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1.
本试验进行了NDV—IBV—AIV—IBDV检测基因芯片的构建及制备。以构建的重组质粒为模板，用PCR方法扩增制备靶基因，异丙醇沉淀法进行纯化，制备的靶基因质量浓度可达161．88～1218．36mg／L。将靶基因以点样缓冲液稀释至100mg／L，以芯片点样仪SpotArray24将靶基因点制在氨基化基片上，样点中心间距450／Lm，样点直径220／Lm。点样基片经室温干燥2h、水合处理10s、紫外线交联25min和0．2％SDS洗涤5min等系列处理后，成功制备出检测基因芯片。试验以PCR扩增标记制备检验探针，对制备的检测芯片进行质量检验。结果表明，制备的NDV—IBV—AIV—IBDV检测基因芯片质量好，可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行检测。 相似文献
2.
为获得禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)NP蛋白的单克隆抗体,将构建的重组表达质粒pET-30a-NP转化BL21细胞,经IPTG诱导表达、纯化后作为免疫原,免疫8周龄Balb/c雌性小鼠,并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过ELISA方法、Western-blot方法进行筛选,获得3株杂交瘤细胞株,命名为3A6、2H12、5F7,并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示：3株细胞株连续传10代均稳定分泌单克隆抗体,分泌的单克隆抗体亚型均为IgG2b,轻链类型均为Kappa。制备并纯化了以上3株单克隆抗体,浓度分别为2.9、2.5、2.8 mg/mL,纯度不低于90%。West-blot检测,单抗与H7血凝抑制试验抗原、H5血凝抑制试验抗原、H9N2病毒能发生特异性反应,说明单抗具有广谱性,且与IBDV、REV、IBV、MDV、ALV、AE、ILT、NDV、EDSV等均无特异性条带出现,说明特异性良好。本研究制备的3株针对禽流感NP蛋白的单抗,具有较好的特异性、保守性和广谱性,为下一步开展AIV诊断试剂如IFA检测试剂盒、ELISA检测试... 相似文献
3.
新城疫病毒Ⅰ系毒株通过Caspase途径诱导鸡胚成纤维细胞凋亡 总被引：1，自引：1，他引：1
应用不同Caspases抑制剂研究了新城疲病毒（NDV）Ⅰ系毒株诱导鸡胚成纤维细胞（CEF）凋亡的途径。结果，用20μmol／L的Z—VAD．fmk、Z—IETD．fmk和Z—LEHD．fmk分别处理CEF后，均能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡；而用20μmol／L的Z—DEVD．fmk和Z—AEVD．fmk分别处理CEF,则不能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡。由此表明，NDVⅠ系毒株能通过Caspase依赖性途径诱导CEF凋亡，其中Caspase-8和Caspase-9在凋亡中发挥重要作用，而Caspase-3和Caspase-10在凋亡中不发挥作用。 相似文献
4.
测定了表面活性素(Surfactin)的体外抗新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)作用,并对其可能的机理进行了初步的探讨.结果表明,生物表面活性素对鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEF)的TD50和TD0分别为62.5、16.125 mg/L;对猪肾(Porcine kidney,PK-15)细胞的TD50和TD0分别为31.25、4.03 mg/L;对NDV LaSota株、PRV株所致细胞病变效应有明显的抑制作用,可使细胞存活率显著升高;表面活性素可以直接作用于NDV LaSota株、PRV株,具有一定的抗病毒作用;同时还具有一定的预防NDV LaSota株感染及抑制其复制的作用.但对PRV病毒作用不显著.其抗病毒效果和相应的阳性对照抗病毒药物病毒唑(Ribavirin),无环鸟苷(Acyclovir,ACV)相当,并且由于其细胞毒性较弱,可作为一种抗病毒药物进行开发研究. 相似文献
5.
SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法检测禽流感病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立检测禽流感病毒（AIV）的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR方法，根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞，收集感染6、12、24、48、72h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测，试图建立快速检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法，并与普通RT—PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明：此次建立的检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72h的AIV，对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5．33％（9／169），而普通RT—PCR方法检出率为6．51％（11／169），病毒滴定检出率为5．62（9／160）。对其他病毒（NDV、IBDV、IBV、VA）则未检测到，且整个检测过程只需4h，表明该方法特异、准确、快速。 相似文献
6.
传染性法氏囊病病毒抗原的培养提纯及其单克隆抗体的特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
在制备传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体前，首先要提纯IBDV抗原，然后才能免疫BALB/c小鼠，检测和筛选阳性孔，克隆阳性孔并制备单克隆抗体。本试验采用蔗糖密度梯度离心法和超滤膜超滤浓缩法提纯IBDV，并以纯化抗原免疫BALB/c小鼠，成功地制备出抗IBDV单克隆抗体。1 材料和方法1.1 材料IBDVD78、NDV、IBV和MDV均由哈兽研生物技术国家重点实验室提供；SPF鸡胚，购自黑龙江省生物制品一厂。1.2 鸡胚成纤维原代细胞制备按Hanson等描述方法制备鸡胚成纤维细胞。1.3 病毒繁殖将IBDVD78以0.2％的剂量接种在已长成单层的鸡… 相似文献
7.
