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孙涛 《畜牧兽医科技信息》2001,3(4):10-12
免疫细胞通常难以借助其表面受体识别整个抗原分子,而仅识别抗原大分子上的一个特定部分,称为表位(epitope),又称抗原决定簇(antigenic determinant).因而表位代表了抗原分子上的一个免疫活性区,负责与抗体分子或免疫细胞表面的抗原受体结合,严格说来,抗体的特异性是针对表位而不是针对完整的抗原分子的[1].病毒抗原表位分析一直是病毒学研究的热点.近年来分子生物学方法的广泛运用,使病毒及蛋白抗原表位筛选、研究方法的不断提高.抗原表位的研究对于我们了解病毒致病的分子机理、研制合成肽疫苗将有很大帮助,如根据口蹄疫病毒结构蛋白表位研制的合成肽疫苗.在HIV的防治方面,近期研制的针对HIV gP160的表位疫苗(epitope vaccine)等都是表位研究应用的极好例子[2].目前,人们甚至能够精确到表位上1～2个氨基酸在保护性抗体诱导、致病力等方面的作用. 相似文献
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【目的】构建非洲猪瘟病毒CAS19-01/2019株(GenBank登录号:MN172368.1)结构蛋白P72的合成肽疫苗,通过免疫小鼠评估合成肽疫苗的免疫效力。【方法】利用ProtParam、SOPMA等软件分析P72蛋白的理化性质与结构信息,通过ABCpred、SVMtrip、IEDB预测P72蛋白的T细胞与B细胞抗原表位,筛选出显著的表位多肽区域,合成多肽辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫小鼠,检测免疫组小鼠产生的特异性抗体、T淋巴细胞亚群、脾脏淋巴细胞增殖、细胞因子白介素4(IL-4)、IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白(IgG),从体液免疫与细胞免疫角度评估合成肽的免疫效力。【结果】综合分析得出P72蛋白是稳定性亲水蛋白,二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲分别占19.35%、5.42%、25.08%和50.15%。筛选出了P72蛋白的8个优势抗原表位,626－634、520－528、298－306、203－211位氨基酸处为T细胞抗原表位,587－606、232－251、110－129、39－58位氨基酸处为B细胞抗原表位。整合优势表位合成2个多肽P72-1与P72-2,首次免疫小鼠14 d时可检测到P72-1与P72-2的特异性抗体,首免后28 d达到最高值,其最高抗体效价分别为1∶25 600与1∶12 800;免疫后小鼠T淋巴细胞亚群CD4＋/CD8＋显著上升(P＜0.05);脾脏淋巴细胞增殖试验结果显示,免疫组淋巴细胞数量均极显著升高(P＜0.01);细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ含量均极显著增加(P＜0.01)。【结论】本研究成功研制2种合成肽疫苗,在免疫效力上P72-2高于P72-1,二者都能产生高水平的特异性抗体,刺激脾脏淋巴细胞增殖,诱导产生细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ,本研究为非洲猪瘟合成肽疫苗研制奠定技术基础。 相似文献
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斯氏副柔线虫CAMK/TSSK蛋白激酶基因的克隆及其蛋白质结构与抗原表位预测分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为分析并预测斯氏副柔线虫免疫相关基因CTPK编码蛋白结构、功能以及其作为疫苗候选抗原的可能性,通过提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增CTPK基因的CDS区,并利用生物信息学软件对CTPK进行蛋白质结构分析和抗原表位预测。生物信息学分析表明,CTPK基因cDNA序列全长共519bp,具有完整的开放阅读框(519bp),编码173个氨基酸,相对分子质量和等电点大小分别为20.264ku和9.53。结构分析发现,蛋白质无跨膜区,无规则卷曲构成二级结构的主要组分,亲水性氨基酸比例超过60%;抗原表位预测表明,CTPK蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,既含有较多潜在的B细胞抗原表位又存在较多的T细胞抗原表位。推测CTPK有望用作斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原,本研究为骆驼斯氏副柔线虫生前诊断方法iELISA的建立和DNA疫苗的研究奠定了理论基础。 相似文献
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细胞的抗原表位研究方法 总被引：3，自引：0，他引：3
多表位疫苗有望成为预防多种病原体感染的理想疫苗,因而被认为是将来疫苗的发展方向。抗原表位是研究抗原的免疫机制和表位疫苗的基础,近年来在表位研究方面取得了一些可喜的进展,特别是抗原表位的研究方法。B细胞表位的研究方法已经不局限于通过交叠合成多肽进行研究,又诞生了噬菌体随机肽库以及表位预测等方法;在T细胞抗原表位的研究方面也有了相应的预测方法,尤其是将ELISPOT试验、体外抗原提呈试验等应用于T细胞表位活性的鉴定,极大的促进了T细胞表位的研究进展。文章全面系统地对B细胞表位与T细胞表位的研究方法的进展进行了综述。旨在为表位和表位疫苗的研究提供先进的多种技术方法。 相似文献
