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ＩＢＤＶ为自行分离的 ＶＶＩＢＤＶ ＣＯＢ－Ｃ１组织毒,毒价为（ＣＩＤ５０）１０５．６／０．２ｍｌ,ＣＡＶ为 ＶＰ１和 ＶＰ２,基因克隆进家蚕杆状病毒转基因载体质粒中,后经重组,筛选后获得的重组ＶＰ１和ＶＰ２基因产物。ＩＢＤＶ经甲醛灭活后与ＣＡＶ按适当比例混合。１：４白油性剂研制成油包水型乳化剂二联疫苗,经安全试验免疫保护试验证明该二联灭活疫苗安全有效,免疫种鸡群后可使其后代产生ＩＢＤＶ和ＣＡＶ抗体,雏鸡得到较好的保护。CAV基因工程亚单位疫苗与IBDV二联灭活疫苗的研究@张知良$江苏省家禽科学研究所!扬… 相似文献
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CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用 总被引：1，自引：1，他引：1
以传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因表达质粒DNA为免疫原，以CpG的寡核苷酸(CpG-0DN)为免疫佐剂，肌肉注射于14日龄SPF鸡，1周后加强免疫1次，2次免疫后15d和21d分别测定血清ELISA抗体效价，并于免疫后21d用IBDV99儿强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示，(1)VP2基因重组质粒DNA与CpG共同免疫组的ELISA抗体水平明显高于VP2重组质粒免疫组；(2)IBD弱毒苗与VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于VP2重组质粒免疫组，且比VP2基因重组质粒DNA与CpG共同免疫组略高；(3)VP2基因重组质粒DNA与CpG共同免疫组及IBD弱毒苗与VP2重组质粒免疫组可明显降低IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明，CpG寡核苷酸对IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用，有很大的应用前景。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(8):88-92
从GenBank下载传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列,根据昆虫细胞偏爱密码子对IBDV VP2基因进行密码子优化,化学合成优化后的VP2基因序列,然后构建杆状病毒表达载体pTri Ex-4-VP2,构建成功的重组杆状病毒pTri Ex-4-VP2转染sf9细胞,制备病毒原种,采用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定VP2的免疫原性。结果显示:细胞感染Bac-VP2后,其细胞裂解蛋白在58 ku附近有1个条带,且该条带与IBD阳性血清发生特异性反应;间接免疫荧光试验(IFA)结果显示VP2基因能在Sf9细胞中表达;动物攻毒保护试验中,2次免疫重组VP2蛋白后能诱导14日龄SPF鸡产生对IBDV强毒攻击,保护率为60%。本研究为进一步研究IBDV VP2基因工程疫苗提供了物质基础。 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(5):7-11
为探讨鸡新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)二联灭活疫苗在蛋雏鸡养殖中的实际应用效果进行本试验。用鸡新城疫、传染性法氏囊二联灭活疫苗及传染性法氏囊活疫苗以不同免疫程序免疫7~14日龄蛋雏鸡,定期监测NDV、IBDV抗体水平,并在雏鸡60日龄时进行攻毒保护试验。结果表明,各二联苗免疫组NDV抗体水平在免疫后14 d即达到NDV血清学最低有效保护价标准,并维持至雏鸡60日龄。免疫后28 d,灭活苗一次性免疫各组IBDV中和抗体水平显著高于活苗两次免疫组,琼扩抗体水平与活苗两次免疫组无明显差异。雏鸡60日龄时攻毒,各免疫组均100%保护,对照组无保护。以上结果说明该二联灭活疫苗可替代IBDV活毒疫苗用于7~14日龄商品雏鸡免疫,免疫期至少为60d。 相似文献
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将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒Gx株vp2基因克隆到载体pFastBac HTA中,构建重组转座载体pFVP2,然后将其转化DH10Bac感受态大肠杆菌,将vp2基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体BacmidVP2;通过脂质体转染将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacVP2。用Western blot和间接免疫荧光试验分析表明IBDV VP2蛋白在Sf9昆虫细胞获得正确表达,所表达的重组VP2蛋白分子量约50 Ku。以rBacVP2感染Sf9细胞裂解物免疫3周龄SPF鸡,在免疫后7 d可检测到ELISA抗体;免疫后14 d可检测到琼脂免疫扩散抗体。攻毒试验表明,初次免疫后14 d对IBDV超强毒株的攻击保护率为75%,2次免疫后14 d对其的攻击保护率为100%。 相似文献
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传染性法氏囊病病毒VP2基因在家蚕中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
传染性法氏囊病病毒（IBDV）能引起以淋巴细胞衰竭为特征的抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原，在VP2上的点突变是造成IBDV抗原漂变的主要原因。为研究VP2作为IBDV亚单位疫苗的潜力，本实验将IBDV JD1株的VP2基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中，将重组载体pBacPAK-VP2与病毒Bm-Bac-PAK6的线性化DNA共转染家蚕培养细胞，获得重组病毒BacPAK-VP2。DIG点杂交表明重组病毒基因组中含有VP2基因。重组病毒感染家蚕5龄幼虫后，用ELISA、SDS－PAGE和Western blotting检测蚕血淋巴中重组VP2蛋白的相对表达量及免疫反应性。结果表明重组VP2蛋白具有免疫反应性，感染后5－6d在蚕血淋巴中的表达量最高。 相似文献
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DNA免疫诱导SPF鸡对传染性法氏囊病的免疫保护反应 总被引：6，自引：0，他引：6
传染性法氏囊病病毒（IBDV）D78株VP2基因插入真核表达质粒pCI CMV启动子下游多克隆位点，构成pCIVP2用于3周龄SPF雏鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCI VP2 100μg，2周后加强免疫一次；二免2周后，人工感染vvIBDV G株。结果，两次免疫后血清中和抗体试验组为阳性而对照组为阴性；试验组攻毒后发病11／11，攻毒后1周存活10／11，所有存活鸡法氏囊较正常中度或轻度萎缩；对照组发病6／6，病死5／6，存活1／6；存活鸡法氏囊较正常严重萎缩。组织病理学观察表明，无论法氏囊淋巴滤面积还是其中的淋巴细胞数量，免疫试验组都要远远大于或多于免疫对照组。结果表明，VP2基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生和中抗体，并形成对IBDV超强株致死攻击的免疫保护，虽不能阻止临床发病及法氏囊病理损伤发生，但有可能减缓法氏囊病理损伤程度。 相似文献
