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1.
为了将合成的核酸探针点样到玻片 上制备成基因芯片,先用常规PCR扩增动物 组织中钩端螺旋体特异片段,再用Cy3标记 引物,通过不对称PCR获取荧光素标记的靶 序列,然后与制备的芯片杂交,扫描仪记录结 果。同时,以PCR技术为对照,进一步观察 基因芯片技术检测动物传染源中钩端螺旋体 的特异性、敏感性及可行性。常规PCR扩增 问号钩端螺旋体阳性标本,出现单一482bp 的扩增产物,而双曲钩端螺旋体及其他螺旋 体、病原、正常动物组织均无任何DNA扩增 条带,芯片杂交结果与常规PCR方法结果一 致。用芯片和PCR对动物组织中不同浓度 钩端螺旋体的检测,最低检测浓度分别为10 条和100条钩端螺旋体,芯片检测的敏感性 高于常规PCR法。用基因芯片与PCR分别 对标本进行检测,5只人工感染的豚鼠肾、 肝、心、血等组织的检测结果均为阳性;28份 疫区野鼠肾标本阳性结果分别为8份和4 份,10份可疑病猪肾标本阳性结果分别7份 和5份;5份非疫区野鼠肾、5份正常猪肾标 本以及其他微生物的检测结果均为阴性。结 果表明,基因芯片技术可快速、灵敏、特异地 检测动物传染源中问号钩端螺旋体。 相似文献
2.
为了解新疆北疆地区鼠类伯氏疏螺旋体携带情况及其基因型分布特征,2021年1—9月在新疆昌吉州吉木萨尔县、伊犁哈萨克自治州新源县、塔城地区乌苏市巴音沟,采集147只野生鼠类的肾脏和膀胱组织样本,采用实时荧光定量PCR和巢式PCR方法,检测鼠类中的伯氏疏螺旋体携带情况;以伯氏疏螺旋体5S—23S基因间隔区进行巢式 PCR检测,对检出的阳性样本进行基因测序及序列分析,确定伯氏疏螺旋体基因型,构建系统发育树。结果显示：在147份鼠类样本中,经实时荧光定量PCR和巢式PCR方法检测,分别检出伯氏疏螺旋体阳性样本11份和13份,阳性率分别为7.48%和8.84%;13份巢式PCR阳性样本中,吉木萨尔县检出1份,新源县检出1份,乌苏市检出11份,通过序列同源性分析确定Borreliella garinii、Borreliella bavariensis为主要致病基因型。结果表明,北疆地区鼠类中存在伯氏疏螺旋体的自然感染,有传播给家畜及人群的风险,应加强该病原体检测和莱姆病防控。 相似文献
3.
《中国预防兽医学报》2015,(12)
为建立快速检测超级细菌编码新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)的bla_(NDM-1)基因的方法,本研究针根据bla_(NDM-1)及其变异体的基因序列设计一对特异性引物和一条MGB探针,以构建的含有bla_(NDM-1)基因片段的重组质粒作为阳性标准品,经条件优化,建立了检测bla_(NDM-1)基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示该方法可以特异性扩增bla_(NDM-1)基因重组质粒标准品,而对鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的标准菌株扩增均为阴性;检出下限为2.59拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1.5%。利用所建立的方法对34株鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果均未检测到目的片段,表明所有分离株均未携带bla_(NDM-1)基因。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于监测携带bla_(NDM-1)基因及其变异体的超级细菌。 相似文献
4.
荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为建立一个荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的方法,根据GenBank登录的莱姆病螺旋体鞭毛蛋白FlaB序列,应用生物学软件进行序列比对,在保守的C段区设计与筛选特异引物和TaqMan探针。对荧光定量PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性,并通过对感染螺旋体的蜱样本的检测,评价该方法的实用价值。结果显示,自然感染莱姆病螺旋体的35份蜱标本检测阳性符合率100%,正常蜱20份标本的检测结果均为阴性。该方法对牛巴贝斯原虫、泰勒原虫、边缘无浆体、金龟子绿僵菌、大肠杆菌等蜱体常见病原微生物所抽提的DNA的检测均呈阴性。荧光定量PCR方法检测质粒的灵敏度可达1×102拷贝/μL。TaqMan荧光定量PCR方法检测硬蜱体内莱姆病螺旋体具有较好的敏感性和特异性,可适于莱姆病的流行病学调查和监控。 相似文献
5.
