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1.
【目的】优化大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存方法。【方法】以解冻后的精子活力为参数,调控试验条件,筛选最佳精液稀释液和最佳抗冻剂,优化抗冻剂体积分数和精液稀释比例。【结果】5种稀释液中,稀释液Ⅳ效果最好,冻精活力为35.5(±2.7)%;甘油(GLY)、甲醇(METH)、二甲基亚砜(DMSO)等3种抗冻剂中,5%(V/V)DMSO处理的冻精活力为40.7(±2.5)%,显著高于5%GLY和METH处理的冻精活力;优化DMSO的体积分数发现,10%终浓度的DMSO对精液保护效果较好,冻精活力为54.6(±1.5)%;优化稀释液Ⅳ与精液稀释比例发现,稀释液Ⅳ与精液以3∶1体积比稀释时能达到良好效果,冻精活力可达65.4(±2.3)%。【结论】精液稀释液Ⅳ与精液体积比为3∶1,终浓度10% DMSO为抗冻剂,对大鳞副泥鳅精液超低温冷冻保存的效果最佳。 相似文献
2.
对褐牙鲆精子部分生理特性进行了研究,结果表明,褐牙鲆精浆pH值为(7.90±0.26),精子密度为(1.03×1010)/mL,精浆渗透压为(308.50±7.85) m Osm/kg,K+在精浆中的浓度为 (27±3) mmol/L,Na+在精浆中的浓度为(71±5) mmol/L.对不同盐度和pH与褐牙鲆精子活力和寿命的关系进行了研究,结果表明,在盐度为35,pH为8.0时,精子的活力最高,分别达到(93.33±5.67)%和(89±3.33)%,与其生活环境相适应;褐牙鲆精子寿命为(23±2) min,与已报道其它海水鱼精子寿命相近.分别采用室温(25 ℃)和低温(4 ℃)保存精子,发现精子在室温条件下,可存活4 d,在低温条件下可以存活7 d,证明低温可有效延长精子存活时间.另外,分别采用4种不同稀释液(S1、S2、S3、S4)与4种不同抗冻剂(DMSO、EG、Gly、PG)配制成冷冻保存液对褐牙鲆精子进行超低温冷冻保存研究.结果表明,以S3液作为稀释液,16%的DMSO作为抗冻剂,利用快速降温法对精子进行超低温冷冻保存,38 ℃水浴快速解冻,解冻后的精子获得最高的活力为(84±3.67)%,此方法可用于褐牙鲆精子的长期保存. 相似文献
3.
采用试验生态——显微观察方法对翘嘴鲌精子的生理特性进行了研究,并用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,筛选出适宜的稀释液与抗冻剂配方。结果表明,翘嘴鲌适宜的盐度范围为0～0.4%,pH值为5.5～8.0时,精子激活率较高,其中pH值为5.5时,精子运动时间与寿命最长;翘嘴鲌精子在4℃条件下保存84 h仍有48.33%的激活率,在25℃条件下保存84 h时精子死亡。以D-15为稀释液、10%乙二醇(EG)为抗冻剂,采用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,解冻后精子活力最高。 相似文献
4.
美洲鲥鱼精子超低温冷冻保存技术初探 总被引：1，自引：0，他引：1
对美洲鲥鱼精液的超低温冷冻保存技术进行了研究。以解冻后精子的活力为参数,探讨了鱼用任氏液为稀释液、不同体积分数甲醇为保护剂、不同冻前平衡时间以及不同精液稀释比对美洲鲥鱼精液进行超低温冷冻保存的保护效果。结果显示,以鱼用任氏液和体积分数为10%的甲醇组成抗冻保护剂,精液稀释比(精液与抗冻保护剂的体积比)为1∶3,于4℃冰箱平衡20 min,液氮面上方6 cm处平衡10 min,然后在液氮面上平衡5 min,最后投入液氮中的保存方式,保存60 d后检查精子活力,存活率可达80%。研究结果为保护淡水鱼类的种质资源提供了理论基础。 相似文献
5.