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采用RT-PCR技术从滨州分离株中扩增出传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP4基因,将VP4基因插入到pGEX-4T-1载体上构建pGEX-4T-1-VP4,诱导表达并用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和层析柱纯化得到纯化的重组VP4蛋白。以兔抗鸡IgG为胶体金标记物,以重组IBDV VP4蛋白和羊抗兔IgG为硝酸纤维素膜检测线和质控线的包被物,制备一种能检测IBDV VP4蛋白抗体的胶体金试纸条。结果表明,该试纸条检测IBDV强毒(IBDV BC6/85)免疫的血清检测线显红色,为阳性反应;检测IBDV弱毒(IBDV NB)免疫的血清、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)标准阳性血清、禽流感H5和H9标准阳性血清、传染性支气管炎标准阳性血清及0.85%生理盐水检测线不显红色,为阴性反应。该试纸条与建立的ELISA方法相比,敏感度低2个滴度;检测320份临床血清,试纸条与ELISA的符合率达99.38%。提示,该试纸条使用方便、操作简单,10 min内可以用肉眼判断结果,可为区分IBDV的强弱毒提供参考数据,具有较大的应用价值。 相似文献
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IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备 总被引：1，自引：0，他引：1
本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb).利用EcoR I和Xho I双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDV VP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主茵BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23 ku.Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和western blot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清II型IBDV 23/82株VP5反应,不与血清I型IBDV Gt株VP5反应.腹水抗体间接ELISA效价为1×104.该mAb的制备为研究血清II型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础. 相似文献
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IBDV VP2/VP243基因DNA疫苗表达质粒的构建与表达 总被引：2，自引：0，他引：2
将传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２／ＶＰ２４３插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ中,置于ＣＭＶ启动子的调控之下,构建成ＤＮＡ疫苗表达质粒ｐｃＤＮＡ ＶＰ２和ｐｃＤＮＡ ＶＰ０。分别转染ＣＥＦ细胞后,于２４、４８、７２ｈ取细胞裂解液进行ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测,ｐｃＤＮＡ ＶＰ２于转染后２４ｈ呈阳性反应,４８ｈ表达量高于２４ｈ;ｐｃＤＮＡ ＶＰ０于转染后４８ｈ呈阳性反应 相似文献
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鸡传染性贫血病灭活苗的研制 总被引：6，自引：1，他引：5
用福尔马林溶液对ＣＡＶ进行灭活,通过常规途径制备鸡贫血病油乳剂灭活苗。将此灭活苗接种ＳＰＦ成鸡,接种后３周检测成鸡ＣＡＶ抗体,检出率为９／９;同时检测到子代鸡血清抗体和卵黄抗体,阳性率分别为５／５、１３／１５。用ＣＡＶ强毒攻击子代鸡,测得该灭活苗对子代鸡的保护率为５／５。实验证明,鸡贫血病灭活苗可以预防子代鸡感染ＣＡＶ,能够控制贫血病的发生。 相似文献
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Moeini H Omar AR Rahim RA Yusoff K 《Comparative immunology, microbiology and infectious diseases》2011,34(3):227-236
In the present study, we describe the development of a DNA vaccine against chicken anemia virus. The VP1 and VP2 genes of CAV were amplified and cloned into pBudCE4.1 to construct two DNA vaccines, namely, pBudVP1 and pBudVP2-VP1. In vitro and in vivo studies showed that co-expression of VP1 with VP2 are required to induce significant levels of antibody against CAV. Subsequently, the vaccines were tested in 2-week-old SPF chickens. Chickens immunized with the DNA-plasmid pBudVP2-VP1 showed positive neutralizing antibody titer against CAV. Furthermore, VP1-specific proliferation induction of splenocytes and also high serum levels of Th1 cytokines, IL-2 and IFN-γ were detected in the pBudVP2-VP1-vaccinated chickens. These results suggest that the recombinant DNA plasmid co-expressing VP1 and VP2 can be used as a potential DNA vaccine against CAV. 相似文献
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用RT-PCR方法从传染性法氏囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡法氏囊组织AH1与AH2中扩增传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析结果显示,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1350nt,编码450aa,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为98.2%、99.3%,七肽基序均为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。进一步将VP2基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经多次亚克隆获得了重组腺病毒rAd-(IBDV)VP2。利用Western-blot、IFA等方法检测IBDVVP2蛋白的体外表达情况,结果证明VP2基因在腺病毒中获得了表达。 相似文献
