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[目的]了解某地区液态奶中阪崎肠杆菌的污染情况,为政府加强对液态奶的管理提科学依据。[方法]采用改进方法和PCR法检测液态奶。PCR适宜反应体系为：6μl 10×PCR buffer,4μl dNTPs混合物,2．5Mg^2＋ μl（25mM）,2μl 10μmol正向引物,2山10μmol反向引物,0．25μl（5U／μl）Taq,23．25μl水,总反应体系为50μl;其适宜的PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动,95℃预变性5min;变性95℃ 1min,退火61℃0．5min进行35个循环。PCR反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果,检出率为2．4％,同时对阪崎肠杆菌的毒力进行了研究,所筛出的4株阪崎肠杆菌均导致受试昆明小鼠死亡。[结果]从167份液态奶样品中检出4株阪崎肠杆菌。 相似文献
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[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。 相似文献
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《安徽农业科学》2012,40(10)
[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法.[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值.[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝.[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测. 相似文献
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《安徽农学通报》2020,(15)
人类感染阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)会引起一系列疾病,而忧遁草(Clinacanthus nutans CN)是一种具有消炎抑菌作用的天然药用植物。为了量化评估忧遁草对阪崎肠杆菌的抑制作用,以阪崎肠杆菌为研究对象,探究在阪崎肠杆菌最适生长温度37℃下,不同浓度的忧遁草提取物(25、50、75、100mg/mL)对在BHI中生长的阪崎肠杆菌的影响。结果表明,添加浓度为10%的体系中,忧遁草对延长阪崎肠杆菌的延滞期最长时常为4.116h,阪崎肠杆菌生长速率为1.094,而空白对照组分别为1.253h、1.726。可见,忧遁草对阪崎肠杆菌具有较好的抑制作用,且浓度越高,抑制效果越好。 相似文献
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[目的]建立一种简便快速检测迟钝爱德华氏菌的斑点免疫金染色诊断方法。[方法]选用硝酸纤维素膜作固相载体,以胶体金标记羊抗兔IgG,根据棋盘试验,确定Et免疫血清和金标抗体最佳工作浓度,以出现明显清晰斑点者判定为阳性。[结果]迟钝爱德华氏菌呈阳性,温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌、鳗弧菌、腐败希瓦氏菌、产碱普罗威斯登菌、阪崎肠杆菌和大肠杆菌均呈阴性。[结论]Dot—IGS方法简便、特异、快速、结果直观,便于在基层推广使用。 相似文献
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为了建立特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法,采用分子生物学方法,根据GenBank数据库中该细菌的outL基因,进行了多序列比对和保守区域确定。根据其保守序列,在线设计和筛选了一套LAMP引物。温度优化及特异性和敏感性验证后建立了检测该病菌的LAMP检测方法,并对青藏高原放牧牛、羊临床粪便样品进行了检测。结果表明,LAMP检测方法的最适温度为63℃;检测其与大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及蜡样芽胞杆菌无交叉反应;检测下限为100 fg目的基因;利用建立的方法检测了208份放牧牦牛、藏羊粪便DNA样品,共检测到26份阳性样品,阳性率为12.5%。这表明成功建立了一种检测该病的特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法。 相似文献
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《山西农业大学学报(自然科学版)》2016,(7)
[目的]本研究基于Fragment Analyzer全自动毛细管电泳荧光检测系统,以期建立一个最优的糜子GenicSSR分子标记PCR反应体系。[方法]试验采用L16(44)正交设计,设计了Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs和引物的不同浓度组合,并用Pragment Analyzer全自动毛细管电泳荧光检测系统检测PCR产物。[结果]Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物浓度对PCR反应效应为:Mg2+引物dNTPsTaq DNA聚合酶。通过正交实验设计确立了糜子Genic-SSR荧光PCR检测体系的最佳反应组分:20μL的反应体系中包含0.2 mmol·L-1的dNTPs,0.2μmol·L-1引物,1.5mmol·L-1的Mg2+和0.5U的Taq DNA聚合酶。[结论]本研究建立了糜子的Genic-SSR分子标记的最佳荧光PCR反应体系,为糜子种质资源遗传多样性分析中分子标记开发、验证和辅助育种奠定了基础。 相似文献