本文首次报导了一种新的抗冻剂——N-N-二甲基甲酰胺(Dimethyl Formamide，DMF)对淡水鱼类精液超低温冷冻保存具有明显效果，冻精的受精效果优于二甲亚砜(DMSO)。团头鲂、鲤、草鱼、鲢、鳙使用139／ODMF抗冻剂，精液液氮保存3-4周，受精率分别为76%、54．03％、68．6％、37．9％和40．60%，而用13%DMSO作为抗冻剂时，则分别为69．1％、42．6％、67．6％、19．4％和37．4％。结果表明10-159／DMF作为抗冻剂，含0．5％NaCl的稀释液稀释精液，精液与稀释液按1：4比例混合冷冻；2％NaCl作为激活剂，以10倍体积激活剂稀释解冻精液进行授精为宜。 相似文献
6.
一种新抗冻剂DMF在淡水鱼类精液超低温保存上的应用 总被引：2，自引：1，他引：2
本文首次报导了一种新的抗冻剂——N-N-二甲基甲酰胺(DimethylFormamide,DMF)对淡水鱼类精液超低温冷冻保存具有明显效果,冻精的受精效果优于二甲亚砜(DMSO)。团头鲂、鲤、草鱼、鲢、鳙使用13%DMF抗冻剂,精液液氮保存3—4周,受精率分别为76%、54.03%、68.6%、37.9%和40.60%,而用13%DMSO作为抗冻剂时,则分别为69.1%、42.6%、67.6%、19.4%和37.4%。结果表明10—15%DMF作为抗冻剂,含0.5%NaCl的稀释液稀释精液,精液与稀释液按1:4比例混合冷冻;2%NaCl作为激活剂,以10倍体积激活剂稀释解冻精液进行授精为宜。 相似文献
7.
本文首次报导了一种新的抗冻剂——N-N-二甲基甲酰胺(Dimethyl Formamide，DMF)对淡水鱼类精液超低温冷冻保存具有明显效果，冻精的受精效果优于二甲亚砜(DMSO)。团头鲂、鲤、草鱼、鲢、鳙使用139／ODMF抗冻剂，精液液氮保存3-4周，受精率分别为76%、54．03％、68．6％、37．9％和40．60%，而用13%DMSO作为抗冻剂时，则分别为69．1％、42．6％、67．6％、19．4％和37．4％。结果表明10-159／DMF作为抗冻剂，含0．5％NaCl的稀释液稀释精液，精液与稀释液按1：4比例混合冷冻；2％NaCl作为激活剂，以10倍体积激活剂稀释解冻精液进行授精为宜。 相似文献
8.
不同抗冻剂及初冻和解冻温度对鸡精液冷冻保存的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】研究对不同抗冻剂及初冻和解冻温度在鸡精液冷冻保存中的效果.【方法】以‘海兰褐’种公鸡为试验材料,利用液氮制作颗粒冷冻精液,研究不同抗冻剂及初冻和解冻温度对鸡精液冻后活率、复苏率及存活时间的影响,并筛选出最佳的抗冻剂种类、浓度和初冻、解冻温度组合.【结果】3种抗冻剂组合的冷冻效果优于单一及两种抗冻剂组合,且GL 8%+DMA 6%+EG 6%组合的冻后活率、精子复苏率最高,分别为0.46和57.50%,为最佳抗冻剂组合;在此基础上,筛选出最佳初冻和解冻温度组合为-140℃和50℃,其冻后活率和复苏率最高,分别达到0.57和71.40%,并在15～25℃条件下精子存活时间为160min;在鸡精液冷冻保存中快速冷冻要对应快速解冻,慢速冷冻要对应慢速解冻,且前者精液冷冻保存效果较好.【结论】筛选出了最佳的抗冻剂组合及初冻和解冻温度,发现快速冷冻和解冻的鸡精液保存效果较好. 相似文献
9.
探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。 相似文献
10.
筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%. 相似文献
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为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。 相似文献
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试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。 相似文献
13.
