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1.
猪α干扰素具有抗病毒作用,临床上具有广阔的应用前景.为获得重组猪α干扰素,本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪α干扰素基因插入供体质粒pFastBac~(TM) Ⅰ多克隆位点,置于pH启动子控制下,在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化.将重组转移栽体质粒转化DH10感受态细胞获得重组穿梭质粒rBacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blotting证明在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得表达.镍亲和层析柱纯化的重组蛋白经SDS-PAGE电泳相对分子质量为19 000.通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制猪水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测其抗病毒活性为9.67×10~4 U/mL.昆虫培养上清及细胞裂解液经2~8稀释在Mare-145细胞上能够抑制猪蓝耳病病毒增殖.从而为进一步作为抗病毒药物应用于猪疫病的防治研究奠定了基础. 相似文献
2.
两种盐酸多西环素注射液在猪体内的药代动力学研究 总被引：1，自引：1，他引：0
研究制备了两种稳定的20％盐酸多西环素注射液,按10 mg/kg的剂量分别给猪肌肉注射,观察两个制剂在猪体内单剂量肌注的药代动力学特征.结果表明,多西环素在猪体内的药物动力学特征均符合一级吸收二室开放模型,其主要的药物代谢动力学参数:消除半衰期(T1/2β)分别为(3.246±1.04)和(9.631±1.12)h,药时曲线下面积(AUC)为(10.462±0.28)和(17.525±0.14)(μg/mL)*h,达峰时间(Tpeak)及达峰浓度(Cmax)分别为(1.427±0.16)h、(1.465±0.20) μg/mL和(1.694±0.15)h、(1.058±0.09) μg/mL.其中制剂一的血药浓度在给药2h后迅速降低,为普通注射液;与制剂一相比,制剂二能够缓慢释放药物,为长效缓释盐酸多西环素注射液. 相似文献
3.
4.
干扰素(interferon, IFN)是一类具有抗病毒和免疫调节功能的细胞因子,目前已经应用于多种人和动物病毒病的预防和治疗。不同猪干扰素亚型的抗病毒活性差异较大,为了解猪IFN-α14的抗病毒活性,将猪IFN-α14基因序列进行分析,去除信号肽、优化密码子,并采用基因合成的方法合成了猪IFN-α14亚型基因,将其克隆入pCSMH原核表达载体,优化诱导条件,利用Ni琼脂糖凝胶纯化柱进行亲和层析,获得高纯度的重组猪IFN-α14蛋白,Western blot检测证明重组蛋白具有较好的特异性。用不同浓度的重组猪IFN-α14处理Vero细胞后,接种1 000 TCID50猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV),24 h收集细胞和上清,通过荧光定量检测细胞内病毒的RNA水平,同时测定细胞上清中病毒的TCID50。猪IFN-α14蛋白被成功表达并纯化,证明了10μg/L的重组猪IFN-α14干扰素能够显著抑制PEDV的复制。与本实验室前期表达纯化的猪IFN-α2、8相比,猪IFN-α14抑制P... 相似文献
5.
复方氟康唑软膏对家兔皮肤的刺激性观察 总被引：1，自引：1，他引：0
为研究复方氟康唑软膏对皮肤的刺激性,以复方制霉菌素软膏为对照药物,将8只家兔随机分为完整性皮肤试验组和破损性皮肤试验组,采用左右侧自身对比,观察复方氟康唑软膏对家兔的皮肤刺激性。结果显示,复方氟康唑软膏与复方制霉菌素软膏对完好皮肤与损伤皮肤的平均反应分值无明显差异,其中完好皮肤组家兔在给药后不同时间对两种药物的平均反应分值均低于0.5分;破损皮肤组家兔在给药后1 h和24 h对两种药物的平均反应分值均大于0.5分,但低于3.0分,给药48 h后家兔对两种药物的平均反应分值均低于0.5分。试验过程中无其他不良反应。试验表明,复方氟康唑软膏对完整皮肤无刺激性,对破损皮肤有轻度刺激性。 相似文献
6.
