纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶酶学性质研究     

孙妍  王加启  奚晓琦  卜登攀  彭华  魏宏阳  周凌云 《中国畜牧兽医》2010,37(12):15-17

试验为研究纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶的酶学性质,在液体培养基中培养该菌株并获得粗酶液,之后分别在不同处理条件下对粗酶液中蛋白酶活性进行测定。结果表明,该酶最适反应温度为65 ℃,最适反应pH为9.0,45 ℃时有较好的热稳定性,pH 8.0~9.0有较好的pH稳定性。金属离子Mn²⁺和Zn²⁺对该蛋白酶活性有激活作用,Fe²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺对酶活性有抑制作用。  相似文献   

鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的克隆表达及其表达产物活性研究     

任峰  谭磊  包世俊  张凡庆  陆凤  仇旭升  宋翠萍  孙英杰  陈书明  丁铲 《中国动物传染病学报》2014,(2):52-57

根据GenBank中鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)MS53株的乳酸脱氢酶序列设计一对特异性上下游引物,通过PCR扩增获得MS WVU1853菌株的乳酸脱氢酶基因并将其克隆至pGEM-T Easy载体,测序正确并成功完成点突变后连接表达菌pET-28a(+),将重组表达质粒pET-28a-ldh转化表达菌BL21(DE3)。经IPTG诱导成功表达蛋白rMSLDH并测定其酶促活性。结果显示,重组表达的rMSLDH具有较强酶活性;最适反应温度40℃,最适pH7.5;Al2+和Ba2+可增加酶活性;Cr3+作为该酶的辅因子,在一定浓度内能有效的促进酶促反应进行;Cu2+作用下酶几乎失活,Fe3+、Mn2+、Ni2+、Zn2+对酶产生不同程度的抑制作用;其米氏常数(Km)为0.365 mmol/L,最大反应速率(Vm)为0.98μmol(L●min)。本研究结果为更好地研究鸡滑液支原体乳酸脱氢酶的生物学功能提供了参考。  相似文献   

金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性研究     

李琦  廖成水  毛福超  王晓利  张梦珂  张晓洁  张春杰  李银聚  吴庭才  程相朝 《中国预防兽医学报》2020,(2):175-181

为研究金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,本研究复苏培养金黄色葡萄球菌后取培养上清液,采用透析得到金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白,结果显示获得的该蛋白浓度为48.5μg/mL。采用琼脂糖凝胶电泳法、琼脂扩散法和琼脂培养法检测金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,利用琼脂糖凝胶电泳法探究温度、pH、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白表现出降解λDNA的核酸酶活性,且最适温度和pH值分别为50℃和9.0,在低温和酸性条件下核酸酶的活性较弱,但胞外核酸酶对70℃以上的耐受性较差。不同浓度的Ba^2+、Mg^2+和Zn^2+对胞外分泌蛋白的核酸酶活性无影响;低浓度(0.01 mmol/L^1 mmol/L)的Ca^2+、Ni^2+、Cu^2+和Mn^4+可以促进胞外核酸酶切割λDNA的活性;高浓度的Na^+、K^+和Fe^3+可以提高胞外核酸酶切割λDNA的活性;添加Co^2+(0.01 mmol/L^10 mmol/L)可以促进胞外分泌蛋白的核酸酶活性。本研究证实了金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,为进一步研究胞外分泌蛋白在金黄色葡萄球菌和宿主互作中的确切作用奠定了基础。  相似文献   

黄色瘤胃球菌木聚糖酶基因xynB的异源表达与酶学性质研究     

毕海红  胡馨元  王玉洁  翟圣君  张竞月  孙丽萍  王琴  夏呈强 《现代畜牧科技》2024,(2):1-5

该试验以黄色瘤胃球菌基因组为模板,通过PCR扩增获得目的基因xynB,将xynB与表达载体PET28a连接,获得重组载体PET28a-xynB。用IPTG对含有重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,镍离子层析柱纯化后检测其酶学性质。生物信息学分析表明,XynB理论大小为47 kDa,预测等电点为4.49,不含信号肽,含有1个糖苷水解酶11家族结构域和1个碳水化合物结合结构域。酶学性质研究结果表明,该酶的最适pH值为5.0,最适反应温度为40℃,金属离子Mg²⁺、Na⁺、K⁺和Ba²⁺对木聚糖酶XynB有较好的激活效果。综上可知,黄色瘤胃球菌木聚糖酶XynB属于GH11家族,最适pH值为5.0,最适温度为40℃,酶比活力为62.94 U/mg。  相似文献   

瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

马玉萍  薛天涵  成艳芬  朱伟云 《畜牧与兽医》2021,(1):24-30

旨在表达来源于瘤胃厌氧真菌基因组的4个木聚糖酶基因A、C、D和F,并比较分析其酶学特性。首先根据大肠杆菌基因编码偏好,合成可在大肠杆菌中表达的木聚糖酶基因序列,然后采用同源重组的方法将各序列分别插入载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中异源表达,并研究其酶学特性,结果成功表达出来源于厌氧真菌的4个木聚糖酶基因。测定其酶学性质发现,4种木聚糖酶的反应最适pH值均为8.0;木聚糖酶D的反应最适温度为37℃,其余3种木聚糖酶的反应最适温度均为45℃;4种木聚糖酶具有广泛的温度稳定性和pH稳定性;金属离子Ca²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺显著促进木聚糖酶活性(P<0.05),而Zn²⁺则有明显的抑制作用(P<0.05);4种木聚糖酶降解山毛榉木聚糖的能力显著高于其他底物(P<0.05)。本研究成功表达了4种来源于厌氧真菌的木聚糖酶,其良好的温度和pH稳定性具有潜在的工业应用价值。  相似文献   

家蚕5龄幼虫体内共轭酶和二氢叶酸还原酶的基本性质     

张剑韵  黄龙全 《蚕业科学》2003,29(3):255-259

共轭酶 (EC 3 4 2 2 12 )和二氢叶酸还原酶 (EC 1 5 1 3)是生物体内重要的叶酸代谢酶。以家蚕幼虫为材料分析了这两种酶的基本性质。 5龄幼虫体液共轭酶反应的最适pH为 7 8,最适温度为 5 0℃ ;反应体系中添加巯基乙醇、K+ 或Mg2 + 可显著提高酶活性 ,而对羟高汞苯磺酸、Co2 + 、Zn2 + 、Fe2 + 等对酶活性具有明显的抑制作用 ;以叶酸五谷氨酸为基质的水解产物为叶酸 ;另以叶酸三谷氨酸为底物 ,采用 33mmol/LHepse Ches缓冲液 (pH 7 8)在 37℃的反应条件下 ,求得Km 为 9 6 μmol/L。幼虫脂肪体等组织中二氢叶酸还原酶以NADPH为供氢体 ;在pH 4 5～7 5的范围内具有较强活性 ,最适反应温度 35℃ ;巯基乙醇、胍 ,以及高浓度的 1价金属离子 (K+ 、Na+ 等 )对酶具有活性化作用 ,对氯高汞苯甲酸、甲酰胺、Co2 + 等具有强烈的抑制作用 ;采用 35mmol/L柠檬酸 磷酸钠缓冲液 (pH 5 .0 ,10g/L抗坏血酸 )在 30℃的反应条件下 ,求得Km 值为 2 7μmol/L。家蚕体液可作为共轭酶的新酶源而加以利用。  相似文献   

影响德氏乳杆菌乳酸亚种H~+-ATPase活性的因素     

刘玉恩  马霞  张柏林 《乳业科学与技术》2009,32(2)

通过测定四株德氏乳杆茵乳酸亚种H+-ATPase的活性,确定反应温度、pH值、底物添加量、培养时间以及金属离子对酶活性的影响.实验结果表明,德氏乳杆菌乳酸亚种H+-ATPase的最适反应条件为:温度42℃;pH 7.5;ATP添加量为3 mmol/L;茵株最适培养时间为8 h和24 h.Mg2+、Na+、K+对四株茵的H+-ATPase活性均有促进作用,Mn2+、Ba2+、Al3+、Li+对这4株茵的H+-ATPase活性有不同程度的抑制作用,其中Mg2+的促进作用最明显,而Al3+的抑制作用最明显.  相似文献   

2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、融合表达及其酶学性质分析     

丁轲  邱静静  罗伟光  李旺  李元晓  曹平华  何万领  赵龙妹  王玉琴  张春杰 《动物营养学报》2017,29(8)

本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30~70℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0~9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn~(2+)外的其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用,其中Hg~(2+)和Cu~(2+)对的抑制作用较明显。由此可见,本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22,且该酶具有一定的活性,可适应较宽广的温度和pH范围,对金属离子敏感。  相似文献   

