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2013年初上海某猪场保育猪群中出现高热、呼吸障碍等临床表现,导致大部分发病猪死亡,为了确定此次猪群中爆发疫病的病原,本研究从发病猪群中随机采集了15份血液样品,利用RT-PCR方法对本次疫病病原进行了检测。结果显示,有11份临床样品呈现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强阳性,且与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)对照大小相一致。随后从阳性样品中选取SHxx13/2013在Marc-145细胞中进行病毒的分离与鉴定,结果显示SHxx13/2013在细胞接种后第1代即出现明显的细胞效应(cytopathic effect,CPE),其病变特征与高致病性PRRSV强毒HuN4株一致。对SHxx13/2013第5代细胞分离毒进行RT-PCR和IFA等特异性鉴定,结果显示该毒株为PRRSV分离株,其蚀斑形态和生长特性与强毒HuN4株相似。分段克隆该毒株全长基因进行测序和序列分析,结果显示,新分离的流行毒SHxx13/2013株全长基因组为15 319 bp,其Nsp2基因特征与HP-PRRSV一致,在第482位和第534~562位发生两处共30个氨基酸的不连续缺失,且该毒株与高致病性PRRSV代表毒株HuN4亲缘关系较近,全长基因的核苷酸同源性为99.6%。本研究结果表明新分离的SHxx13/2013株属于高致病性PRRSV分离株,据此我们推测今年年初上海某猪场爆发的疫情主要是由HP-PRRSV感染所致。 相似文献
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为了解华东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株变异情况,本研究以RT-PCR技术对山东、福建发病猪场的41份组织样品进行PRRSV检测和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)相关毒株(HP-PRRSVLike)检测,对阳性样品进行PRRSV分离、ORF5基因测序及变异分析。结果显示,福建、山东样品的阳性率分别为56%、74%;共分离到16个美洲型毒株(福建10株、山东6株),分属于Lineage 8、Lineage 5、Lineage 3、Lineage 1四个谱系,其中以Lineage 8为主。这表明PRRSV流行毒株多样化,跨谱系毒株重组值得警惕。 相似文献
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为了解2014年和2015年华东部分地区(山东省和福建省)猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)流行毒株的变异情况,试验收集来自华东部分地区猪场的疑似猪繁殖与呼吸综合征样品41份(山东省19份,福建省22份),采用RT-PCR方法分别进行PRRSV、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)检测。对检测出的阳性样品进行PRRSV的分离鉴定和ORF5基因测序,对测得序列进行遗传进化分析和推导氨基酸序列变异分析。结果表明:山东地区PRRSV检出率为74%,其中HP-PRRSV检出率为21%;福建地区PRRSV检出率为56%,其中HP-PRRSV检出率为42%。用Marc-145细胞从疑似猪繁殖与呼吸综合征病料中分离到16株PRRSV,其中10株为福建毒株,6株为山东毒株;测序获得的16株分离株中12株分布于美洲型的4个亚群,4株处于亚群之间的特殊进化位置。16株分离株以点突变为主,未见插入突变,糖基化位点30,44,51 aa处保守,32～35 aa处变异频繁。说明山东和福建地区流行的毒株不断变异,NADC30亚群毒株已经在山东地区出现,福建地区流行毒株仍以高致病毒株为主,但个别毒株已位于特殊进化位置。 相似文献
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从内蒙古自治区暴发猪“高热病”的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（ Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus, HP-PRRSV），命名为NM1株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增和序列测定，结果表明HPPRRSVNM1株基因组全长15356bp（包括PolyA尾）。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株（VR-2332）和欧洲型标准株（LV）全基因核苷酸同源性分别为89．4％和61．9％，说明NM1属于美洲型毒株。与VR-2332相比，NM1株非结果蛋白（nsp2）第481位和第533～561位氨基酸存在缺失，该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明，该毒株对猪具有高致病性。 相似文献
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为了解信阳某猪场发病仔猪死亡原因,通过流行病学调查、病理解剖、伪狂犬病毒PCR检测、PRRSV的PCR检测、PRRSV分离株ORF5基因的PCR扩增及序列分析等方法,对该猪场发病猪进行了诊断。结果表明,该猪场猪只为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV)和伪狂犬病病毒（PRV）的混合感染。 相似文献
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为确诊湖南浏阳市某猪场仔猪的发病原因，对该猪场送检的发病仔猪肺脏、肾脏、小肠及内容物等样品进行细菌分离鉴定及常见病毒性病原荧光定量PCR检测，并对核酸阳性病原基因序列进行测序与基因型分析，结果表明，3份病料中均未分离获得致病菌。荧光定量PCR检测为PRRSV和PEDV核酸阳性，阳性率分别为66.67%(2/3)和100.0%(3/3);对PRRSV ORF5和PEDV S1基因序列扩增测序及同源性分析结果发现，该场流行的PRRSV分离株与已知HP-PRRSV对应序列同源性最高；PEDV分离株属于GII-b亚型，与国内已知PEDV变异株同源性最高。以上结果显示，该场仔猪发病是由高致病性PRRSV和PEDV变异株混合感染而引起的。 相似文献