为了探讨复方伊维菌素乳液在动物体内的药物代谢,为兽医临床提供用药参考。试验选取7只山羊,每只山羊按0.1 mL/kg (伊维菌素0.2 mg/kg, 阿苯达唑10 mg/kg)剂量口服,给药后0.5、1、2、3、4、6、8、12、16、24、36、48、60 h颈静脉采血5 mL,分离血清,-20 ℃保存,用高效液相色谱仪检测样品血药浓度。试验结果表明,①伊维菌素在山羊体内的代谢情况为：0.5 h,0.112151 μg/mL; 第1次达峰时间为4 h, 0.302702 μg/mL;第2次达峰时间为16 h,0.258284 μg/mL;60 h,0.011118 μg/mL。②阿苯达唑在山羊体内的代谢情况为：0.5 h, 0.049285 μg/mL;第1次达峰时间为8 h,4.95283 μg/mL ;第2次达峰时间为16 h,5.694551 μg/mL;60 h,0.06434 μg/mL。复方伊维菌素中的伊维菌素和阿苯达唑在山羊体内代谢时间短,第60小时已达到很低的血药浓度。 相似文献
7.
旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×108 IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2-10.29,抗P... 相似文献
8.
目的:通过对七子白进行皮肤用药毒性试验,探讨七子白的皮肤用药安全性,为临床研究提供理论依据。方法:均采用白色Wistar大鼠,(1)皮肤急性毒性试验将30只大鼠随机分为5组,每组6只,分别为空白组、七子白完整皮肤高、低剂量组、七子白破损皮肤高、低剂量组,给药一次,观察7天。(2)皮肤刺激试验将30只大鼠随机分为5组,每组6只;分别空白组、七子白完整皮肤和破损皮肤组、阳性药物完整皮肤和破损皮肤组,单次刺激,多次刺激连续给药7天。(3)皮肤过敏试验将18只大鼠随机分为3组,每组6只,分别空白组、七子白组、阳性药物组。结果:皮肤急性毒性试验结果中大鼠未发现毒性反应;单次刺激及多次刺激结果显示,七子白对完整和破损皮肤无刺激性,刺激反应评分为0。过敏试验中,阳性药物的致敏率为100%,七子白的致敏率为0。结论:七子白无明显副作用,是一个安全有效的皮肤美白外用方。 相似文献
9.
《中国畜牧兽医》2010,(5)
细胞因子,尤其是α-干扰素对控制流感病毒感染起重要作用。为了研究α-干扰素对控制流感的作用,用猪α-干扰素中和单克隆抗体K9来建立猪流感病毒感染模型。首先,确定α-干扰素中和单克隆抗体最佳剂量和给药途径,基于上述结果来研究单克隆抗体对猪流感病毒感染的作用。猪气管内接种106.0EID50A/Swine/Belgium/1/98(H1N1)病毒,接毒后18h,气管内和腹腔内注射高剂量α-干扰素中和单克隆抗体和对照抗体,分别于接种后0、24、30、48、72h对动物实施安乐死。在24、30h注射单克隆抗体K9的动物支气管肺泡灌洗液中α-干扰素水平被明显抑制,这与IL-6、IL-12水平降低一致。对照单克隆抗体处理组中α-干扰素和IL-1水平未受影响。重要的是α-干扰素中和单克隆抗体处理的动物临床症状出现和高峰要延迟24h,同时伴随α-干扰素的抑制,但对病毒复制和肺部病变无明显的作用。结果表明,在流感病毒症状中,α-干扰素对IL-6、IL-12诱导及3种细胞因子起重要作用。 相似文献
10.
