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1.
为了研究摄铁蛋白TonB对于禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)铁摄取能力及致病性的影响，试验采用同源重组技术构建了APEC tonB基因缺失及回复株，通过测定在正常和贫铁环境下的生长曲线、铁摄取能力等研究tonB对APEC生物学特性的影响，并通过鸡攻毒模型评价了其与APEC毒力之间的关联性。结果显示：APEC TZ18ΔtonB缺失株在正常环境中的生长速度与野生株相比没有差异，但其在贫铁环境中的生长速度显著下降(P<0.05);TZ18ΔtonB缺失株菌体内摄入的铁含量明显低于野生株；TZ18ΔtonB缺失株感染1日龄雏鸡的半数致死量(104.236)高于野生株(103.328)，显示其毒力下降了8.1倍(P<0.05)；此外，TZ18ΔtonB缺失株在21日龄SPF鸡体内心血、肝脏和肺脏中的载菌量显著低于野生株感染水平(P<0.01)，而tonB基因回复株的感染水平接近野生株。结果表明：tonB参与APEC铁摄取进程并影响其毒力。 相似文献
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大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2（Escherichia coli type III secretion system 2，ETT2）参与禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli，APEC）的致病作用。本研究旨在探究ETT2结构基因epaPQR对禽致病性大肠杆菌的生物学特性及致病作用的影响，为进一步阐明ETT2的致病机制提供依据。基于CRISPR-Cas9基因编辑技术，构建epaPQR基因缺失株和回复株，通过生长曲线测定、运动性和生物被膜形成能力等试验，分析epaPQR基因对APEC生物学特性的影响；通过血清杀菌与组织载菌量等试验分析epaPQR基因对APEC致病性的影响。结果表明，成功构建ETT2结构基因epaPQR基因缺失株和回复株，epaPQR基因缺失后，其生长能力和生物被膜形成能力并没有显著改变（P>0.05）；但epaPQR基因缺失后，其运动能力显著降低（P<0.05），在透射电镜下观察到缺失株鞭毛数量明显减少，通过荧光定量PCR发现，鞭毛T3SS结构基因及鞭毛输出蛋白基因的转录水平均显著下调（P<0.05）。epaPQR基因缺失后其抗血清杀菌能力显著增强（P<0.05），缺失株AE81ΔepaPQR在雏鸡体内不同器官的定殖能力显著降低。结果说明，ETT2结构基因epaPQR参与调控APEC的鞭毛形成，影响APEC抗血清杀菌能力以及在体内组织器官的定殖能力，表明epaPQR在APEC致病过程中发挥重要作用，本研究为深入探究ETT2功能和APEC致病机制提供参考。 相似文献
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试验旨在对分离自天津地区发病猪场的7株猪链球菌3型菌株（Streptococcus suis type 3,SS 3）进行致病性和耐药特性研究。应用剂量为1.0×107、1.0×108和1.0×109 CFU/只的细菌对小鼠进行致病力研究,用PCR方法检测7株SS 3型菌株的毒力基因mrp、ef、sly、gdh、gapdh、fbps和orf2,并对这7株SS 3型菌株进行药物敏感试验。致病力试验结果显示,接种剂量为1.0×109和1.0×108 CFU/只时分别有6和3株SS 3型菌株可使小鼠100.0%（5/5）发病死亡,接种剂量1.0×107 CFU时仍有1株SS 3型菌株可使80.0%（4/5）小鼠发病死亡,这7株SS 3型菌株对小鼠的致病力依次为R15056 > R15042=S15030 > Y12024=Y09011 > Y13125 > Y13164。毒力基因检测结果表明,共有3种毒力基因型,R12024、Y13164、R15042和S15030株为gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y13125和R15056株为sly、gdh、gapdh、fbps和orf2毒力基因阳性,Y09011株为gdh、fbps和orf2毒力基因阳性。药物敏感性试验结果显示,7株SS 3型对头孢喹肟相对最敏感,其次为阿莫西林、环丙沙星和磺胺间甲氧嘧啶钠,但对强力霉素100.0%耐药,且所有菌株均呈现3重以上的耐药性。本研究为进一步开展天津地区SS 3型流行特点及致病机理研究奠定了基础,可为天津地区SS 3型菌株的综合防控提供理论指导。 相似文献