高产淀粉酶枯草芽胞杆菌的诱变选育和酶学性质研究     

恒子钤  丁轲  彭春平  罗伟光  李三栋  张小明  任雪  余祖华 《畜牧与饲料科学》2013,34(9):32-34

为了提高产淀粉酶枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis N21的酶活,试验采用紫外线对该菌株进行诱变,并对该淀粉酶的部分酶学性质进行了研究。结果表明,淀粉酶酶活由出发株的32.96 U/mL增加到86.24 U/mL,比原菌株酶活提高了161.65%。该酶的最适反应温度为35℃,最适pH值为7.0,在30~40℃,pH值为5.0~8.0条件下较稳定。Ca2+和Mn2+对酶有激活作用,Cu2+、Zn2+对酶有抑制作用,而Mg2+、Fe2+对其影响较小。说明筛选出1株产酶活性较强的突变菌株。  相似文献   

康宁木霉产木聚糖酶的稳定性研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

曹香林  王俊丽  聂国兴  明红  朱浩拥  田晓龙 《中国饲料》2009,(16)

本文研究了不同无机离子、pH值和温度对康宁木霉(Trichoderma koningii)产木聚糖酶稳定性的影响.结果表明:(1)不同种类、不同浓度的无机离子对木聚糖酶的活性表现出不同程度的激活或抑制作用.Cu2+、Mn2+和Ba2+可抑制木聚糖酶活性,而Co2+、Na+、K+、Fe2+、Ca2+和Mg2+可激活木聚糖酶活性.(2)不同pH和温度对木聚糖酶的活性也有显著影响.康宁木霉产木聚糖酶的最适保存pH和温度分别是7.0和30℃.且在pH 5～8时相对酶活可保持80%以上.  相似文献   

植物角质降解菌的种属鉴定、发酵条件优化及酶学性质研究     

梁争文  张铁鹰  李爽  刘俊丽 《动物营养学报》2016,(11):3567-3575

本试验旨在通过角质降解菌株X8P的种属鉴定、发酵条件优化和酶学性质研究,探讨降解植物表面角质层,进一步改善动物对植物纤维利用的可能新方案。试验通过形态观察和16 S r DNA测序鉴定菌株X8 P种属,并对其产酶所需碳源、氮源、发酵温度与时间进行优化,其发酵液经硫酸铵盐析沉淀获得其胞外蛋白粗酶,并对其粗酶催化的适宜p H和p H稳定性、温度和温度稳定性,以及有机溶剂、表面活性剂和金属离子对其活性的影响进行研究。结果表明:1)菌株X8P经形态观察和分子鉴定为东方醋杆菌(Acetobacter orientalis)。2)菌株X8P适宜产酶发酵条件为溶菌肉汤(LB)培养基中37℃发酵4 d,1%橄榄油和1%葡萄糖明显促进菌株产酶,而1%可溶性淀粉明显抑制菌株产酶。3)该菌株胞外粗酶催化适宜p H和温度分别为6.5和45℃,且表现出一定p H稳定性,但在有机溶剂中不稳定,仅甘油中可保留全部活性,在二甲基亚砜(50%)中活性可保留66%。吐温(Tween)-20(1 mmol/L)、Tween-80(1 mmol/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(1和10 mmol/L)可使菌株X8P粗酶活性提高3%~35%。金属离子钾离子(K+)、锰离子(Mn2+)(1和10 mmol/L)可使菌株X8P粗酶活性提高2%~20%。由此可见,菌株X8P具有一定的产角质酶潜力和应用前景,可进一步深入研究。  相似文献   

产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性的研究     

董岩岩  张燕婕  黄遵锡  周峻沛  唐湘华  李俊俊 《饲料工业》2011,32(14)

利用筛选培养基从不同豆制品作坊附近的土样中筛选出一株产α-半乳糖苷酶的菌株D-1,对其进行分子鉴定及所产的α-半乳糖苷酶进行酶学特性研究。研究表明,菌株D-1为Aspergillus niger,此菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度是55℃,在60℃以下热稳定性较好;最适反应pH值为5.0,在pH值3.0～5.5范围内稳定性较好,相对酶活>64.1%;Mg2+、Na+、Pb2+、K+、Mn2+、Co2+、Al3+对α-半乳糖苷酶均有不同程度的抑制作用,其中Cu2+和Fe3+的抑制作用较为明显,而Ca2+、EDTA(乙二胺四乙酸)、Zn2+对α-半乳糖苷酶有一定的促进作用。  相似文献   