为了表达猪重组α干扰素(rIFN-α)并对它的生物学特性进行研究,本研究采用RT-PCR从猪脾淋巴细胞中扩增出猪IFN-α基因,以pPROExHTa为载体构建了表达重组质粒polFN-α,转化宿主菌BL21,经IPTG诱导猪rIFN-α获得了表达,其分子量约22 ku.该重组蛋白以包涵体形式存在,其表达量占总菌体蛋白7%.粟用Ni-Ni金属螯合亲和层析方法纯化,其纯度达到80%以上,包涵体经复性后,在WISH/VSV系统上,采用细胞病变抑制法测定表明,其稀释度在小于1:103时才有抗病毒活性.本实验表达的猪rIFN-α具有一定的抗病毒活性,为研究具有广谱抗病毒效应的猪干扰素具有重要意义. 相似文献
11.
研究在已有的新城疫病毒La Sota株反向遗传系统的基础上,利用新城疫病毒La Sota株作为表达载体,构建表达牛α干扰素(bovine interferon α)完整开放阅读框的全基因组质粒pFL-BoIFN α,转染BHK-21细胞获得表达牛α干扰素重组新城疫病毒.采用RT-PCR方法检测,证实收获的鸡胚尿囊液内的重组病毒含有相应外源基因.将重组病毒尿囊液经紫外线照射灭活新城疫病毒,利用表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒(VSV-EGFP)在牛肾细胞(MDBK)上测定rL-BoIFN α抗病毒活性,证实表达牛干扰素的重组新城疫病毒尿囊液能有效抑制VSV-EGFP在牛肾细胞上的复制,rL-BoIFNα接种SPF鸡胚所收尿囊液抗病毒活性高达2× 107 IU/mL.结果表明: 牛α干扰素在重组新城疫病毒rL-BoIFNα接种的SPF鸡胚尿囊液中获得良好表达,并具有高效而稳定的抗病毒活性. 相似文献
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银杏叶多糖对雏鸡肿瘤坏死因子α和γ干扰素产生的影响 总被引：6，自引：0，他引：6
余建国 《中国预防兽医学报》2006,28(5):596-598
体外给1日龄雏鸡腹腔注射马立克氏病强毒株（0．2mL／只），而后注射不同浓度银杏多糖悬液，最后一次给药后48h，采雏鸡脾组织，制备淋巴细胞。生物法测肿瘤坏死因子α（TNFα），ELISA测γ干扰素（IFNT）。结果表明，一定浓度的银杏多糖能提高雏鸡脾淋巴细胞培养上清中TNFα活性，且在一定范围内呈剂量依赖关系。 相似文献
13.
《中国预防兽医学报》2019,(7)
为在生菜中瞬时表达从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β和IFN-β,检测其抗猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的活性,本实验采用从江香猪源干扰素特异引物分别从p UCm-CJpoIFN-α2、p UCm-CJpoIFN-α2β、p UCm-CJpoIFN-β质粒中扩增IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β基因序列,分别克隆至植物表达载体p BI121中,构建含不同干扰素的重组质粒。将各质粒分别转化根癌农杆菌LBA4404,采用真空渗透法将携带重组质粒的根癌农杆菌感染生菜,经用GUS染色和ELISA方法检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用q PCR方法和细胞病变抑制试验检测生菜中表达的从江香猪源干扰素蛋白抗PRRSV的活性。结果显示:本实验构建了含从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β的植物表达载体PBI121-IFN-α2、PBI121-IFN-α2β、PBI121-IFN-β;GUS染色和ELISA检测结果显示从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中实现了瞬时表达;q PCR检测结果显示生菜中瞬时表达的从江香猪源干扰素蛋白在Marc145细胞中对PRRSV的复制有明显抑制作用;生菜中表达的从江香猪源IFN-α2、IFN-β、IFN-α2β分别经4~7、4~9、4~7稀释在Marc145细胞中仍然能够抑制100 TCID_(50)PRRSV的致细胞病变作用。本实验实现从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中的瞬时表达且表达蛋白具有较强抑制PRRSV的复制作用,本研究为从江香猪源干扰素抗PRRSV新复合型药物蛋白的开发利用提供参考依据。 相似文献
14.