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【目的】 构建糖基翻转酶gtcA基因缺失株，并阐明其对单增李斯特致病性的影响。【方法】 利用同源重组技术构建gtcA基因缺失株；进一步分析亲本株EGDe-prfA*、缺失株ΔgtcA和回补株CΔgtcA的生长能力；通过Western blotting分析gtcA基因缺失对InlA和InlB在细菌表面锚定的影响；通过DF1细胞黏附侵袭试验、RAW264.7细胞吞噬增殖试验和鸡胚毒力试验评估gtcA基因缺失对单增李斯特菌细胞侵染能力及对鸡胚致病性的影响。【结果】 生长曲线显示，gtcA基因缺失并不影响单增李斯特菌在BHI培养基中的生长能力。Western blotting结果显示，内化素InlB在ΔgtcA表面的锚定量极显著低于EGDe-prfA*和CΔgtcA（P<0.01），但其表面InlA的锚定量与EGDe-prfA*并无显著差异（P>0.05）。细胞黏附侵袭试验结果显示，ΔgtcA对成纤维细胞DF1的平均黏附率和侵袭率显著低于EGDe-prfA*和CΔgtcA（P<0.05）。吞噬试验结果显示，巨噬细胞RAW264.7对ΔgtcA的平均吞噬率显著低于EGDe-prfA*和CΔgtcA（P<0.05），但ΔgtcA与EGDe-prfA*、CΔgtcA在RAW264.7中的3 h内增殖倍数并无显著差异（P>0.05）。鸡胚毒力试验结果显示，ΔgtcA感染鸡胚肝脏和脾脏中的平均细菌载量分别为6.86×103和3.69×102 CFU，极显著低于EGDe-prfA*和CΔgtcA感染鸡胚（P<0.01）；同时，ΔgtcA感染鸡胚存活率及存活时间均高于EGDe-prfA*和CΔgtcA感染鸡胚。【结论】 糖基转移酶gtcA基因缺失不影响单增李斯特菌1/2a血清型菌株EGDe-prfA*的生长能力，但能显著降低该菌表面InlB的锚定丰度，减弱该菌的细胞侵染能力及对鸡胚的致病性。本研究结果为深入探索糖基翻转酶基因gtcA介导单增李斯特菌致病机制提供参考。 相似文献
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为研究dnaJ基因序列与细菌致病力的关系,本研究构建了dnaJ基因缺失株和互补株,并对其致病性进行验证。参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001（登录号：NC_018646）目的基因序列分别设计引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通过融合PCR将两个片段连接到一起,构建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有启动子序列的dnaJ基因。将dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有启动子序列的dnaJ基因分别连接链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET4s和pSET2,电转化GD201008-001感受态细胞,构建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互补株CΔdnaJ。通过分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遗传稳定性与形态学变化对dnaJ上、下游基因转录的影响,以及生长速率和斑马鱼攻毒试验评价dnaJ基因对无乳链球菌毒力的影响。经PCR鉴定和测序证明,ΔdnaJ和CΔdnaJ构建成功;与野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在细菌染色形态上均无明显差异,但ΔdnaJ在液体培养基中的生长速度明显减缓;dnaJ基因的缺失未对相邻基因的转录造成影响;ΔdnaJ对斑马鱼的毒力明显下降,对斑马鱼的LD50为5.68×104 CFU,约是野生株的241倍。dnaJ基因对无乳链球菌的毒力有显著影响,本试验结果为进一步探究无乳链球菌dnaJ基因的功能提供了参考依据。 相似文献
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为研究狐源沙门菌双组份系统CpxR/A在细菌耐药和抗血清杀伤中的作用,本研究利用λ-Red重组技术构建了cpxR基因缺失株S-ΔcpxR,评价其在生物被膜形成、耐药、抗血清杀伤和细菌毒力中的重要作用。结果显示,与野生型相比,cpxR基因缺失株的生长速度、生化特性没有改变,但是生物被膜形成能力显著降低,对阿莫西林、阿米卡星和恩诺沙星的敏感性增加,血清中存活率和对小鼠的毒力显著降低。结果表明,沙门菌CpxR与毒力相关,为狐源沙门菌基因缺失苗的研究奠定基础。 相似文献
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副猪嗜血杆菌小鼠毒力和仔猪毒力的相关性分析 总被引：2，自引：2，他引：0
旨在对我国最为流行的血清4、5、12和13型副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis， HPS）（共36株）进行BALB/c小鼠和仔猪毒力试验的比较研究。小鼠毒力试验结果表明，4种血清型菌株的LD50分别介于9.80×107~4.60×109、2.10×108~8.85×109、4.81×107~7.01×109和1.75×108~8.45×108 CFU；整体毒力表现强弱依次是13、4、12、5型，但仅在5型与13型菌株之间毒力具有显著差异（P<0.05）。仔猪毒力试验结果表明，同一血清型中不同菌株的毒力具有明显差异，均存在强毒和弱毒菌株；整体毒力表现强弱依次是5、13、4、12型；但5型与4型（P=0.039）和12型（P=0.033）之间具有显著差异（P<0.05），与13型差异不显著（P=0.241）。综合对比分析HPS的小鼠和仔猪毒力试验结果，可以得出3个结论：1）4种国内流行性血清型菌株的整体毒力由强到弱依次是5、13、4和12型；2）但同一血清型中均存在强毒和弱毒菌株，HPS的血清型与其毒力之间不具有相关性；3） HPS虽能致死BALB/c小鼠，但其毒力结果与仔猪毒力试验结果并不一致，表明其作为替代模型具有一定的缺陷。 相似文献