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多肽疫苗抗病毒作用研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
随着固相合成多肽及蛋白质序列测定方法的建立 ,通过对病毒三维结构及其免疫原性的研究 ,人们对病毒抗原表位已能较精确地分析及定位并人工合成这些抗原表位。肽类疫苗即是在此基础上发展起来的一种新型人工疫苗 ,它是以合成的一段免疫原性肽抗原配以适当的载体或 /和佐剂制成的疫苗。实验证明 ,这些抗原表位可诱生中和抗体或 /和病毒特异性的ＣＴＬ反应。第一个较为成功的多肽疫苗是 1963年Ａｎｄｅｒｅｒ用蛋白酶切割烟草花叶病毒时 ,获得的一短肽序列Ｔｈｒ＿Ｓｅｒ＿Ｇｌｕ＿Ｐｒｏ＿Ａｌａ＿Ｔｈｒ＿ＯＨ ,该多肽诱生的抗体能与完整的… 相似文献
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肽库（peptide library)是近年来发展起来的一种新技术。它是某一长度（如5肽或6肽）短肽的大量集合,包含了该长度短肽的各种可能序列或其中的绝大部分。“肽库”概念提出的理论基础是Geyssen等的2个观点：（1）含有关键氨基酸残基的短肽能够模拟蛋白质上的表位;（2）多数情况下,几个关键残基与它的结合分子之间形成的非共价键构成了全部结合能的绝大部分,即蛋白质之间的相互作用或识别是通过局部肽段间的相互作用来实现的。20世纪80年代初,Geyssen提出了模拟表位的概念,他认为1个抗原决定簇,即1个表位,只由几个氨基酸组成,并且可以用化学合成法合成这个表位,即模拟表位。随后,他用化学合成法合成了这个表位,即模拟表位。随后,他用化学合成法合成了一系列短肽（即肽库）,从中筛选出模拟表位,并证实其确定能够和原来的蛋白质发生竞争抑制作用。化学合成法具有以下优点：（1）可含非天然氨基酸;(2)可用于所有实验室的液相条件;（3）有的无需测序。但由于其合成成本太高,无法合成较长的多肽（大于20个氨基酸）,不能扩增和重复使用等缺点,使得另一种肽库技术倍受青睐,这就是噬菌体展示肽库。 相似文献
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《中国畜牧兽医》2017,(1)
为评价合成的O157∶H7Ivy146—157多肽作为疫苗抗原的可行性,本试验利用生物信息学方法分析Ivy的二级结构、氨基酸亲水性、蛋白柔性区域、表面可及性和抗原指数,筛选获得1条含有B细胞抗原表位的多肽序列Ivy146—157,进行化学合成。多肽免疫BALB/c小鼠,测定免疫后小鼠的抗体水平及Ivy146—157多肽对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖情况。结果显示,合成的Ivy146—157多肽第3次免疫小鼠后抗体水平达到1∶6 400,制备的Ivy146—157多克隆抗体能够识别天然菌株中的目的蛋白;MTT试验结果显示,Ivy146—157免疫后小鼠脾淋巴细胞增殖明显,与对照组差异显著(P0.05)。结果表明,Ivy146—157多肽能够诱导机体产生体液免疫和细胞免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。 相似文献
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为了探讨通用型辅助性T细胞表位对猪瘟病毒人工合成短肽抗原免疫原性的影响,本研究合成了含有猪瘟病毒E2蛋白线性中和表位的短肽B,合成了含有通用型辅助性T细胞表位的短肽Th-B。同时,为了探讨免疫刺激基序对人工合成短肽抗原免疫原性的影响,合成了含有免疫刺激序列的IS-Th-B。将上述3种合成肽与弗氏佐剂混合乳化后,免疫兔子,比较3种不同的抗原肽诱导的抗体水平,并用猪瘟弱毒对免疫兔子进行攻击,比较抗原肽的免疫保护效果。结果显示,Th-B和IS-Th-B诱导了相当的抗体水平,但显著高于抗原肽B诱导的抗体水平。Th-B和IS-Th-B免疫延迟但没有阻止兔定型热的产生,而抗原肽B免疫兔和未免疫兔一样发生了明显的定型热反应。本研究表明,免疫刺激基序对本研究中的短肽诱导的抗体应答没有产生明显影响,但通用型辅助性T细胞表位增强了短肽抗原的免疫原性。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2015,(12)
拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成。合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21(DE3)pLysS-pET-30a-P1。经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况。结果表明,设计合成表达的PCV2P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P0.05)。这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。 相似文献
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讨论了在研究合成肽ELISA诊断试验中,选择适当的抗原表位氨基酸序列作为多肽合成的序列模板时,需要考虑的主要因素,以提高ELISA试验过程中的合成肽抗原的包被效果。 相似文献