Changes in oxygen content and acid-base balance in arterial and portal blood in response to the dietary electrolyte balance in pigs during a 9-h period after a meal     

Dersjant-Li Y  Verstegen MW  Jansman A  Schulze H  Schrama JW  Verreth JA 《Journal of animal science》2002,80(5):1233-1239

The effect of two dietary electrolyte balance (dEB, Na+ + K+ - Cl-) levels on arterial and portal blood oxygen content, blood pH, and acid-base status in pigs was studied during a 9-h period after a meal, using a crossover experimental design. The dEB levels were established by changing the Cl- level in the diets. Four pigs with a mean weight of 45 kg were surgically fitted with catheters in the carotid artery and portal vein. Two dEB levels (-100 and 200 mEq/kg) were evaluated in two periods of 1 wk each. Feed was given at 2.6 times the maintenance requirement for energy in two meals per day. Water was freely available. Blood samples were taken at 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, and 9 h after feeding. Blood hemoglobin; O2 pressure; O2 saturation; O2 content; pH; PCO2; HCO3-; base excess; and Na+, K+, and Cl- contents were measured. Oxygen contents in arterial and portal blood were lower (P < 0.008) in the -100 mEq/kg group (5.78 and 4.82 mmol/L respectively) compared to the 200 mEq/kg group (6.18 and 4.99 mmol/L respectively). This was related to the lower hemoglobin content in the blood of animals in the -100 mEq/kg group. Arterial and portal blood pH were lower (P < 0.003) at -100 mEq/kg (7.46 and 7.37) than at 200 mEq/kg (7.49 and 7.43). The difference in blood pH between the two groups was sustained throughout the sampling period. The average values of arterial and portal blood for base excess and HCO3- content were higher (P < 0.001) at high dEB (6.96 and 31.0 mmol/L, respectively, for -100 mEq/kg and 12.54 and 35.9 mmol/ L, respectively, for 200 mEq/kg). The Na+ concentration in the blood was increased and K+ and Cl- concentrations were decreased (P < 0.02) by increasing dEB from -100 mEq/kg to 200 mEq/kg. Blood electrolyte balance level was higher (P < 0.001) in the 200 mEq/kg dEB group than in the -100 mEq/kg dEB group. In conclusion, dEB changed blood oxygen content and pH, and influenced the acid-base buffer system in pigs. Also, within each group, pigs maintained a relatively constant blood pH level during the 9-h period after feeding.  相似文献   

桑天牛遗传多样性研究中AFLP反应体系的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

马向超  张爽  黄大庄  张静洁  王圣杰  夏明瑞 《蚕业科学》2010,36(6):1022-1027

建立适合的AFLP反应体系研究桑树主要害虫桑天牛(Apriona germari)的遗传多样性,有助于从分子水平分析桑天牛不同地理种群的遗传多样性以及开辟害虫防治新途径。对提取的桑天牛成虫基因组DNA预扩增中的Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及选择性扩增中的预扩增产物稀释倍数、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度和Taq酶的用量等进行单因素试验,优化反应体系。确定预扩增反应体系中的Mg2+终浓度为1.50mmol/L,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为10.0×10-7mol/L,Taq酶用量为1.00U;确定选择性扩增反应体系中的预扩增产物稀释倍数为40倍,dNTP终浓度为0.15mmol/L,引物浓度为5.00×10-7mol/L,Mg2+终浓度为1.50mmol/L,Taq酶用量为1.00U。用优化后的反应体系扩增得到了条带清晰的桑天牛AFLP图谱。  相似文献   

Study of the acetylcholinesterase activity of Ascaridia galli: kinetic properties and the effect of anthelmintics.     