马立克氏病病毒（MDV）被膜蛋白VP22被证实能在细胞间高效转导,为了进一步证明VP22能够作为蛋白转运的载体,将4种不同的异源蛋白与MDV1型（MDV-1）CV1988／Rispens株VP22蛋白融合表达,通过观察这些融合蛋白的细胞定位以及它们的细胞间扩散能力来研究VP22转运蛋白的情况。结果发现,禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）、牛-γ干扰素（BoIFN-γ）及新城疫病毒（NDV）F蛋白能够被MDV-1VP22转运,而鸡法氏囊病病毒（IBDV）蛋白VP2不能被MDV-1VP22转运,上述结果说明MDV-1 VP22蛋白能够作为蛋白转运的载体,但对所转运的蛋白具有选择性。 相似文献
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鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用 总被引：1，自引：3，他引：1
对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒（AIV）分离株和鸭新城疫病毒（NDV）YH99V分离株，通过设计特异性引物和优化体系反应条件，建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT—PCR方法和多重RT—PCR方法，AIV的扩增片段大小为483bp，NDV的扩增片段为310bp，电泳快速，易于区分。敏感性试验表明，该方法比HA敏感100倍以上；对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示，多重RT—PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明，该方法能有效鉴别AIv和／或NDV单独感染或混合感染，阳性检出率明显高于HA方法。 相似文献
9.
抗新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析 总被引：3，自引：0，他引：3
以蔗糖反透析浓缩及Sephadex G-200层析纯化F48E8和LaSota新城疫病毒(NDV)，取纯化的病毒液免疫接种BALB／c小鼠，将小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合，经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT)培养基选择，间接ELISA检测，有限稀释法克隆，筛选出了3株杂交瘤细胞，依次命名为1D4、1D5、16G12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80～100，并能稳定传代，其产生的单克隆抗体重链属于IgG1，轻链属于κ链；ELISA检测时仅与NDV发生特异性反应，而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应，应用这些单克隆抗体对NDV分离株进行了分群研究。 相似文献
10.
中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响 总被引：11，自引：0，他引：11
将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。 相似文献
11.
Twenty-six samples known to contain infectious bursal disease virus (IBDV) were examined by virus-isolation attempts on ovine kidney (OK) cell line, Vero cell line, and chicken embryo fibroblast (CEF) cultures. Virus was isolated from two of 26 samples, three of 26 samples, and three of 25 samples on OK, Vero, and CEF cultures, respectively. However, in contrast to IBDV replication in Vero and CEF cultures, isolated virus was unable to induce serially sustained cytopathic effects (CPE) during successive passages in the OK cell line, unless cell lysates were treated with chloroform between every other passage. The cytopathogenicity of the untreated virus passaged in OK cells was revived and maintained upon passage in Vero cells. An initial single passage of laboratory or field material in OK cells followed by further passages in Vero cells resulted in virus isolation from six of 26 samples, which was better virus recovery than when either cell line was used alone or when CEF cultures were used. Twenty of the 26 test samples were originally positive when examined by nucleic acid hybridization with radiolabeled IBDV cDNA, indicating that some of the samples that were negative upon virus isolation using OK and Vero cells may have contained inactivated virus. 相似文献
12.
采用聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和PMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA.rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA. 相似文献
13.
本试验旨在研究蜂胶黄酮对宿主细胞抗病毒能力的影响。首先采用MTT法测定蜂胶黄酮对宿主鸡胚成纤维细胞（CEF）和PK-15细胞的安全浓度;然后将蜂胶黄酮从最大安全浓度250 μg/mL开始倍比稀释至15.6 μg/mL共5个浓度,将蜂胶黄酮分别与新城疫病毒（NDV）、鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）及猪细小病毒（PPV）一起加到相应长成单层的宿主细胞CEF或PK-15中,在感染后24、48和72 h分别用MTT法测定宿主细胞的存活率,代表蜂胶黄酮提高宿主细胞抗病毒能力的指标。结果显示,蜂胶黄酮可显著提高宿主细胞抗病毒能力,这种活性与其剂量正相关,即剂量越大作用越好。蜂胶黄酮提高宿主细胞抗有囊膜病毒NDV和TGEV作用主要体现在病毒感染的前期,而提高宿主细胞抗无囊膜病毒IBDV和PPV作用主要体现在病毒感染的后期。提示蜂胶黄酮可用于NDV和TGEV的预防及IBDV和PPV的治疗。 相似文献
14.