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为了证实广东阳江某猪场存在猪伪狂犬病毒(PRV)强毒力野毒感染,试验采用病毒分离鉴定及仔猪攻毒试验的方法,对该猪场保育猪群病料中存在的病毒进行分离鉴定,以及用15日龄含有母源抗体(中和效价水平为1∶16)的仔猪进行毒株致病性的初步研究。结果表明:从病料中成功分离出1株PRV野毒株GD-1406株;经滴鼻攻毒,试验Ⅰ组(病毒攻毒效价为1×106TCID50/m L)仔猪攻毒后第5天全部死亡,试验Ⅱ组(病毒攻毒效价为1×104TCID50/m L)仔猪攻毒后第4天死亡率达80%,第6天全部死亡;病理剖检显示,分离的PRV对试验组仔猪的多种组织器官造成肉眼可见的损伤,对照组正常。说明该猪场保育猪群中有PRV野毒强毒株存在。 相似文献
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为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)与致弱PRRSV的重组病毒,本研究在PRRSV致弱株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS与HP-PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,利用SOE-PCR技术将强弱毒的nsp2区域进行互换,构建了nsp2基因替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆.将构建的嵌合克隆转染MA104细胞,4d后观察到典型的细胞病变.通过RT-PCR和间接免疫荧光证明获得了强弱病毒株之间nsp2基因互换的嵌合病毒.这些嵌合病毒的构建和相应反向遗传操作平台的建立,为进一步研究HP-PRRSV的致病机制及相关疫苗的研发奠定了基础. 相似文献
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《广西畜牧兽医》2015,(6)
为了解2013年—2014年广西桂林市猪蓝耳病(PRRS)的流行情况,以及主要基因的变异情况,本研究应用RT-PCR的方法检测疑似猪蓝耳病病毒(PRRSV)样品35份,阳性为8份,阳性率22.9%。选择其中3个阳性的样品进行GP5和部分nsp2基因测序并分析其结果。GP5基因分析结果表明3株PRRSV的GP5基因与NCBI基因库中参考序列对应核苷酸的同源性为63.5%~99.8%,氨基酸同源性为57.1%~99.5%。通过GP5的遗传进化分析发现所获得的PRRSV为北美型,且与HP-PRRSV同属于一个小分支上;部分nsp2基因结果表明,与PRRSV原型毒株VR2332的核苷酸同源性在78%~78.8%之间,氨基酸同源性在69.1%~70.3%之间,与高致病性毒株PRRSV JXA1核苷酸同源性在96.3%~99.1%,氨基酸同源性在93.2%~97.6%。氨基酸的比对结果表明,本研究所获得的3株PRRSV部分nsp2基因均存在与HP-PRRSV一致的1+29个氨基酸的缺失,表明3株PRRSV毒株均为HP-PRRSV。 相似文献
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随着规模化养猪业的发展,传染性疾病越来越多,混合感染或多重感染十分普遍,给疾病的诊断和预防带来很大困难。本文将我们实验室2010年分别采自福建、广西、河南、上海、内蒙、浙江、江苏和山西等地发病猪场的185份病料,通过RT-PCR和PCR方法对其进行猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）、猪繁殖障碍的猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）、猪圆环病毒2（Porcine circovirus type 2,PCV2）、猪细小病毒（Porcine parvovirus,PPV）、猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）、细环病毒2（Torque teno virus 2,TTV2）等病毒检测。结果表明在所检的病料中PRRSV、PCV2和TTV2的阳性率比较高,分别为49.2%、62.2%和95.1%。有些地方TTV2的阳性率高达100%;同时,还存在很普遍的PRRSV与PCV2、PRRSV与TTV2、PCV2与TTV2等混合感染,混合感染率分别为27.6%、45.4%、58.4%;以及PRRSV、PCV2与TTV2的三重感染率为24.9%。同时对部分PRRSV阳性病料的PRRSV GP5和nsp2基因分别进行测序,分析测序结果表明病料中的PRRSV的GP5和nsp2序列与PRRSV HuN4株的相应序列的亲缘关系分别在98.2%和96.2%以上,且在nsp2区域都存在30个不连续氨基酸的缺失,说明现在临床中所流行的PRRSV可能仍是与高致病性PRRSV基因型相似的病毒。通过本文可以及时了解当前养猪场的病毒性疾病的流行情况,为猪场病毒性疾病的防控提供依据。 相似文献
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为研究鲁豫冀地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,对2006—2012年来自3省区发病猪场的42份样品进行PRRSV分离鉴定,并进行了生物学特性研究和PCR鉴定,结果显示先后分离到15株PRRSV。分别采用RT-PCR扩增其ORF5基因和部分Nsp2基因并测序,与GenBank中68个ORF5序列和40个Nsp2序列的推导氨基酸序列进行比对,遗传变异分析结果表明,15株分离株均属于美洲型毒株,其中13个毒株Nsp2基因推导的氨基酸序列均存在氨基酸的不连续缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列与JXA1株有较高的同源性(95.5%~97.5%);SDDY2007株与疫苗株RespPRRS MLV和VR2332株亲缘关系相近,处于同一个亚群中;而HN25-2009分离株Nsp2基因推导的氨基酸序列有30个氨基酸的特征性缺失,其ORF5基因推导的氨基酸序列的遗传进化分析结果显示该分离株处于VR2332所在亚群(氨基酸同源性97.5%),具有一定特殊性。本试验结果表明,2006—2012年高致病性PRRSV是鲁豫冀地区的优势流行毒株,且存在疫苗毒株,3省区流行毒株间有一定遗传差异,但无明显地域特征。 相似文献
