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1.
为了分析禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)S1133株感染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)后,对其细胞因子IL-17、IL-18和IFN-γmRNA转录水平的影响,探讨禽呼肠孤病毒感染机制和宿主之间的作用关系。本试验将ARV-S1133感染CEF细胞后,运用荧光定量PCR技术,测定和分析ARV结构蛋白σC和CEF细胞的IL-17、IL-18及IFN-γ的mRNA动态转录水平。结果表明,ARV-S1133感染CEF细胞10h后病毒结构蛋白σC mRNA的相对表达量开始迅速上升,在48h达到最高峰(13 162.73倍);ARV-S1133感染后引起CEF细胞中的IL-17、IL-18和IFN-γmRNA表达量发生变化,IL-17和IFN-γmRNA转录水平在感染早期迅速上调,感染后6h达到第一个峰值,分别上调8.77倍和11.17倍,随后下降,在感染36、48、60h后大幅度上升,且在48h达到峰值,表达量分别为97.19倍和111.58倍。IL-18mRNA转录水平在整个感染过程中表达量较低,在感染6h后微量上调(1.39倍),在感染中后期,其表达量呈下调趋势,感染48h时,IL-18mRNA表达量最低,与对照组相比下调0.19倍;5个不同滴度的ARV病毒感染CEF细胞24h后,3个细胞因子mRNA的表达量与病毒滴度线性相关,IL-17和IFN-γmRNA转录水平与病毒滴度正相关,IL-18mRNA转录水平与病毒滴度负相关。结果表明,ARV感染后可诱导CEF分泌IL-17、IL-18、IFN-γ的mRNA转录水平上调,说明IL-17、IL-18、IFN-γ可能与禽呼肠孤病毒的复制和致病机制相关。 相似文献
2.
《中国兽医学报》2014,(10):1598-1602
以实时荧光定量PCR方法检测了艾美尔球虫(Eimeria tenella)子孢子体外刺激鸡异嗜白细胞和巨噬细胞炎性细胞因子IFN-γ、IL-6、IL-10和IL-12mRNA表达水平。结果发现,与不刺激对照组相比,活的E.tenella子孢子刺激异嗜白细胞(4h)和巨噬细胞IL-6mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。灭活的E.tenella子孢子刺激异嗜白细胞和巨噬细胞IFN-γ、IL-6、IL-10和IL-12mRNA表达水平均高于活的E.tenella子孢子,差异显著(P<0.05)。与不刺激对照组相比,灭活的E.tenella子孢子刺激异嗜白细胞IL-6、IL-10、IL-12(2h)和IFN-γ(4h)mRNA表达水平均显著增加(P<0.05),灭活的E.tenella子孢子刺激巨噬细胞IL-6、IL-12和IFN-γmRNA表达水平显著上调(P<0.05)。表明,鸡异嗜白细胞和巨噬细胞受到E.tenella子孢子刺激后炎性细胞因子的显著上调可能与机体清除球虫感染有关。 相似文献
3.
为了获得具有良好生物学活性且具有较高表达量的鸡白细胞介素-17(ChIL-17),本研究在前期研究工作基础上,将ChIL-17的编码基因按照真核细胞(昆虫细胞)偏爱的密码子进行优化改造,经全基因合成后插入到转座载体pFastBacTM Ⅰ中,构建重组转移质粒pfast-mod.ChIL-17并转化DH10Bac感受态细胞.通过位点特异性转座将mod.ChIL-17基因整合到穿梭质粒Bacmid中,获得重组穿梭质粒Bacmid-mod.ChIL-17.应用脂质体将重组穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-mod.ChIL-17.重组病毒传代扩增感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光检测目的蛋白的表达.结果表明,经过优化的ChIL-17在杆状病毒系统中获得表达. 相似文献
4.