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根据GenBank中CAV哈尔滨分离株基因序列,设计出针对CAV VP1大片段(608 bp)的引物,利用PCR方法从CAV基因组序列中扩增出VP1基因的大片段(608 bp),按照正确的读码框克隆到原核表达载体pET32a( )上,得到含VP1大片段的pET32a( )重组子,转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白表达,经SDS-PAGE和Western blotting检测发现有分子质量约42 ku的融合蛋白表达,与预期分子质量大小一致,通过Ni亲和层析柱纯化出融合蛋白,经Western blotting鉴定,融合蛋白与His单抗能够结合.CAV VP1基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化为后续制备多克隆抗体和单克隆抗体提供了良好的抗原来源,也为研究VP1与其他CAV蛋白之间的相互关系奠定了基础. 相似文献
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鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）和新城疫（ＮＤ）病毒接种同一鸡胚收取种毒试制ＩＢＤ、ＮＤ二联弱毒冻干疫苗,并按《规程》方法分别检验。结果证明安全、效力均能达到合格标准,两种病毒互相不干扰抗体的产生。 相似文献
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表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２，该病毒在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒，经翅皮下５×１０５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡，免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒，获得了５／６的保护，但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩。实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原，提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ的免疫中起着较为重要的作用。本研究为ＩＢＤＶ重组病毒疫苗研制进行了有益探索。 相似文献
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为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。 相似文献
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In recent years inclusion body hepatitis (IBH) has emerged as an economically important disease in Western Canada. Historically, infections with infectious bursal disease virus (IBDV) and chicken anemia virus (CAV) have been known to suppress the immune system of broilers and make them more susceptible to a secondary disease such as IBH. Recently it has been reported that virulent adenoviruses are able to cause IBH as a primary disease in broilers without apparent involvement of IBDV and CAV. The objectives of this study were to examine the possible association of IBH with IBDV and CAV infections in Western Canada and to identify adenoviruses involved in outbreaks. Serum samples from 17 broiler-breeder flocks and their progeny were collected when broilers were hatched and then again from broilers at the time of slaughter, and these samples were tested for IBDV and CAV antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Based on the ELISA titers the antibody response to vaccination against IBDV and CAV was at an expected level in all broiler flocks. Therefore, IBH outbreaks in these flocks were not due to inadequate levels of antibodies against IBDV and CAV. Moreover, there was no correlation found between occurrences of IBH outbreaks in broilers and their IBDV or CAV titers at the time of processing. Viruses that were isolated from livers of birds suffering from IBH could be classified into four different genotypes. Their hexon gene loop 1 sequences showed high percentages of identity to FAdV-7, FAdV-8a, FAdV-8b, and FAdV-11. The results of this study could not demonstrate an association of IBH with IBDV and CAV infections, but they supported the hypothesis that IBH in broilers in Western Canada is a primary disease with no apparent immunosuppressive involvement. 相似文献