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[目的]制定危害分析与关键控制点(HACCP)管理体系,为有效预防、控制或降低冷冻调理集体食品生产过程中可能出现的危害,从而提高产品的质量,确保舰艇出航食品安全卫生。[方法]依据HACCP基本原理以及国家食品企业通用卫生标准、食品厂卫生规范、调理食品生产工艺和规范,对冷冻调理集体食品生产过程中的潜在危害进行系统分析。[结果]建立具体的控制措施,确定原料验收、烹调、真空包装和金属探测4个关键控制点(CCP),制定HACCP计划实施有效的监控。[结论]HACCP质量保障体系在舰艇食品供应站冷冻调理集体食品生产中的应用,能有效保障产品安全卫生,保障舰艇出航饮食质量。 相似文献
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[目的]建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法。[方法]通过制备特异性强的单克隆抗体,采用间接竞争ELISA法建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法,并研制出对动物性食品中呋喃西林代谢物残留检测的试剂盒。[结果]该试剂盒标准曲线的IC50值为0.267 7μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本加标回收率范围为79.5%～95.6%,变异系数为7.6%～9.7%。在交叉反应试验中,对呋喃西林的交叉反应率为25%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,表明该方法具有很强的特异性。[结论]该方法灵敏度、准确度、精密度均较高,能满足兽药残留的检测要求,且检测时间短(45 min),样本前处理简单、检测成本低,适合于大量样本中呋喃西林代谢物残留检测的快速筛选。 相似文献
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液相-原子荧光光谱法测定食品中无机砷 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]准确测定食品中的无机砷。[方法]采用液相色谱-原子荧光光谱法(LC-AFS)以及砷形态快速分析Princen柱和在线氢化物反应系统对食品中的砷进行检测。[结果]该方法对检测质量浓度为5μg/L的As(III)和As(V)标样,系统具有更高的检测灵敏度,检出限可以分别达0.98和2.88μg/L。该方法在5.0~100.0μg/L范围内的无机砷检测具有良好的线性,相关系数均可为0.999以上,加标量为10μg/L的回收率在95%以上。[结论]该方法是测定食品中无机砷含量的一种高效、低消耗的方法,在实际样品的无机砷检测中也表现出良好的效果,非常适合无机砷的检测。 相似文献
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[目的]提高动物源性成分检测效率,建立PCR-核酸试纸条快速检测技术体系。[方法]针对物种特异性DNA序列,设计并标记引物;建立并优化PCR反应体系;利用通用核酸试纸条进行结果判读。[结果]试验表明,PCR-核酸试纸条特异性高;绝对灵敏度为0.001 3 ng/μL,混合样品,实际灵敏度为0.01%;加工处理样品,实际灵敏度为0.1%;最低检测限检出率为100%,稳定性良好。[结论]综上,PCR-核酸试纸条方法是一种既有PCR反应的高灵敏度,又具有免疫学检测的特异性好的特点,同时操作简便的快速检测方法。 相似文献
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[目的]建立可同时测定豆类食品中几种有害重金属元素的分析方法。[方法]利用硝酸-过氧化氢体系高压消解豆类样品,建立了电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)同时测定豆类中Pb、Cd、Tl、As、Cr、Ni 6种重金属元素的分析方法。应用碰撞反应池技术(动能甄别)消除多原子离子等质谱干扰,以Ge、In、Bi和Sc为内标元素校正质谱分析中的基体效应。[结果]在最佳的试验条件下,各元素的检出限在0.11~18.40μg/kg,相关系数均大于0.999。方法应用于国家有证标准物质(GBW10013)测定,测定值均在参考值范围内。[结论]该研究建立的方法灵敏度高、检出限低、准确度高,且操作简单快速,可应用于豆类食品中重金属元素的批量分析。 相似文献
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[目的]建立食品中罗丹明B的高效液相色谱-紫外光检测法。[方法]将样品中的罗丹明B用丙酮、正己烷提取,经过氧化铝固相萃取柱净化浓缩后,利用高效液相色谱紫外可见光检测器检测其含量。[结果]罗丹明B在0.005～2.000 mg/kg浓度范围内,峰面积与浓度呈良好线性关系,相关系数为0.999 98;方法的定量检测限为0.005 mg/kg,且平均回收率高。[结论]该方法适用于食品中罗丹明B的测定,并具有快速、准确、灵敏度高的优点。 相似文献
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双抗夹心酶联免疫分析法检测食品中鸡蛋过敏原 总被引：3，自引：0，他引：3
[目的]建立食品中鸡蛋过敏原的酶联免疫检测方法。[方法]以卵白蛋白为检测对象,分别制备抗卵白蛋白的多克隆和单克隆抗体。将单克隆抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆抗体为二抗构建卵白蛋白的双抗夹心ELISA方法。[结果]该方法的IC50为260 ng/ml,检出限为10 ng/ml,样品的添加回收率为84.2%～89.8%,相对标准偏差小于10%。[结论]该试验建立的分析方法稳定可靠,能满足食品中鸡蛋过敏原准确、快速的检测需要。 相似文献
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[目的]采用HPLC-DAD法测定馒头中合成色素胭脂红、诱惑红的含量,分析评定胭脂红、诱惑红的不确定度.[方法]通过HPLC-DAD法测定馒头中胭脂红、诱惑红的含量方法建立数学模型,对各个不确定度因素进行评估、计算,由此计算合成不确定度,最终给出测量结果在95％置信区间下的扩展不确定度.[结果]试验测定的胭脂红含量测定结果为（4.13±0.32） mg/kg;诱惑红含量测定结果为（6.19±0.40） mg/kg.[结论]研究可为食品中色素检测分析应该采取的针对性措施提供参考依据. 相似文献