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立 总被引：6，自引：5，他引：6
2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列,在nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组时可获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,根据RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,并配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。 相似文献
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Two strains of porcine reproductive and respiratory syndrome viruses (PRRSV) were isolated from serum of some pig farms in Guangdong province and showed PRRSV positive in RT-PCR testing. The two viruses could passage stably and cause typical cenotaphic effect, they were named as LZ-GD and LB-GD. The analysis of variable region sequences of ORF5 and Nsp2 of the two viruses showed that LZ-GD and LB-GD strains were far to Europe strain Lelystad, the homology of nuclear nucleotide sequence were 63.5% and 63.8%, respectively, with classic American strain VR-2332 were 88.7% and 89.1%, respectively, and that with highly pathogenic JXA-1 strain were 99.2% and 99.3%, respectively. There were 30 amino acids deletion in Nsp2. It shared the deletion with JXA-1, HUN4 and other pathogenic variant. Thus, the two strains of PRRSV belonged to highly pathogenic American type. 相似文献
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2010年上半年11省市规模猪场疫病监测与剖析 总被引：3，自引：2，他引：1
为了解近期发病猪场几种病毒性疫病的流行状况,采用RT-PCR和PCR方法,对2010年1月至6月期间,来自11省(市) 50个猪场共147份病料进行猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）、伪狂犬病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV2）检测,并采用ELISA方法对其中26个猪场458份血清样品进行伪狂犬gE野毒抗体检测。结果表明,PCV2阳性率最高,为75.3%（70/93）;PRRSV阳性率次之,为57.4%（78/136）,HP-PRRSV阳性率为43.5%（54/124）;CSFV和PRV的阳性率分别为37.7%（52/138）和21.0%（21/100）;伪狂犬gE野毒抗体阳性率为16.4%（75/458）。同时检出2种及2种以上病毒的样品占46.9%（69/147）,其中以HP-PRRSV+PCV2、CSFV+PCV2及CSFV+HP-PRRSV+PCV2三种形式最为常见。PRRSV（50.0%）是猪场繁殖障碍性疾病中的最常见病原;CSFV（56.0%）和PCV2（48.0%）是断奶前后仔猪腹泻的常见病原;HP-PRRSV（53.5%）、CSFV（50.7%）和PCV2（48.0%）是保育猪发生高热症的常见病原。该检测结果为猪场疫病的诊断与防控提供了参考。 相似文献
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华南地区猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒检测分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解华南地区猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒的最新流行情况,采集了华南地区11个规模猪场各饲养阶段猪血清807份,用套式PCR(nPCR)检测猪圆环病毒1型(PCV-1)和猪圆环病毒2型(PCV-2);采集了若干猪场2010年1月至2011年8月期间有咳嗽、喘气、消瘦及疑似PDNS等临床症状的猪血清312份,以及无临床症状猪血清104份,以nPCR检测PCV-2,以一步法反转录PCR(RT-PCR)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒。结果发现,所调查的11个规模猪场中只有5个检出PCV-1,所有猪场均检出PCV-2。PCV-2阳性率为30.61%,而PCV-1阳性率仅为4.21%;经产母猪和7周龄以上保育猪PCV阳性率最高;有临床症状的猪血清PCV-2阳性率为58.65%,PRRSV阳性率为37.82%,PCV-2阳性猪群中有39.89%的猪同时感染PRRSV;有症状猪群7月～9月的PCV-2感染率最高,而1月～3月最低;无临床症状猪血清PCV-2阳性率为27.9%,PRRSV阳性率为0.96%,PCV-2与PRRSV无混合感染。证明PCV尤其是PCV-2在华南地区仍广泛传播并流行,而且PCV-2与PRRSV混合感染致病情况较多。PCV-2的感染率与季节有一定的相关性,种猪带毒情况严重。 相似文献