《中国兽医杂志》2015,(5)
旨在建立鸡β连环蛋白(β-catenin)m RNA的实时荧光定量RT-PCR方法,检测NDV、AIV、REV、ALV四种病毒感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后β-catenin m RNA的动态表达水平;运用建立的Rrt-PCR方法,检测NDV F48E9、AIV H5N1、ALV和REV病毒感染后β-catenin m RNA的动态表达水平。研究结果:(1)NDV F48E9感染CEF后3 h诱导β-catenin m RNA的表达,而在感染后6 h至24 h抑制β-catenin m RNA的表达。其中接毒后的9、24 h,接毒组β-catenin m RNA的表达量分别是对照组的0.22倍和0.25倍,差异显著(P0.05);(2)AIV H5N1感染CEF后3、6 h,接毒组β-catenin m RNA的表达水平高于对照组,其中3 h时接毒组是对照组的3.14倍,差异极显著(P0.01);在感染后9、12、24 h抑制β-catenin m RNA的表达,接毒组分别是对照组的0.5、0.03、0.3倍,其中12 h时差异极显著(P0.01);(3)REV感染CEF后诱导β-catenin m RNA表达,接毒后24 h、3、5、7、8 d,接毒组分别是对照组的2.38、2.71、2.05、2.64、2.79倍,差异均显著(P0.05);(4)ALV感染CEF后诱导β-catenin m RNA的表达,其中接毒后3、5、7 d时,接毒组细胞β-catenin m RNA的表达水平分别是对照组的6.20、3.11、6.70倍,3、7 d时差异极显著(P0.01),5 d时差异显著(P0.05)。研究结论:β-catenin参与这四种病毒的感染应答,且表达模式不同。β-catenin动态表达为研究病毒感染致病与机体相互作用的分子机制提供了有价值的参考。 相似文献
5.
产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli, ETEC)是引起新生和断奶仔猪腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)的最重要的病原之一。ETEC进入肠道后与肠上皮细胞的相互作用既是该细菌致病的前提条件,也是激发宿主免疫反应的基础。本研究旨在分析ETEC感染猪肠上皮细胞后IL-17细胞因子表达变化,同时探索细胞因子在抵抗ETEC感染中的免疫防御机制。本研究采用猪肠上皮细胞系IPEC-J2和产肠毒素大肠杆菌标准株(C83901)为主要研究材料,通过RT-PCR、ELISA、免疫荧光及免疫印迹的方法分析了IL-17细胞因子及肠黏膜免疫防御相关基因在感染前后的变化。同时,进一步研究了IPEC-J2细胞中相关IL-17细胞因子刺激对肠黏膜防御相关基因的调控作用。结果表明,除IL-17D未检测到外,C83901能促进所有IL-17细胞因子mRNA的转录,尤其能显著上调IL-17A、IL-17C在基因和蛋白水平的表达。ETEC感染或者体外添加IL-17A/IL-17C有利于IPEC-J2细胞中黏蛋白(mucin-2)、紧密连接蛋白(claudin-1、 claudin-2)及防御素pBD-2的表达。结果提示,ETEC感染后,肠上皮细胞通过调节IL-17细胞因子的表达进而增强肠黏膜屏障功能以抵抗该细菌的入侵。 相似文献
6.
鸡白介素-17 cDNA基因的克隆、序列分析及表达 总被引：2，自引：0，他引：2
用RT-PCR方法,分别以ConA体外刺激培养12、24、48 h的鸡脾脏淋巴细胞(SP)和经人工感染2次堆型艾美尔球虫(E im eria tenella)孢子化卵囊(约3.6×104个/鸡)的鸡盲肠扁桃体/肠上皮淋巴细胞(IELS)总RNA为模板,成功扩增出预计大小的鸡白介素-17 cDNA基因,并克隆入pM D 18-T载体,进行序列测定。测序结果显示其阅读框(ORF)为507 bp,与G enB ank上鸡IL-17基因已知序列(A J493595)BLA ST的比较表明:核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.4%和82.4%。将cDNA基因克隆入pET-32a质粒,构建了pET 32a-IL-17原核表达载体,IPTG诱导后表达出的融合蛋白大小为36 000左右。 相似文献
7.
重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)对传染性法氏囊灭活疫苗的免疫增强机理研究 总被引：2，自引：0，他引：2
为了评价重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)蛋白在鸡体内的免疫增强作用机理,本研究将40只7日龄健康SPF鸡随机平均分为4组以进行rChIL-6蛋白对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)灭活疫苗免疫增强作用试验,于14日龄时进行免疫接种和rChIL-6蛋白注射。分别检测4组鸡免疫前和免疫后不同时间血清中IBDV抗体水平、不同细胞因子表达水平、脾淋巴细胞增殖活性和外周血T淋巴细胞增殖活性等指标以揭示rChIL-6蛋白在机体内对疫苗的免疫增强机理。结果表明:免疫后749d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组(第4组)鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组(P<0.01);免疫后749d,rChIL-6蛋白与IBDV灭活疫苗共免疫组(第4组)鸡血清中IBDV抗体水平极显著高于IBDV灭活疫苗对照组(P<0.01);免疫后735d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2(ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2)和γ干扰素(ChIFN-γ)等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组(P<0.01),α干扰素(ChIFN-α)的表达水平于免疫后1435d,第4组鸡血清中的白细胞介素-4、6、2(ChIL-4、ChIL-6、ChIL-2)和γ干扰素(ChIFN-γ)等4种细胞因子的表达水平极显著高于其他3组对照组(P<0.01),α干扰素(ChIFN-α)的表达水平于免疫后1435d期间极显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后735d期间极显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);rChIL-6蛋白单独应用后可显著提高机体的ChIL-4、ChIL-6和ChIL-2的表达水平,但对ChIFN-γ、ChIFN-α的表达水平无明显影响。免疫后714d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);免疫后714d,第4组鸡的脾淋巴细胞增殖活性显著高于其他3组对照鸡(P<0.01);免疫后721d,第4组鸡的外周血T淋巴细胞的增殖活性稍高于其他3组对照组(P>0.05)。结果表明,rChIL-6在体液免疫和细胞免疫水平对鸡传染性法氏囊灭活疫苗免疫后均具有免疫增强作用;对机体体液免疫应答的增强能力高于细胞免疫应答。 相似文献
8.