为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。 相似文献
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【目的】建立一种南美白对虾精子超低温冷冻保存方法,为南美白对虾优良种质的长期保存奠定基础。【方法】利用胰蛋白酶消化法获得游离的南美白对虾精子,分别使用灭菌天然海水、无钙人工海水、3％等渗NaCl溶液和0．9％生理盐水作为基础液,并以不同浓度的二甲基亚砜（DMSO）、甘油、甲醇及其与海藻糖的混合溶液作为抗冻剂,在4种不同降温程序下超低温冷冻保存南美白对虾精子,然后在不同的温度下复苏冷冻精子,以伊红-苯胺黑染色法检测精子存活率。【结果】使用1．00g／L胰蛋白酶消化精荚5min能获得大量游离的南美白对虾精子,以灭菌天然海水为基础液,以10％DMSO和0．25mol／L海藻糖为抗冻剂,在P．1降温程序（4℃平衡30min,以．5℃／min的速率降至-20℃;-20℃平衡5min,以-10℃／min的速率降至-80℃;-80℃平衡5min,然后置于液氮中保存）下超低温冷冻保存南美白对虾精子,经37℃水浴复苏后精子存活率最高。【结论】建立的南美白对虾精子超低温冷冻保存方法具有可行性,为南美白对虾精子冷冻保存库的建立提供了技术支撑。 相似文献
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为了提高犬的繁殖力,建立完善的犬人工授精体系和保存优秀的犬精子,本研究对8只犬进行了采精和精液的超低温冷冻保存试验,并对犬的精液超低温冷冻保存液进行了系统的筛选。结果表明,渗透压450mOsm/L的配方V(葡萄糖1.98g、蔗糖3.42g、柠檬酸钠0.59g、谷氨酸钠0.75g、三羟甲基氨基甲烷1.21g、维生素B_610mL、维生素B_(12)10mL、卵黄20mL和甘油8mL)对犬精液冷冻保存的效果最佳,解冻后精子的活率为0.58,畸形率为17.2%,满足输精和进行超低温冷冻保存精子的要求。 相似文献
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猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应 总被引：1，自引：0，他引：1
采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。 相似文献
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人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂 相似文献
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马氏珠母贝精子低温保存主要影响因素的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用二甲基亚砜(DMSO)和甘油作为抗冻剂,以海水或体液等为基础液,配制体积分数为6％、8％、10％和12％的抗冻保护液．将马氏珠母贝精液和抗冻保护液以1：2、1：5、1：10和1：20(体积比)混合后,置4℃中平衡30和60min,再于-18℃中冷冻4、24和72h,解冻后观察精子的活动状态和受精率．结果表明,抗冻剂种类、体积分数以及精液与保护液的比例对精子的活动状态有很大的影响;4℃的平衡时间对精子的存活率影响不显著,但对受精率却有明显的影响．在-18℃时,精液和抗冻保护液体积比1：20,DMSO体积分数为10％和12％的两组保存效果较好．精子存活率随着保存时间的增长而降低,但基础液的类型对精子受精率没有明显影响． 相似文献
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精液在冷冻保存过程中易受氧化应激的影响,从而导致精液品质下降,丝胶蛋白具有抗氧化能力,可抑制由自由基产生的脂质过氧化。为研究精液稀释液中添加丝胶蛋白对牛精液冷冻效果的影响,采集4头公牛精液,将其分成5等份,在Optidyl稀释液中添加不同浓度丝胶蛋白(0,0.25%,0.5%,1.0%,2.0%),精液稀释后冷冻保存,使用计算机辅助精子分析系统检测解冻后精子的活力及运动参数,低渗肿胀试验检测质膜完整率,考马斯亮蓝染色法检测顶体完整率,分光光度计检测精浆中的过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)等氧化应激指标。结果表明：与对照组相比,稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可显著提高解冻后牛精子的活力、运动参数、顶体完整率、质膜完整率及SOD含量,并显著降低ROS和MDA水平(P<0.05)。这表明在Optidyl稀释液中添加0.5%的丝胶蛋白可保护牛精子免受氧化应激损伤,有效提高冷冻后精液品质。 相似文献