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1.
伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+突变株的构建及其生物学特性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质料pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK－5，细胞出现病变后，反复冻融3次收毒，按1：5稀释接种于IBRS－2细胞。在X－gal存在下挑取蓝斑，蓝斑筛选3次，再进行空斑试验，同时用PCR扩增LacZ基因，经3次空斑纯化，随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因，证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^ 突变株。TCID50试验表明，TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响；Balb/C小鼠试验表明，该突变对Balb/C小鼠的安全性明显高于Bartha亲本毒株。 相似文献
2.
应用猪胎肠单层细胞培养猪流行性腹泻病毒的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
本研究运用猪胎肠组织原代单层细胞培养物进行了猪流行性腹泻病毒吉毒株的培养与传代试验,并对其细胞传代毒作了电镜检查、复归猪体试验、荧光抗体交互染色和交互中和试验等项鉴定。结果表明,应用猪胎肠组织原代单层细胞培养物来分离和传代猪流行性腹泻病毒是可行的;其细胞病变效应(CPE)明显,感染细胞表现为肿胀变圆和脱落;病毒产量高,TCID_(50)/0.05达10~(5.5～6.0)。血清学试验结果表明,吉毒株与华毒株和川毒株抗原性一致,而与猪传染性胃肠炎病毒Miller株没有共同抗原,从而证实所培养的吉毒株是猪流行性腹泻病毒。 相似文献
3.
猪伪狂犬病病毒在不同细胞上的增殖研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为摸索最适合猪伪狂犬病病毒增殖的传代细胞,分别将猪伪狂犬病病毒按同一接种剂量接种PK-15、ST、Vero、CEF细胞,接毒后定时观察细胞病变情况,并进行TCID50测定,选择一种最合适的传代细胞用于猪伪狂犬病病毒的增殖。 相似文献
4.
本试验报告证明我国分离的猪传染性胃肠炎(TGE)华毒株已适应于胎猪肾细胞及甲状腺细胞,分别传至70代及74代。华毒株荧光抗体,Miller/10毒株荧光抗体及日本TGE荧光抗体与国内华毒株、辽毒株、齐毒株及国外Miller/10毒株,CKP毒株,SH毒株及日本TGE活苗均可交叉染色。用华毒株和Miller/10毒株的胎猪肾细胞传代毒作指示毒,和日本TGE阳性血清、H毒细胞传代毒感染28天后的血清做交叉中和试验,出现了交叉反应,血清的中和抗体价分别为1∶32以上和1∶64,华毒株与Miller/10毒株在猪体可交互免疫。用电镜负染法观察,见H毒细胞传代毒带纤突的典型TGE病毒粒子。因而表明我国华毒株、辽毒株、齐毒株是TGE病毒,与国外的TGE病毒在血清型上是一致的,并非新的冠状病毒。 相似文献
5.
猪细小病毒S—1毒株的分离和鉴定(二) 总被引：1，自引：0，他引：1
S一1毒株在猪肾原代细胞第1～10代之间共进行36次传代,培养物的平均HA价>384,第6代以后对细胞的最小感染量稳定在10~(-6)～10~(-7)之间,第5代PK细胞传代毒在-25℃～-30℃保存180天毒价保持10~(-5)不变,死产胎猪组织(S—1毒株分离猪)在用同样温度保存300天能重复分离到病毒,S—1毒株PK传代毒能适应于胎猪睾丸细胞株(ST)增殖,毒价达1O~(-7),以比利时荧光抗体柒色ST细胞培养物和用比利时PPV阳性血清对ST细胞传代毒作HI测定,进一步证实分离物的特异性。用PK细胞传代毒感染HI抗体阴性怀孕头胎母猪能产生明显的抗体反应。3头感染母猪中,1头(用口服途径攻毒)在感染后2～4天间出现排毒现象;从另一头母猪(用肌肉注射途径攻毒)的胎儿中分离到病毒,证实经胎盘感染的发生。 相似文献
6.