9.
IBDV感染对法氏囊RNA m~6A和DNA 5mC修饰以及相关催化酶基因表达的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国兽医学报》2019,(5):936-942
传染性法氏囊病毒(IBDV)感染造成病鸡法氏囊严重损伤,引起免疫抑制,然其具体机制仍不明晰。本研究旨在探讨IBDV感染对法氏囊表遗传修饰及其相关酶表达的影响。试验采用21日龄商品肉鸡,给予IBDV处理,感染后3,5 d收集法氏囊组织。应用基于ELISA试剂盒检测总5mC和m~6A,Real-time PCR检测相关催化酶基因表达。结果显示,感染后5 d,总m~6A水平及其甲基转移酶METTL3和METTL14 mRNA表达均显著降低(P0.01);去甲基化酶FTO的表达在感染后3,5 d均显著降低(P0.05)。总5mC水平在感染后3 d明显升高(P0.05),其去甲基化酶Tet1 mRNA表达明显降低(P0.01);感染后5 d,甲基转移酶DNMT1 mRNA表达显著降低(P0.01),而DNMT3a的表达明显升高(P0.01);结果表明IBDV能够影响法氏囊5mC和m~6A谱及相关酶的表达,这可能是IBDV影响宿主免疫功能的途径之一。 相似文献
10.
为检测和评价鸡白细胞介素2(ChIL-2)在抗球虫免疫过程中的作用,以RT-PCR技术从鸡盲肠扁桃体中克隆获得了长度为391 bp的ChIL-2.将实验鸡随机分为对照组和试验组,试验组于12日龄和22日龄时用E.tenella孢子化卵囊进行免疫,分别于设定时间每组取5只鸡的盲肠扁桃体,以鸡β-Actin为参照建立半定量RT-PCR方法检测ChIL-2的表达动态变化.结果表明,试验组在第一次免疫后的第几天和第二次免疫后的第七天ChIL-2的表达量明显升高,提示ChIL-2参与了鸡体的抗球虫感染过程,为进一步探讨ChIL-2的生物学活性及作为鸡球虫病基因工程疫苗佐剂的研究奠定基础. 相似文献
11.
将鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gD基因和鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因通过同源重组法重组禽痘病毒转移载体,构建含ILTVgD基因和ChIL-2基因的重组禽痘病毒转移载体rFPVIL2ILTV—gD,蓝色蚀斑纯化法纯化重组病毒,用IFA检测重组病毒中ILTVgD基因的表达和用ELISA试剂盒检测ChIL-2的表达。重组病毒rFPV—IL2-ILTV-gD免疫试验鸡,间接ELISA测定血清中ILTV抗体效价,动物试验用构建的ILTV强毒以滴鼻方式攻击各组试验鸡,结果表明,外源基因在重组禽疽病毒中得到了稳定表达;ELISA检测结果表明在免疫7d后能够检测到血清抗体,免疫21d后血清抗体达到高峰,此后便开始逐渐下降,符合疫苗免疫的消长规律;攻毒后每组鸡的发病情况可以看出重组病毒rFPV-IL2-ILTV-gD组和疫苗对照组对ILTV强毒攻击的保护率分别为96％和92％,而空白对照组为8％。说明构建的重组病毒rFPV-IL2-ILTV—gD免疫效力稍优于弱毒疫苗,能够较好的保护免疫鸡群。 相似文献
12.