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我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析 总被引：2，自引：0，他引：2
对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析.结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%.屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重.对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa～29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%～87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%～99.0%.而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%～88.1%和97.5%～98.0%.从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群. 相似文献
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DENG Tongwei XUE Yanan LU Jianzhou XIA Yanxun CHEN Lulu GUO Yiwen PENG Liming JIANG Zenghai QIAO Hongxing XU Yaohui ZHANG Xiaozhan 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3401-3409
To identify the causative agent of porcine respiratory disease complex (PRDC) occurred at a pig farm in Kaifeng city,Henan province,we identified the potential causative bacteria of the morbid nursing piglets by bacterial test and drug sensitivity test of the clinical samples (lung,liver and spleen),and detected the common potential pathogens causing PRDC diseases by PCR and RT-PCR assays,including porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV),porcine circovirus type 2 (PCV2),swine influenza virus (SIV),pseudorabies virus (PRV),classical swine fever virus (CSFV) and Mycoplasma hyopneumoniae (Mhp),and then sequcing and phylogenetic analysis of the structural gene of positive causative pathogens were carried out.The results showed that a Haemophilus parasuis (Hps) strain were isolated and identified by the observation of bacterial morphology and satellite phenomenon,and the sequence analysis of 16S rRNA gene.The drug sensitivity test showed that the Hps strain was sensitive to ampicillin,amoxicillin-clavulanic acid,ceftiofur and tetracycline.Meanwhile,PCR and RT-PCR assays indicated that all the samples were positive for PRRSV and PCV2,and named the involved strain as PRRSV/HN-2019 and PCV2/HN11-2019,respectively.Sequencing and phylogenetic analysis of the ORF5 gene of the newly identified PRRSV revealed that the PRRSV/HN-2019 strain was closely related to the NADC30-like strains and grouped into NADC30-like genotype clade.And cap gene of the newly identified PCV2 strain the PCV2/HN11-2019 strain was closely related to the PCV-2d strains and grouped into PCV-2d genotype clade.In conclusion,this study demonstrated that the morbid piglets were co-infected with PRRSV,PCV2 and Hps,which provided a basis for the development of effective control strategies in the pig farm. 相似文献