阿莫西林钠在猪体内的生物利用度及药动学研究 总被引：4，自引：0，他引：4
1 4头健康杂种猪 ,随机平均分为两组 ,按随机交叉试验设计 ,进行静注及内服阿莫西林钠 (1 0mg/kg)的药动学研究 ,以及肌注阿莫西林钠及阿莫西林钠长效制剂 (1 0mg/kg)的药动学比较。高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林的浓度 ,MCPKP计算机程序处理血浆药物浓度 时间数据。健康猪静注给药的药时数据适合二室开放模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2α0 31± 0 1 6h;t1 /2 β2 2 9± 0 94h ;V1 0 2 2± 0 1 2L/kg ;Vd(area) 1 0 6± 0 45L/kg ;ClB0 33±0 0 7L·kg- 1 ·h- 1 ;AUC31 67± 7 0 9mg·L- 1 ·h。健康猪内服给药的药时数据适合一级吸收二室模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2ka0 74± 0 36h ;t1 /2 β5 96± 3 41h ;tmax1 52± 0 43h ;Cmax5 33± 2 0 7μg/mL ;AUC2 3 89± 9 40mg·L- 1 ·h ;F79 64 %± 38 47%。健康猪肌注阿莫西林钠和阿莫西林钠长效制剂的药时数据均适合一级吸收二室模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2ka0 1 1± 0 0 5h和 0 0 9± 0 0 5h ;t1 /2 β3 2 8± 1 89h和 7 32± 3 55h ;tmax0 33± 0 1 4h和 0 36±0 1 6h ;Cmax1 6 51± 4 41 μg/mL和 1 8 98± 2 70 μg/mL ;AUC30 61± 8 2 7mg·L- 1 ·h和 49 44± 1 1 31mg·L- 1 ·h ;F96 65 相似文献
15.
为获得稳定表达重组猪α6干扰素的毕赤酵母。人工合成Po IFN-α6基因片段,连接至pPICZαA质粒,构建PoIFN-α6毕赤酵母表达质粒pPICZαA-PoIFNα6;经Sac I酶线性化后转化至毕赤酵母X33感受态细胞,筛选阳性克隆;优化毕赤酵母表达条件,并对表达产物进行了体外抗病毒活性测定。结果表明,成功构建了表达重组猪α6干扰素的毕赤酵母,以1%甲醇诱导72 h后,菌体上清SDS-PAGE可见20 kDa左右目的条带,Western blot检测为阳性;表达的重组猪干扰素α活性在PRRSV/Marc-145、VSV/MDBK、PRV/Vero、PEDV/Vero、PPV/PK-15、PCV2/PK-15和TGEV/PK-15系统中均具有良好的抗病毒活性。说明PoIFN-α6在细胞上清中表达成功,并且在不同宿主细胞中均有抗病毒活性。 相似文献
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猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂,本研究采用PCR技术自猪肝脏总DNA中扩增、克隆猪α干扰素（PoIFN-α）成熟肽基因并亚克隆入pQE30载体进行原核表达,对表达的融合重组猪α干扰素（rPoIFN-α）蛋白通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化,采用细胞病变抑制法分别测定rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗水泡性口炎病毒（VSV）增殖活性及在Marc-145细胞上抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的增殖活性,以分别评价rPoIFN-α的活性单位及其体外抑制高致病性PRRSV增殖所需的最低浓度。结果表明,克隆的PoIFN-α成熟肽基因全长501bp,编码166个氨基酸;表达的rPoIFN-α蛋白分子量大小20.7ku左右,与预期大小相一致;经纯化后的蛋白纯度在95%以上;纯化的rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗VSV病毒活性单位为1.4482×10^4IU/mL（5.2×10^6IU/mg）,在Marc-145细胞上能完全抑制高致病性PRRSV增殖所需的rPoIFN-α蛋白最低有效剂量为640U/mL（2.3×10^4U/mg）。这些研究结果为新型基因工程抗病毒制剂的开发以及用于高致病性PRRSV性疾病的预防和治疗奠定了基础。 相似文献
17.