为比较已构建的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组质粒的免疫原性、进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用,本研究将2周龄SPF鸡随机分为6组,以200μg/羽剂量首免:A组免疫重组真核表达重组质粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18,B组免疫pCI-ChIL-18-VP2/4/3,C组免疫pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18,D组免疫pCI-VP2/4/3,E组免疫pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3,F组为空白对照,2周后以相同剂量二免,通过观察外周血淋巴细胞增殖效果,测定血清IBDV中和抗体水平、血清ELISA抗体水平和攻毒保护试验等,比较各试验组IBDV DNA疫苗的免疫原性。试验发现:重组质粒pCI-co-VP2/4/3-ChIL-18的保护效果最好,保护率达93.3%;pCI-VP2/4/3-ChIL-18免疫效果次之,保护率达80.0%;pCI-ChIL-18-VP2/4/3与pCI-ChIL-18和pCI-VP2/4/3的免疫效果无显著差异,保护率均为73.3%;但均优于单独使用重组质粒pCI-VP2/4/3组,保护率为60.0%。本实验为进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用及研制高效、价廉的IBDV DNA疫苗提供了实验依据。 相似文献
14.
Hopper K Aldrich J Haskins SC 《Journal of veterinary internal medicine / American College of Veterinary Internal Medicine》2002,16(1):89-94
Ivermectin is widely used in veterinary medicine as an anthelminthic and generally has a wide margin of safety, but Collies are prone to ivermectin toxicity. Two groups of Collies were presented to the University of California Veterinary Medical Teaching Hospital (VMTH) with ivermectin toxicity. The medical records of the 2 groups of Collies were reviewed retrospectively. Group I comprised 5 adult Collies that received at least 400 microg/kg ivermectin p.o. and were presented to the VMTH 3 hours after intoxication. These Collies showed marked clinical signs on presentation. Three of these dogs required mechanical ventilation and were euthanized for financial reasons; the remaining 2 dogs were comatose but recovered in 5-7 days. Group II was comprised of 12 adult Collies presented to the VMTH 2 days (n = 10) and 5 days (n = 2) after subcutaneous injection of 200-250 microg/kg ivermectin. These animals showed greater variation in severity of illness among individuals; 5 animals progressed to stupor or coma, whereas 4 animals remained ambulatory. Most of these dogs' clinical signs deteriorated from the day of intoxication until approximately day 6, from which time they showed gradual but steady improvement. All of the Collies in this group survived, but it took 3 weeks for most of them to recover. Collies suffering from ivermectin toxicity can have a severe and prolonged clinical course requiring intensive nursing care. Respiratory, cardiovascular, and nutritional support may all be required. With appropriate care, however, the prognosis for complete recovery is good. 相似文献
15.
Th细胞和IL在小鼠寄生虫免疫中的作用 《畜牧与饲料科学》2016,37(11):104-104
Th17细胞（T helper 17 cells,Th17）是CD4~＋T细胞分化的亚群细胞之一,能够特异性地分泌细胞因子IL-17（interleukin-17,IL-17）,通过IL-17、IL-21、IL-23等细胞因子介导炎症反应和针对细菌的抗感染免疫,同时在寄生虫免疫中发挥重要作用。 相似文献
16.
Determination of 17-hydroxycorticosteroids in canine urine 总被引：1，自引：0，他引：1
E T Siegel 《American journal of veterinary research》1965,26(114):1152-1156
17.
文章采用酸解法-氨基酸分析仪测定蚕蛹中17种氨基酸含量。该法预处理过程简单,17种氨基酸在65 min内完全分离。此法简便、快捷、重复性好,灵敏度高。 相似文献
18.
Skeen TM Olby NJ Muñana KR Sharp NJ 《Journal of the American Animal Hospital Association》2003,39(3):271-282
The medical records of 17 dogs diagnosed with spinal arachnoid cysts at North Carolina State University Veterinary Teaching Hospital were retrospectively examined to identify trends in signalment, history, neurological status, treatment, and short- and long-term prognosis. The typical case was that of a nonpainful, progressive ataxia frequently characterized by hypermetria and incontinence. Cysts typically occurred in the dorsal subarachnoid space at the first to third cervical vertebrae of young, large-breed dogs or the caudal thoracic vertebrae of older, small-breed dogs. Although 14 of 15 dogs treated surgically did well in the short term, long-term successful outcomes were achieved in only eight of the 12 dogs that were followed for >1 year. Significant predictors of good, long-term outcome were not identified; however, factors associated with a trend toward a good outcome included <3 years of age, <4 months' duration of clinical signs, and marsupialization as the surgical technique. 相似文献