1946年开始,国内外研究人员采用非猪源动物或用细胞传代驯化猪瘟病毒,培育猪瘟弱毒疫苗.1954年周泰冲等用猪瘟强毒经家兔传代减毒,并经继代纯化成功培育出一株能适应家兔的猪瘟病毒变异毒,该毒株对猪无致病性、遗传性能稳定[1-3]、具有良好的免疫原性,这就是国内外广泛使用的中国猪瘟兔化弱毒株(Chinese strain,简称“C株”).目前中国广泛使用C株来生产猪瘟活疫苗,按疫苗毒源类型为牛睾丸细胞源、兔源、传代细胞.本试验主要对高效价猪瘟活疫苗(STK克隆传代细胞源)进行田间应用效果跟踪,通过对收集到的数据进行对比分析,评估该疫苗的免疫效果. 相似文献
7.
本文介绍吉林省“猪传染性胃肠炎”的发生情况。通过仔猪人工感染传代试验,分离到两株引起猪传染性胃肠炎的病毒株——吉毒株和梅毒株。电镜检查初步证明是冠状病毒。经用胎猪肾细胞、猪甲状腺细胞和胎猪小肠器官培养法,对吉毒株进行反复多次的分离培养试验,发现吉毒株不适应于胎猪肾细胞和猪甲状腺细胞上生长,而能在胎猪小肠器官培养物上增殖。依据本病在吉林省的流行情况、临床表现、病毒株的仔猪人工感染传代试验、电镜检查以及组织细胞分离培养和鉴定的结果,参照国外有关报道,初步认为吉毒株是类冠状病毒,为我国猪传染性胃肠炎的病原学及其实验诊断提出了一个新的探索途径。猪传染性胃肠炎于1946年由Dogle氏和Hutchings氏证实以来,许多地区和国家相继发生本病,分布极广。对本病的诊断、免疫及病毒的性状等均有较多的研究和报道。我国于1968年起相继报道有本病发生,1973年以来开始分离病毒,进行了生物学试验和电镜检查。哈尔滨兽医研究所应用组织培养细胞分离到冠状病毒。由1978年1月开始,我们从流行病学调查入手,采集疑似的猪传染性胃肠炎的病理材料,进行仔猪人工感染传代试验和病毒分离工作,取得了初步成果,现分四个部分介绍于后。 相似文献
8.
应用细胞培养病毒蚀斑技术，将分离的伪狂犬病毒ＨＳ－９３０４株在鸡胚成纤维细胞单层培养上覆以营养琼脂培养基，连续挑斑纯化３次，成功地获得了纯化病毒克隆株。对病毒克隆株在传代细胞上复壮增殖后进行毒价测定，接种试验动物人工造病并进行血清中和试验以及外源性污染的检定。 相似文献
9.
当培养液中加二甲基亚砜处理细胞的方法,已使27—4代华毒株强毒适应于胎猪肾细胞,并传至165代。自92代进行了5批克隆纯化,并自116代开始选直径1mm以内小空斑传代。第100代以后的病毒度为10~(4.67)～10~(6.0)TCID50/0.3ml。以鼻内途径免疫接种的母猪中和抗体价最高,持续期最长可答13个月,三日龄哺乳仔猪主动免疫的安全性为76.9～94.3％,被动免疫的保护率可达97％以上。第120及135代毒分别作猪体连续传代5及6代,均未见毒力增强。接种102代毒的后备猪群有28.2％水平感染。以5ml剂量经肌肉、鼻内途径接种三头母猪,免疫持续期可达两产。几年来在几个大型养猪场试用证明,本弱毒安全有效,收到了防制本病的效果。 相似文献
10.