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为了探究细胞溶素HlyE突变体(HlyE-V)对禽致病性大肠杆菌(APEC)致病力的影响，采用Red同源重组法构建了APEC菌株CBE59的HlyE-V基因缺失株CBE59ΔHlyE-V和回补株CBE59CΔHlyE-V,测定缺失株生长曲线、溶血活性、胞内存活曲线，并用细胞毒性试验和动物试验来评估HlyE-V对APEC致病力的影响。结果表明∶缺失HlyE-V基因对APEC的生长速率影响较小，野生株、缺失株和回补株均无溶血活性，证明HlyE-V不是孔道形成毒素，不能溶解哺乳动物的红细胞；HlyE-V缺失株致细胞毒性和对雏鸡的致病力显著降低，缺失株的半数致死量(LD50)值为4.9×106CFU/只，而野生株和回补株的LD50分别为8.2×105CFU/只、4.2×105CFU/只；在HD11巨噬细胞内的存活能力显著下降，在野生株CBE59感染的HD11中有一半的细胞中含有6～8个细菌，且有56.7%的细胞中观察到超过6个细菌；而在观察缺失株CBE59ΔHlyE-V时，菌量超过6个... 相似文献
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《畜牧与兽医》2015,(9):26-30
禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)是危害养禽业发展的重要病原之一。本试验利用Red同源重组技术构建APEC IMT5155唾液酸酶基因sia K1缺失株和互补株,系统比较其生物学特性的差异。生长曲线测定表明,缺失株比野生株和互补株生长速度加快,而野生株和互补株的生长速度无明显差异;生物被膜形成能力测定表明,sia K1缺失导致细菌生物被膜形成能力显著减弱,而互补株可恢复至野生株水平,说明sia K1基因缺失可影响禽致病性大肠杆菌的生长速度及生物被膜的形成。本研究为进一步探讨sia K1基因功能奠定了基础。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(1)
phoP/Q作为一种外在环境感受器,参与调节细菌对外部环境的适应性。本研究拟探讨phoP/Q双组分系统对禽致病性大肠杆菌(APEC)的生长、定植、毒力等生物学特性的影响。利用Red重组系统构建APEC AE 17株的phoP/Q双组分调控系统缺失株,并构建phoP/Q双组分调控系统回复质粒,转化缺失株,构建回复株。通过生长运动性试验、黏附入侵CEF细胞试验、毒力基因转录水平检测以及半数致死量(LD50)等试验比较野生株、缺失株、回复株的生物特性。与野生株相比,phoP-phoQ缺失不改变其生长特性;运动性较野生株下降63%;黏附与入侵CEF细胞能力分别降低69.83%(P0.01)和62.17%(P0.05);LD50显示毒力减弱13.3倍;polA、tsh基因转录水平分别上调41%、54%;sodA、iss分别下调64%和98%。phoP/Q双组分系统参与对APEC致病性的调控,该系统的缺失会降低APEC的致病性。 相似文献
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ZHANG Yaodong ZHU Hong AFAYIBO Doss&# h Jean Ap&# tre WANG Yao YI Zhengfei XIN Suhua TAO Chenglin LI Tao QI Jingjing TIAN Mingxing DING Chan YU Shengqing WANG Shaohui 《畜牧兽医学报》1956,51(12):3193-3198
To detect the drug resistance genes, the multiplex PCR method for drug resistance genes of β-lactams, tetracyclines, aminoglycosides, amphenicols, and sulfonamides were developed. Based on the sequences of drug resistance genes from GenBank, 17 pairs of specific primers were designed. Then, 4 multiple PCR assays were established through the optimization of PCR reaction conditions and primers concentrations (cat+floR+tetB+tetC; dfrA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1; aac3+aph3+aadA1+strB; tetA+cmlA+strA+sul3). The sensitivity and specificity of these assays were