本研究根据GenBank上登录的猪β-干扰素基因成熟肽核苷酸序列(mPoIFNβ),在保持原猪β-干扰素蛋白序列不变的基础上,对猪β-干扰素基因进行了毕赤酵母偏嗜性改造,并构建了毕赤酵母重组表达质粒pPICZαC-PoIFNβ。pPICZαC-PoIFNβ经SacⅠ酶切线性化后,电击转化导入感受态的毕赤酵母菌株X-33中,转化子经YPDS+Zeocin抗性平板筛选和PCR鉴定后获得多株阳性菌株。阳性酵母菌株经甲醇诱导分泌表达了重组PoIFNβ,其表达量约为127.9 mg/L。表达产物经SDS-PAGE和Western blotting检测,结果表明,表达产物为分子质量约25和28 ku的混合物,并且二者都可与PoIFNβ阳性血清结合。以细胞病变抑制法测定重组β-干扰素在BHK-21细胞上的抗水泡性口炎病毒活性为2.8×103 IU/mL;对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在Marc-145细胞上抗病毒活性达到1.6×103 IU/mL。 相似文献
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为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性，利用pET-32a载体系统，构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外，MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性，并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的活性，同时测定了重组蛋白作用PK-15细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平；之后通过小鼠攻毒保护试验，测定了rPoIFN-α治疗后各组织器官的病毒载量，ELISA测定了小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的动态变化，并对整个试验期间小鼠出现的临床症状进行打分。结果显示，成功获得了原核表达的特异性重组蛋白rPoIFN-α,在细胞上抗病毒比活性达到1.67×106 IU,对细胞没有损害作用，且显著上调了Mx1、OAS等因子的转录水平；在小鼠体内能明显拮抗EMCV和PRV的增殖，减少促炎因子的产生，延缓临床症状的出现。结果表明，原核表达重组蛋白rPoIFN-α在体内外均具有抗病毒活性，为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础。 相似文献
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用PCR方法扩增了吉林白鹅α干扰素(IFN-α)成熟肽编码序列,将IFN-α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-IFN-α,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白(GST-IFN-α)。SDS-PAGE、Western-blot检测结果表明,重组吉林白鹅IFN-α融合蛋白(rGoIFN-α)的分子量大小约为43ku,能与IFN-α抗血清发生特异性结合反应。重组吉林白鹅α干扰素经谷胱甘肽Sepharose-4B亲和柱层析纯化后,在鸭胚成纤维细胞上抗鹅细小病毒的活性为3.32×105 U/mg,本试验结果表明,该表达系统能够表达重组鹅α干扰素,且表达的重组鹅α干扰素具有一定的抗病毒活性。 相似文献
20.
24只健康肉鸡随机分成2组,每组12只(公母各半),采用单周期平行设计,分别进行单剂量(60 mg/kg bw,以磺胺氯吡嗪钠计)经口灌服复方和单方磺胺氯吡嗪钠溶液的药动学研究.给药后按预定时间采集血样,采用HPLC法测定血浆中药物含量.实测血药浓度-时间数据,采用Kinetica药动学分析软件计算药动学参数.结果显示,鸡单剂量灌服磺胺氯吡嗪钠溶液后,主要药动学参数如下:T1/2β为9.39 h,MRT为26.57 h,Tm.和Cm.分别为7.33 h和64.69 μg/mL,ClB为0.52 mL/(min · kg),Vz为0.43 L/kg,AUC为1954.28 μg/mL·h.鸡单剂量灌服复方磺胺氯吡嗪钠溶液后,主要药动学参数如下:T1/2β为8.24 h,MRT为26.37 h;Tmmax和Cmax15.50 h和71.43 μg/mL;ClB为0.51 mL/(min·kg),Vz为0.36 L/kg,AUC为2125.81 μg/mL·h,相对生物利用度为108.78％.结果表明,与磺胺氯吡嗪钠溶液相比,复方磺胺氯吡嗪钠溶液灌服后,除达峰时间和峰浓度明显延长或增高(P＜0.01)外,其他药动学参数均无显著差异(P＞0.05). 相似文献