《福建畜牧兽医》2021,(3)
为了建立一种可快速特异检测生鲜肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7的多重实时荧光定量PCR方法,试验针对沙门氏菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因和大肠杆菌O157:H7 wzx基因的保守序列分别设计引物和Taqman探针,建立多重qPCR反应体系,进行特异性、灵敏度和重复性研究,用该方法检测30份生鲜肉中的3种食源性致病菌,并与国标法进行比较。结果表明:该方法只扩增3种靶细菌,对其它供试菌不扩增;金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的检测灵敏度均为105拷贝数/μL,大肠杆菌O157:H7的检测灵敏度为10~4拷贝数/μL;该方法的重复性良好;对30份生鲜肉进行检测,检出3份沙门氏菌、4份金黄色葡萄球菌和7份大肠杆菌O157:H7,与国标检测方法相比,大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌各有1份样品不符合,其它阳性样品完全一致。说明建立的基于Taqman探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、快速地实现对生鲜肉中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7的检测。 相似文献
6.
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的荧光定量检测方法，本研究根据IBRV gE基因的序列设计了相应的探针和引物，分别建立TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法，并对2种方法进行了综合比较。结果显示，TaqMan-MGB探针和SYBR GreenⅠ定量荧光PCR方法的灵敏度分别达到1.0×101 copies/μL和1.0×102 copies/μL;2种荧光定量方法对除IBRV的其他牛病毒和细菌检测结果均为阴性；重复性检测中变异系数均小于2.3%;检测了130份来自西藏的牦牛样品，2种荧光定量PCR阳性检出率均为100%。以上结果表明，2种荧光定量方法都可用于检测IBRV,且TaqMan-MGB荧光定量PCR敏感性高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR。 相似文献
7.
《中国兽医学报》2017,(11):2151-2155
为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。 相似文献
8.
《中国兽医杂志》2017,(6)
根据Gen Bank中a MPV-C P基因序列,设计出一对特异性引物和Taqman探针,建立了a MPV-CTaqman探针荧光定量PCR方法。对该反应体系进行优化,进行特异性、敏感性及重复性试验,并且建立标准曲线。结果表明,该方法只对a MPV-C检测为阳性,具有良好的特异性;能够检测到(3.63×102)拷贝数,具有良好的敏感性;建立的标准曲线斜率为-3.312,截距为44.66,相关系数为R2=0.999,循环阈值和模板拷贝数具有良好的相关性,组内及组间重复性好。采用a MPV-C Taqman探针荧光定量方法、普通PCR方法对来自广东、浙江地区25份番鸭疑似阳性a MPV-C的病料进行检测,其中前者23份阳性,后者18份阳性。这表明a MPV-C Taqman荧光定量PCR方法对样品的检测具有特异性和敏感性高的特点,更适合临床样品的检测。 相似文献
9.
《中国预防兽医学报》2017,(1)
为建立快速检测驽巴贝斯虫Bc-48基因的方法,本研究根据Bc-48保守基因序列设计合成特异性引物和MGB荧光探针,以构建的重组质粒作为阳性标准品,经条件优化后建立了检测Bc-48基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测驽巴贝斯虫,而对其它病原检测均为阴性;该方法最小检出量为5.17×10~1拷贝/μL的标准质粒,敏感性是常规PCR的100倍;组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%,重复性好;采用所建立的方法和常规PCR分别对90份临床样品进行检测,结果显示本研究建立的驽巴贝斯虫TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于驽巴贝斯虫病临床样品诊断、流行病学调查。本研究为蜱传马梨形虫病的防控提供新的方法。 相似文献
10.
荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌方法的建立及初步应用 总被引：20，自引：0，他引：20
根据编码鼠伤寒沙门氏菌肠毒素stn基因的核苷酸序列设计1对引物和荧光探针，通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索，建立了检测沙门氏菌的核酸荧光定量PCR方法。对该方法的特异性与敏感性研究结果显示，该方法检测沙门氏菌结果均为阳性，而非沙门氏菌均为阴性；对带有沙门氏菌肠毒素stn基因的阳性质粒的检测敏感性为4个／μL。用该方法对人工污染沙门氏菌的鲜猪肉和鲜鸡蛋进行检测，当检样中沙门氏菌初始含菌量分别为1CFU／g（鲜猪肉）和1CFU／g（鲜鸡蛋），经过12h的增菌后，检测结果均为阳性。该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点。此研究为食品中沙门氏菌快速检测试剂盒的研制打下了良好的基础。 相似文献
11.
Krizsan SJ Nyholm L Nousiainen J Südekum KH Huhtanen P 《Journal of animal science》2012,90(9):3162-3173
The objective of this study was to compare the application of different in vitro and in situ methods in empirical and mechanistic predictions of in vivo OM digestibility (OMD) and their associations to near-infrared reflectance spectroscopy spectra for a variety of forages. Apparent in vivo OMD of silages made from alfalfa (n = 2), corn (n = 9), corn stover (n = 2), grass (n = 11), whole crops of wheat and barley (n = 8) and red clover (n = 7), and fresh alfalfa (n = 1), grass hays (n = 5), and wheat straws (n = 5) had previously been determined in sheep. Concentrations of indigestible NDF (iNDF) in all forage samples were determined by a 288-h ruminal in situ incubation. Gas production of isolated forage NDF was measured by in vitro incubations for 72 h. In vitro pepsin-cellulase OM solubility (OMS) of the forages was determined by a 2-step gravimetric digestion method. Samples were also subjected to a 2-step determination of in vitro OMD based on buffered rumen fluid and pepsin. Further, rumen fluid digestible OM was determined from a single 96-h incubation at 38°C. Digestibility of OM from the in situ and the in vitro incubations was calculated according to published empirical equations, which were either forage specific or general (1 equation for all forages) within method. Indigestible NDF was also used in a mechanistic model to predict OMD. Predictions of OMD were evaluated by residual analysis using the GLM procedure in SAS. In vitro OMS in a general prediction equation of OMD did not display a significant forage-type effect on the residuals (observed - predicted OMD; P = 0.10). Predictions of OMD within forage types were consistent between iNDF and the 2-step in vitro method based on rumen fluid. Root mean square error of OMD was least (0.032) when the prediction was based on a general forage equation of OMS. However, regenerating a simple regression for iNDF by omitting alfalfa and wheat straw reduced the root mean square error of OMD to 0.025. Indigestible NDF in a general forage equation predicted OMD without any bias (P ≥ 0.16), and root mean square error of prediction was smallest among all methods when alfalfa and wheat straw samples were excluded. Our study suggests that compared with the in vitro laboratory methods, iNDF used in forage-specific equations will improve overall predictions of forage in vivo OMD. The in vitro and in situ methods performed equally well in calibrations of iNDF or OMD by near-infrared reflectance spectroscopy. 相似文献
12.
大庆市羊东毕吸虫病流行病学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
对大庆市羊东毕吸虫病的流行病学进行了调查研究。结果表明，大庆有3种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanican var.thuberculata)；中间宿主螺类有1种，即卵萝卜螺；东毕吸虫病在大庆分布很广，所调查的4区2县均有发生，羊东毕吸虫平均感染率分别为50．33％，平均死亡率为21．12％，大庆羊急性病例发病时间为8月上旬至10月下旬，慢性病例为11月上旬至翌年2月中旬。 相似文献
13.
14.
中国圈养野生动物疫苗使用调查 总被引：1，自引：0，他引：1
2005年对中国动物园协会单位中的18家动物园饲养野生动物疫苗免疫情况进行调查。受调查动物园在野生动物疫苗使用和动物种类方面具有一定的代表性。调查结果显示动物园动物现共使用18类36种疫苗,预防31种疫病。其中哺乳动物使用14类24种疫苗,预防24种疫病;禽类使用4类12种疫苗,预防7种疫病。使用范围最广的有禽流感、犬瘟热疫苗等、新城疫疫苗、猫瘟热疫苗等。共有24目58科动物接种疫苗,其中食肉动物类1目8科,食草动物类3目9科,杂食动物类2目3科,禽类18目38科。研究结果提示应加强动物园之间疫病信息交流、防疫资源的利用、疫病监测和研究,加大对动物园动物疫病的研究投入,逐步建立动物园动物统一的防疫规程。 相似文献
15.