猪流行性腹泻弱毒株的培育 总被引：9，自引：0，他引：9
用ＰＥＤＶＣＶ７７７株强毒适应Ｖｅｒｏ细胞系并传至１４７代。以ＰＥＤＶ沪株做效检用强毒，传代毒８３代之后适应仔猪肾原代细胞，自９０年代起进行了５次克隆纯化，克隆是２次群斑（由５～７个单斑组成）的基础上，再进行３次单斑挑选（均是１ｍｍ以内小空斑）以８３－７斑５株继续传代并做系列试验，传代毒的毒价为１０＾７．０～１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／０．３ｍｌ。免疫接种途径为后海穴位，克隆后５代（总代次１０４代） 相似文献
11.
《黑龙江畜牧兽医》2020,(5)
为了寻找坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)致病机制的研究模型,试验利用实时荧光定量PCR技术检测坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒CF1及其鸡胚传代致弱毒CF100在不同物种细胞中的增殖情况,并将CF1与CF100分别在鸭胚中传代以检测病毒对鸭胚的损伤情况。结果表明:CF1可在禽类细胞、哺乳类细胞中增殖,但不引起细胞损伤,CF100在禽类细胞、哺乳类细胞中不能增殖,只能在Vero细胞中增殖,且不引起细胞损伤;CF1和CF100在鸭胚中传代发现,传代CF1的鸭胚全身出现明显的出血,但传代CF100的鸭胚未见出血。说明相对于原代毒CF1,鸡胚传代毒CF100对细胞、鸭胚的损伤均降低,具有一定的安全性,可作为坦布苏病毒致病机制的研究模型。 相似文献
12.
用培养液中加二甲基亚砜处理细胞的方法,已使27—4代华毒株强毒适应于胎猪肾细胞,并传至165代.自92代进行了5批克隆纯化,并自116代开始选直径1mm以内小空斑传代.第100代以后的病毒滴度为10~(4.67)～10~(6.8)TCID50/0.3ml.以鼻内途径免疫接种的母猪中和抗体价最高,持续期最长可达13个月,三日龄哺乳仔猪主动免疫的安全性为76.9～94.3％,被动免疫的保护率可达97％以上.第120及135代毒分别作猪体连续传代5及6代,均未见毒力增强.接种102代毒的后备猪群有28.2％水平感染.以5ml剂量经肌肉、鼻内途径接种三头母猪,免疫持续期可达两产.几年来在几个大型养猪场试用证明,本弱毒苗安全有效,收到了防制本病的效果. 相似文献
13.
猪流行性腹泻弱毒疫苗的研究 总被引：5，自引：1，他引：4
用从广州地区流行性腹泻病猪分离并适应到Ｖｅｒｏ等传代细胞的猪流行性腹泻病毒Ｇ１强毒株，通过Ｖｅｒｏ、ＳＴ细胞株的连续传代，证明第７２代毒已被致弱。用８３代毒对吃初乳前的小猪以８￣１０ｍｌ剂量口服连续传５代，每代都从接种猪小肠取样接种细胞进行培养鉴定，并于增殖后作为次代接种材料，结果５代毒均未引起小猪发病，证实该代次毒株的安全、稳定、达到了常规弱毒疫苗株要求的标准。 相似文献
14.
用919株牛暂时热病毒制造细胞培养疫苗。Tzipori(1974)曾将其他牛暂时热BEF病毒株适应于Vero细胞系,并在啮齿动物进行传代,结果传代毒对牛的抗原性不如919株好。919株弱毒是将病牛血毒直接接种Veto细胞,因而避免了病毒抗原性发生改变。将919株弱毒经静脉接种犊牛所诱发的中和抗体应答和犊牛被接种417WBC株强毒后发 相似文献
15.
将EIAV驴白细胞弱毒疫苗株在驴胎皮肤细胞中连续传代,分别提取第13代、18代、21代、23代、26代病毒培养物的前病毒DNA,以LTR特异性引物PCR扩增前病毒LTR,并进行克隆及测序分析。与本实验室已测定的驴白细胞毒株LTR的序列比较发现,驴胎皮肤细胞毒株LTR的U3负调节区出现大段的插入、点突变、缺失,U3增强子区变异较小。将LTR片段插入到pCAT-basic载体CAT报告基因前,转染驴胎皮肤细胞,通过检测CAT表达量来评价LTR的启动子活性。驴胎皮肤细胞毒株LTR的启动子活性随着病毒传代次数的增加而逐渐增强,而驴白细胞弱毒株LTR的启动子活性很低。 相似文献
16.