This experiment was conducted to study the effects of propolis flavone (PF) on antiviral ability of host cell.First,the maximal safe concentration of PF to CEF and PK-15 was determined by MTT method.Then PF was diluted to five concentrations (from 250 to 15.6 μg/mL) with maintenance medium and acceded to foster system of CEF or PK-15 with NDV,IBDV,TGEV and PPV,respectively,and the cell viability was observed by MTT method at 24,48 and 72 h after infection as the index of high antiviral ability of host cell.The results showed that PF could promote the antiviral ability of host cell.And the effects were related to PF concentration,as the concentration increased,the effects were better.The antiviral activity of PF to NDV and TGEV with envelope in host cell existed in infectious earlier stage,while for IBDV and PPV without envelope,the activity appeared in infectious later stage.The results indicated that the antiviral effect period and mechanism of propolis flavone was different for different viruses,propolis flavone could be use for the prevention of NDV and TGEV,and for the treatment of IBDV and PPV. 相似文献
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Serum samples from 163 slaughter-age ostriches (Struthio camelus) in Ohio and Indiana were tested for antibodies to avian influenza virus (AIV), Newcastle disease virus (NDV), paramyxovirus (PMV) 2, PMV3, PMV7, infectious bursal disease virus (IBDV), Bordetella avium, Mycoplasma synoviae, Mycoplasma gallisepticum, Ornithobacterium rhinotracheale, Salmonella pullorum, Salmonella gallinarum, and Salmonella typhimurium. One ostrich had antibodies to AIV H5N9, 57% of the ostriches had antibodies to NDV, four ostriches had antibodies to both NDV and PMV2, and one ostrich had antibodies to NDV, PMV2, PMV3, and PMV7. None of the ostriches had antibodies to IBDV, B. avium, M. synoviae, M. gallisepticum, O. rhinotracheale, S. pullorum, S. gallinarum, and S. typhimurium. This is the first report of antibodies to avian influenza and PMV7 in ostriches in the United States. 相似文献
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几种主要禽疫病诊断基因芯片的制备及初步应用 总被引：5，自引：2，他引：5
进行了几种主要禽疫病诊断基因芯片制备及其初步应用研究。试验分别设计和克隆鉴定了NDV、IBV、AIV和IBDV的靶基因重组质粒。以克隆的靶基因重组质粒为模板。分别进行PCR扩增制备靶基因并纯化，以基因芯片点样仪将制备的靶基因点制在氨基化的基片上，经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后，成功制备了NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片。试验应用CY3荧光标记制备的探针进行芯片的检验，结果表明制备的NDV-IBV-AIV-IBDV诊断基因芯片质量好，可对NDV、IBV、AIV和IBDV进行诊断检测，具有检测灵敏性好，特异性高和芯片可重复检测的优点。试验对30个临床样品进行初步应用检测，结果表明该诊断基因芯片技术与RT—PCR检测技术检出率基本一致，并具有同步诊断检测多种疫病的优点。 相似文献
17.
Deng M Long L Xiao X Wu Z Zhang F Zhang Y Zheng X Xin X Wang Q Wu D 《Veterinary immunology and immunopathology》2011,141(3-4):183-189
Detecting avian influenza virus (AIV) and Newcastle disease virus (NDV) at low concentrations from tracheal and cloacal swabs of avian influenza- and Newcastle disease-infected poultry was carried out using a highly sensitive immunological-polymerase chain reaction (immuno-PCR) method. Magnetic gold particles were pre-coated with a capture antibody, either a monoclonal anti-AIV/H5 or monoclonal anti-NDV/F and viruses serially diluted ten-fold from 10(2) to 10(-5)EID(50)/ml. A biotinylated detection antibody bound to the viral antigen was then linked via a streptavidin bridge to biotinylated reporter DNA. After extensive washing, reporter DNA was released by denaturation, transferred to PCR tubes, amplified, electrophoresed and visualized. An optimized immuno-PCR method was able to detect as little as 10(-4)EID(50)/ml AIV and NDV. To further evaluate the specificity and the clinical application of this IPCR assay for AIV H5N1 and NDV, the tracheal swab specimens, taken from chickens which were infected with H5N1/AIV, H9N2/AIV, H7N2/AIV, NDV, IBDV, IBV/H(120), were detected by IPCR. Our data demonstrated that this monoclonal antibody-based immuno-PCR method provides a platform capable of rapid screening of clinical samples for trace levels of AIV H5 and NDV in one step. 相似文献
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为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。 相似文献
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腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒强毒株的培育 总被引：3，自引：0，他引：3
用腺胃病变形鸡传染性支气管炎病毒分离株IBV－D971株接种1日龄SPF鸡，连续传10年代，培育出了腺胃病变型鸡传染性支气管炎强毒株IBV－D971J株。IBV－D971J10对SPF鸡胚的致病力为10^-6.45ELD50/0.2mL,对1日龄SPF鸡的致病力为10^-1.5LD50/1mL，从死亡鸡的心，肝，脾，肺，肾，腺胃，肌胃，法氏囊等均能分离到IBV，IBV－D971J10不含鸡新城疫，禽流感，鸡马立克氏病，鸡传染性法氏囊炎，网状内皮组绢增殖病等外源病毒，对SPF鸡可引起典型的腺胃炎，肌胃炎，间质性肾炎等是变化。 相似文献