Information gathered from cases of fowl cholera (FC) in commercial turkey flocks through case records, flock records, and telephone and mail surveys was used to estimate disease costs. The cost to the Georgia commercial turkey industry in 1986 from preventive measures, treatment of outbreaks, and production losses from the disease was estimated at $634,545. The cost of FC per kg of live production was estimated to be $0.015. 相似文献
16.
猪伪狂犬病是由伪狂病病毒(Pseudorabies virus PRV)引起的急性传染病。其特征是成年猪常为隐性感染，可有流产、死胎、呼吸系统症状，新生仔猪除神经症状外还可侵害消化系统，并伴大批死亡。本病已经给全世界的养猪业造成严重的损失，我国许多地区已报道该病。为进一步探讨该病的控制、净化措施，我们对12个养猪场共856分血清采用美国嗍公司的ELISA试剂盒进行了抗体检测。 相似文献
17.
W A Vestre 《Modern veterinary practice》1984,65(2):93-97
In 5 cases of glaucoma (2 from trauma, 2 from narrowed drainage angles, 1 secondary to lens extraction), cyclocryotherapy was used to control intraocular pressure. In all cases the intraocular pressure decreased, with the usual result being a cosmetic and painless but blind eye. 相似文献
18.
Occurrence of MRSA in pigs and in humans involved in pig production--preliminary results of a study in the northwest of Germany 总被引：1，自引：0，他引：1
Meemken D Cuny C Witte W Eichler U Staudt R Blaha T 《DTW. Deutsche tier?rztliche Wochenschrift》2008,115(4):132-139
In 2007, 678 pigs of all age groups out of 347 different farms from Lower Saxony and Northrhine-Westphalia and 86 persons occupationally exposed to pigs were investigated for their nasal colonisation with methicillin-resistant Staphylococcus areus (MRSA) by the Field Station for Epidemiology of the University of Veterinary Medicine Hannover and the Robert Koch-Institute. At the individual animal level, a frequency of positive results of 13% (n = 85 positive animals) and at the herd level, a frequency of positive results of 18% (n = 62 positive herds) were found. All isolates were assigned to the Multilocus Sequence Typing Type ST398. Within MRSA-positive herds, there were more MRSA-negative than MRSA-positive animals. Among the occupationally exposed persons (veterinarians, laboratory personnel and meat inspection personnel), 20 persons (23%) showed a nasal colonisation with MRSA ST398. A quite strong association between the intensity of the contact to pigs with the frequency of nasal colonisation in the occupationally exposed persons was detected. None of the animals or the humans nasally colonised by MRSA ST398 showed any clinical symptoms of a staphylococcal infection. Conclusions are drawn on the herd and intra-herd prevalence of the nasal colonisation of pigs with MRSA ST398 in pigs, but especially on which questions need to be addressed by further research. 相似文献
19.
为了解西藏拉萨市家禽禽流感抗体水平,2017年8月随机选择免疫过H5禽流感疫苗的8个规模养殖场、2个散养户、3个活禽交易市场,共13个群体,采集1 041份家禽血清样品进行H5、H7、H9亚型禽流感HI抗体检测。结果显示：H5亚型禽流感免疫抗体合格率为45.73%,H7、H9亚型抗体阳性率分别为21.13%、52.64%;养殖场、散养户和活禽交易市场的不同亚型抗体水平存在较大差异,规模化养殖场的H7亚型抗体阳性率最高（29.92%）,活禽市场的H5、H9亚型阳性率最高（78.16%、79.31%）,散养户的所有亚型抗体阳性率均最低。结果表明,拉萨市H5亚型禽流感疫苗免疫效果较差,特别是散养户,疫病发生风险较高,H7、H9亚型疑似自然感染率较高,应进一步查明原因,及时采取相应的措施,防止疫情发生。 相似文献
20.
