病毒性疾病以高热为主要表现,其与细菌性疾病不同,多无特效药物,若疾病发生后无法得到控制,极易引发混合感染,死亡率极高。干扰素(IFN)应用于猪治疗病毒性疾病,具有较好的临床功效,可起到抗病毒作用,不仅能抑制病毒蔓延,还具有免疫调节等生物学活性。本文现对干扰素在猪治疗病毒性疾病中的应用进行综述。 相似文献
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干扰素是一种高活性的糖蛋白,具有抗病毒、抑制细胞增殖、调节免疫的作用,在生猪病毒性疾病治疗中发挥着重要的作用。基于此背景,本文对干扰素在治疗猪病毒性疾病的应用进行探讨,以期为相关工作人员提供理论借鉴。 相似文献
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旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×108 IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2-10.29,抗P... 相似文献
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猪病毒性疾病已成为当前制约养猪业健康发展的重要因素,干扰素是一种广谱的抗病毒生物制剂,几乎对所有病毒都有一定程度的抑制作用。综述了干扰素对预防与控制规模化猪场病毒性疾病的作用的研究进展。 相似文献
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随着社会的不断发展,猪病毒性疾病治疗得到了人们的广泛关注.传统的治疗过程中存在着一些问题,主要表现为对病毒的认识不清、抗生素的适用范围狭小、免疫调节方式不灵活等等.针对以上情况,治疗人员应该选用优质干扰素,发挥抗病毒因子的作用,增强对猪的保护性.因此,本文以对干扰素基本认识作为切入点,探讨干扰素在猪病毒性疾病治疗中的应用. 相似文献
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干扰素是一类仅由脊椎动物单核细胞和淋巴细胞在受到病毒或其他诱生剂的作用时产生的一种具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性的分泌性可溶糖蛋白。随着基因工程方法的发展,外源表达干扰素已经进入了工业化生产阶段,并且大量投放市场,在医药、生物和农业等多个行业领域中广泛应用。近年来,随着人们对禽类干扰素研究的逐步深入,干扰素在一些禽类病毒性疾病及肿瘤性疾病治疗方面取得的良好进展。本文现就家禽干扰素的分类,家禽干扰素的抗病毒活性以及家禽基因工程重组干扰素的应用做以综述。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(7):1261-1268
干扰素(interfern,IFN)是在特定的诱生剂作用下,由细胞产生的一种具有高度生物活性的糖蛋白,具有广谱抗病毒活性。从江香猪源Ι型干扰素α2和Ⅱ型干扰素γ于生菜中融合表达及生物活性研究未见报道。本研究应用生菜植物表达系统,将从江香猪源干扰素植物表达载体PBI121-IFNα2、PBI121-IFNα2γ、PBI121-IFNγ、PBI121-Vec转入根癌农杆菌LBA4404中,用真空渗透法将携带干扰素质粒的根癌农杆菌感染生菜叶片;用β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)染色和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)技术分析从江香猪源干扰素蛋白活性。结果显示:GUS染色和ELISA检测证明从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中实现了表达;Q-PCR检测显示:在Marc-145细胞上从江香猪源干扰素蛋白对PRRSV的复制有明显抑制作用,在PK15细胞上从江香猪源干扰素蛋白对干扰素γ诱导蛋白30(interferon-gamma-inducible protein 30,IFI30)、2′-5′寡聚腺苷酸合成酶(2′-5′oligoadenylate synthetase,OAS)、抗黏液病毒蛋白(myxovirus resistance,MX)基因的mRNA水平的上调有一定的促进作用。本研究成功实现从江香猪源IFNα2、IFNα2γ、IFNγ在生菜中进行表达且表达蛋白具有生物学活性,为从江香猪源Ι型和Ⅱ型干扰素新复合型药物植物蛋白的开发利用提供参考依据。 相似文献