为了选择适合山羊痘病毒AV41株增殖的原代细胞,提高山羊痘病毒疫苗生产效率,分别采用常规方法制备绵羊睾丸细胞、绵羊肾细胞、犊牛睾丸细胞3种原代细胞,接种山羊痘病毒细胞弱毒AV41株进行传代培养,比较该病毒株在3种细胞上所引起的细胞病变时间、病变形态及其传代稳定性等增殖特性,并进行特异性、安全性、效力测定,试验结果显示,AV41株在3种原代细胞上均可增殖,其特异性、安全性均符合兽药典要求。疫苗株在以上3种细胞上的TCID50浓度分别达到10-6.125、10-5.5、10-5.875/mL,细胞病变形态、病变时间、最高传代次数等增殖特性存在一定差异。试验证明,原代绵羊肾细胞或原代犊牛睾丸细胞可以作为山羊痘病毒疫苗生产的候选细胞。 相似文献
17.
猪细小病毒自然弱毒N株遗传稳定性研究 总被引：3，自引：1，他引：2
本研究将PPV-N株通过敏感猪三代、猪肾传代细胞25代,测定该毒株对敏感猪的致病性,结果表明将PPV-N株连续分别通过PPV HI抗体阴性的4月龄小猪、后备母猪、怀孕母猪三代,均未从试验猪检出病毒血症和分离到病毒,且母猪产仔正常。在IBRS-2细胞中连续传代,随着传代次数的增加其细胞病变未见异常,毒价稳定在103.5TCID50/mL。将第1、5、10、15、20、25代病毒培养物接种PPV HI抗体阴性怀孕母猪,未从母猪测出病毒血症和检出病毒,所产仔猪PPV HI抗体阴性,未从弱仔猪脏器分离到病毒,说明该毒株毒力不返强,具有良好的遗传稳定性。这为该弱毒株成为一株良好的自然弱毒疫苗株提供了依据。 相似文献
18.
《动物医学进展》2021,42(4)
猪圆环病毒2型(PCV2)细胞内增殖滴度的提高是开发PCV2全病毒灭活苗的瓶颈问题。为克服该困难,探究高病毒滴度PCV-2规模化增殖工艺,采用PK-15细胞单层接毒、同步接毒与带毒传代3种增殖工艺对PCV2进行增殖,并应用细胞孵育剂D-氨基葡萄糖对各增殖工艺进行优化,最后通过间接免疫荧光试验对比分析不同的增殖工艺组病毒增殖滴度。结果表明,单层接毒、同步接毒以及带毒传代工艺生产的PCV2病毒滴度均符合规程要求(TCID_(50)/mL10~(5.5)),带毒传代(第5代)生产效果显著优于前两种工艺(P0.01);D-氨基葡萄糖的添加可将同类工艺下PCV2的病毒滴度提高1.6～3.16倍。 相似文献
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20.
于海红 《畜牧兽医科技信息》2018,(1)
正猪痘是由猪痘病毒或痘苗病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病,以皮肤发红斑、丘疹和结痂为主要特征。本病一年四季均可发生,各种年龄的猪均易感,1月龄左右的仔猪多发,大猪很少发病,一般能自然痊愈。寒冷季节、饲养环境差多发,发病率高,但死亡率低。如有并发支气管肺炎、肠炎或其他传染病时,死亡率相应增高。1病原分析猪痘病毒只能在猪源组织细胞内增殖,并在细胞胞浆内形成空泡和包涵体。痘苗病毒能使猪和其他多种动物感染,能 相似文献