N. Hawa D. G. Rae S. Younis W. Mahadi R. Ibrahim W. Al-Wahab 《Tropical animal health and production》1988,20(3):130-136
Summary Parvaquone was tested in cattle infected withTheileria annulata when they were presented at clinics in the vicinity of Baghdad. Out of over 200 cases presented with suspected theileriosis between July 1984 and July 1985, the drug was used in 45 cases where theileriosis was confirmed by microscopic examination of blood and lymph node biopsy smears. Twenty seven of the cases were considered mild and 18 cases severe. Weights of the cattle were estimated and parvaquone was administered by intramuscular injection at a nominal dose of 20 mg/kg. A single treatment with parvaquone was used in 25 cases and 20 cases were treated twice but there was no correlation between severity of disease and the number of treatments given. Twelve cases (27%) also received antibacterial therapy. All cases were in exotic cattle or cattle born from exotic (imported) cattle and 64% of the cases were in cattle under six months of age. Temperatures dropped immediately after treatment and the majority were normal (below 39.5°C) by two to three days after the first treatment. Of the 45 cases treated 43 recovered. This compares very favourably with a previously reported mortality of 66% in untreated imported cattle in Iraq.
Eficacia Del Parvaquone En El Tratamiento De La Theilerosis Natural En Ganado En Iraq
Resumen Se trató ganado infectado conTheileria annulata en forma natural con parvaquone, en clínicas veterinarias localizadas en la vecindad de Baghdad. De 200 casos admitidos con sospecha de theileriosis, entre julio 1984 y julio 1985, la droga se usó en 45 casos confirmados mediante el examen microscópico de frotis de sangre y biopsias de ganglios linfáticos. Veintisiete de los casos se consideraron moderados y 18 casos severos. Se estimaron los pesos de los animales enfermos, suministrandoles parvaquone vía intramuscular en dosis nominales de 20 mg/kg (rango 16–35 mg/kg). Se utilizó un solo tratamiento con parvaquone en 25 casos clínicos, mediante la aplicación de una sola inyección y se aplicaron dos inyecciones en 20 casos (doble tratamiento), sin que se encontrara correlación alguna entre la severidad de la enfermedad, recuperación y número de tratamientos. Doce casos (27%) recibieron también algún tratamiento antibacteriano. Todos los casos de theileriosis se presentaron en ganado exótico o nacido de ganado exótico (importado) y 64% de los casos ocurrieron en ganado bajo los seis meses de edad. La temperatura bajó inmediatamente después del tratamiento, normalizándose dos o tres días después de tratamiento (bajo 39.5°C). De los 45 casos tratados 43 se recuperaron. Se informa una mortalidad previa de 60% en ganado importado no tratado contra theileriosis en Iraq.
Efficacite De La Parvaquone Pour Le Traitement De La Theileriose Naturelle Des Bovins En Irak
Résumé La parvaquone a été essayée pour le traitement de bovins infectés parTheileria annulata lorsqu'ils étaient présentés aux cliniques des environs de Bagdad. Sur plus de 200 cas présentés pour suspicion de theilériose entre juillet 1984 et juillet 1985, le médicament a été utilisé dans 45 cas où la theilériose était confirmée par l'examen microscopique du sang et de biopsies de ganglions lymphatiques, 27 cas étaient considérés comme des atteintes modérées et 18 comme des cas graves. Les poids des animaux étaient estimés à l'oeil et la parvaquone administrée par voie intra-musculaire à la dose normale de 20 mg/kg (soit 16 à 35 mg/kg). Un traitement unique à la parvaquone a été pratiqué dans 25 cas et il a du être renouvelé dans 20 cas mais il n'y avait pas corrélation entre la gravité des symptômes et le nombre de traitements requis. Dans 12 cas (27%) une thérapie antibactérienne a également été mise en oeuvre. Tous les malades étaient des animaux importés ou issus d'animaux importés et dans 64% des cas les animaux étaient âgés de moins de 6 mois. Les températures ont chuté immédiatement après le traitement et, pour la plupart, étaient normales (moins de 39°5) deux à trois jours après le traitement—sur 45 animaux traités, 43 ont guéri. Ces résultats apparaissent très favorables par rapport à la mortalité de 66% rapportée antérieurement et affectant les bovins non traités en Irak.相似文献