S Gupta  S N Sanyal  C L Duggal 《Acta veterinaria Hungarica》1991,39(3-4):165-174

Acetylcholinesterase (EC 3.1.1.7) activity was demonstrated in whole worm homogenates of adult Ascaridia galli with acetylthiocholine as substrate. The pH optimum was not measurable because of an autohydrolysis of the substrate. The Michaelis constant (Km) was 4 mM with saturation by excess substrate. Optimum enzyme activity was noted at a protein concentration of 200 mg/ml assay medium and at a temperature of 37 degrees C. Arrhenius plot of temperature dependence of the enzyme activity showed an energy of activation (delta Ea) of 28.962 K joule/mole above, and 25.448 K joule/mole below, the transition temperature (37 degrees C). Complete inhibition by eserine (physostigmine), a specific and classical acetylcholinesterase inhibitor, established the identity of the enzyme. A marginally higher enzyme activity was observed in females than in males as well as in homogenates from worms of mixed sexes. The enzyme was markedly activated by divalent metal cations such as Fe2+, Mg2+, Cd2+, Cu2+, Zn2+ and Ca2+, while Co2+ and Mn2+ inhibited the activity. Piperazine adipate at a concentration of 10(-3) M caused 45.5% and albendazole, a benzimidazole anthelmintic, 37.5% inhibition in the enzyme activity, while levamisole and mebendazole proved to be practically ineffective, causing an inhibition of 12 and 9%, respectively.  相似文献   

盐胁迫下外源Ca~(2+)对红豆草幼苗抗性生理的影响     

魏永鹏  陈天祥  南丽丽  于闯 《草原与草坪》2015,(1):15-19

以蒙农红豆草为材料,研究了100mmol/L NaCl胁迫下不同浓度外源Ca2+对红豆草幼苗的生长、脯氨酸、可溶性糖和叶绿素含量及根系活力的影响;探讨了Ca2+对盐胁迫伤害的缓解作用。结果表明:随着Ca2+浓度的增加,与CK相比,红豆草脯氨酸、可溶性糖、叶绿素含量及根系活力呈先升高后降低的明显变化趋势,在T3(100mmol/L NaCl+30mmol/L CaCl2)处理下,红豆草脯氨酸、可溶性糖及叶绿素含量与对照相比提高了32.3%,60.0%和9.7%,差异显著(P0.05);T3、T4处理的根系活力显著高于CK(P0.05),其他处理与CK无明显差异;T3处理的株高显著高于对照CK(P0.05),其他处理与CK间无显著差异,达到最佳的效果。  相似文献   

猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响     

李琦  牛俊辉  王晓利  毛静  全映颖  刘桂坤  雷显前  朱鹏瑶  廖成水 《畜牧兽医学报》2021,52(3):733-741

旨在探究猪霍乱沙门菌胞外产物的核酸酶活性及其对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响。采用平板培养法、琼脂糖凝胶电泳法和琼脂扩散法观察猪霍乱沙门菌胞外产物降解λDNA的活性，同时，分析不同温度、pH和金属离子对胞外产物核酸酶活性的影响以及胞外产物对巨噬细胞胞外诱捕网形成的影响。猪霍乱沙门菌胞外产物具有降解λDNA的DNA酶活性，高温和酸性条件抑制DNA酶的活性，活性最适温度和pH分别为42℃和9.0，且胞外产物的核酸酶可被60℃以上的温度灭活。添加Na⁺、K⁺、Ca²⁺和Ni²⁺对胞外产物切割λDNA的活性没有影响；5.00和10.00 mmol·L^-1的Ba²⁺、Mg²⁺和Mn²⁺可提高胞外产物的DNA酶活性；0.01~1.00 mmol·L^-1的Zn²⁺、Cu²⁺和Fe³⁺对胞外产物的DNA酶活性具有促进作用，但Co²⁺则表现出抑制作用。荧光显微镜和定量分析均显示，猪霍乱沙门菌不能刺激巨噬细胞释放胞外诱捕网，而猪霍乱沙门菌胞外产物可显著降解白色念珠菌刺激巨噬细胞形成的胞外诱捕网。本研究证实了猪霍乱沙门菌胞外产物的DNA酶活性，为进一步探究胞外产物在猪霍乱沙门菌感染与宿主免疫互作中的作用提供参考。  相似文献   

槲树DNA SSR-PCR反应体系的正交优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶青雷  王玲玲  藏楠  陈丹  王学英 《蚕业科学》2008,34(2):307-311

利用正交设计L16(45)对槲树(Quercus dentata Thunb.)基因组DNASSR-PCR反应体系的5个因素(Tap酶,Mg2+,,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了槲树模板DNASSR-PCR反应的最佳体系(20μL):60ng模板DNA,2mmol/LMg2+,0.075U/μLTaq酶,0.4mmol/L dNTP,引物浓度0.1μmol/L。对槲树DNASSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行了梯度试验,最佳退火温度为51.3℃。  相似文献