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目前,我国南非Ⅱ型(SATⅡ)口蹄疫病毒(FMDV)的防控形势十分严峻,为了防止SATⅡ型FMD的跨境传入,迫切需要建立其特异的检测方法。本研究以SATⅡ型FMDV结构蛋白氨基酸序列为依据,利用分子生物学软件分析了FMDV结构蛋白VP1~VP3上可能的抗原表位,并人工合成了8条表位多肽。通过采用SATⅡ型FM-DV阳性血清进行ELISA反应,检测其反应原性;通过采用与载体蛋白偶联的合成肽免疫小鼠,测定小鼠血清中抗体效价,检测合成肽的免疫原性。结果表明,合成的8条多肽均能与SATⅡ型FMDV阳性血清结合,其中的6条多肽免疫小鼠后能产生针对多肽的抗体。本研究为利用串联表位为抗原检测SATⅡ型FMDV抗体方法的建立奠定了基础。 相似文献
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为获得口蹄疫病毒（FMDV）O/PanAsia毒株VPl蛋白的抗原信息,从而为制备多肽疫苗提供理论依据,运用生物信息学软件,对O/PanAsia毒株的结构蛋白VP1理化性质、结构功能以及细胞表位进行分析,预测抗原表位以选择合适肽段。应用ProParam、TMHMM Server、ProScale和SignaIP 等在线工具,分析VP1蛋白氨基酸序列,运用计算机技术和分子生物学软件,分析预测VP1蛋白的基本理化性质、结构功能以及可能的B细胞和T细胞抗原表位,筛选B细胞表位肽段并对VP1的两个主要T细胞表位CTL和Th细胞表位进行预测。结果显示：O/PanAsia毒株VP1 蛋白的等电点为9.49,相对分子质量为23 520.83;VP1蛋白的B细胞表位为8~23、135~149和193~205位氨基酸。预测该VP1有10个CTL和10个Th细胞抗原表位,表明其具有较好的免疫原性;最终筛选出VP1蛋白的5个CTL和5个Th优势表位。用生物信息学方法预测O/PanAsia毒株VPl蛋白为稳定性蛋白,含有T、B淋巴细胞抗原表位。本研究为FMDV的进一步研究和疫苗制备奠定了基础。 相似文献
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猪瘟病毒E2蛋白抗原表位的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
蛋白质抗原表位 (抗原决定簇 )是蛋白质抗原性的物质基础 ,一个蛋白质分子可带有多个不同的抗原决定簇 ,即抗原表位 (epitopes)。通常 ,抗原表位是指氨基酸序列已经清楚的抗原决定簇。蛋白质抗原表位的研究 ,对于设计具有免疫原性和中和活性的多肽、新型疫苗分子及新型诊断试剂具有较大意义。B细胞蛋白抗原表位的预测自从80年代Hopp和Woods提出亲水性参数对抗原表位预测的方法以来 ,已有许多参数、算法发表 [1～10],对B细胞蛋白抗原表位研究起到了巨大的推动作用。本文就猪瘟病毒(SFV)E2蛋白抗原表位的研究概况作一介绍。1猪瘟病毒E2抗… 相似文献
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《中国预防兽医学报》2017,(1)
为研究本实验室制备的一株抗25型蓝舌病病毒(BTV-25)VP7蛋白单克隆抗体(MAb)3H7识别的B细胞抗原表位,本研究利用噬菌体展示技术对3H7识别的抗原表位进行鉴定。经过3轮淘选后进行测序,测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为QYHAM;将该短肽序列合成后与3H7细胞上清和腹水均能够发生特异性反应;与BTV1~24型标准阳性血清的间接ELISA结果均呈现阳性反应;进一步的序列分析表明该表位的氨基酸序列QYHAM在不同血清型的BTV株间保守,确定该MAb识别的VP7抗原表位为238QYHAM242,本研究对于BT疫苗的设计及高通量检测试剂盒的研制均具有重要意义。 相似文献
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为评价猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪后的细胞免疫应答,用含有E、F两种多肽抗原的猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪,二免后两周采血分离猪外周血淋巴细胞,再用E、F两种合成肽及二者混合物对淋巴细胞刺激培养48 h,用MTT法检测特异性T淋巴细胞增殖反应。结果显示,在抗原E、F混合物浓度为50μg/mL时,抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增殖作用显著高于未免疫对照组（P〈0.01）。表明,该猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪能有效引起特异性T淋巴细胞免疫应答。 相似文献
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目的预测奶牛PrPc结构蛋白抗原表位,人工合成特定序列奶牛PrPc多肽用于抗体制备,同时为研究特定表位结构蛋白的功能特性提供有效手段。方法运用Goldenkey分子生物学软件对牛PrPc结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析比较,结合现有牛PrPc单克隆抗体识别表位从中筛选了一段显示表位特征的氨基酸残基序列,应用固相合成法合成15个氨基酸残基的奶牛PrPc多肽,并利用MBS法将其与KLH偶连制成免疫原,应用于动物免疫及多克隆抗体的制备,对该多抗与PrPc的反应性进行了检测。结果偶连后的牛PrPc多肽具有免疫原性,并获得了抗牛PrPc多克隆抗体。结论奶牛PrPc合成肽抗原的获得和应用,可以部分替代天然抗原,为进一步制备PrP单克隆抗体,以及Prion疾病的深入研究提供了有利条件,同时为研究特定表位结构蛋白的功能特性提供了新的途径。 相似文献