determined. The multiplex PCR assays were used to detect the drug resistance genes of 42 avian pathogenic Escherichia coli (APEC). The drug sensitivity of these APEC strains were also determined, which were compared to the distributions of drug resistance genes in these strains. The results showed that the 17 drug resistance genes were effectively and specifically amplified in these 4 optimized multiplex PCR assays. The detection limits of the 4 multiplex PCR were 103, 104, 104 and 105CFU of bacteria, respectively. The established multiplex PCR assays are specific and rapid for the detection of drug resistance genes in APEC strains, which showed 92.86% coincident with the drug resistance for these strains. The developed 4 multiplex PCR are simple and rapid assays for drug resistance genes detection, which can be used for the epidemiologic study for drug resistance genes. 相似文献
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张耀东 朱红 AFAYIBO Doss&# h Jean Ap&# tre 王瑶 易正飞 信素华 陶程琳 李涛 祁晶晶 田明星 丁铲 于圣青 王少辉 《畜牧兽医学报》2020,51(12):3193-3198
本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法，用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列，设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序，建立4组耐药基因（cat+floR+tetB+tetC；dfrA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1；aac3+aph3+aadA1+strB；tetA+cmlA+strA+sul3）的多重PCR反应体系。然后，检测多重PCR方法的特异性和敏感性。利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因，同时，检测其耐药性，比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性。结果显示，建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段，测序结果表明特异性较好。敏感性结果表明，4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为103、104、104和105CFU。禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致，其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86%。本研究建立的耐药基因多重PCR方法能简便、快速地检测常见的耐药基因，可用于耐药基因的传播、流行调查。 相似文献
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【目的】 分离张家口某地区羊源沙门氏菌并检测其血清型、毒力基因、耐药性及耐药基因，分析分离株表型和基因的相关性和差异性。【方法】 将样品用选择培养基增菌并纯化培养，挑选疑似的沙门氏菌单菌落进行革兰氏染色、镜检和生化鉴定。根据沙门氏菌属特异性基因invA的核苷酸序列进行PCR和血清型鉴定。利用SPF昆明小鼠对分离株进行致病性试验并测定其半数致死量。PCR扩增毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB，肠毒素基因stn，质粒毒力基因spvR。采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验，PCR扩增β-内酰胺酶耐药基因blaTEM、blaCMY和blaOXA，氟喹诺酮耐药基因qnrS、oqxA和oqxB，磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3，四环素类耐药基因tetB及氨基糖苷类耐药基因aadA1。根据PCR检测结果，将扩增的毒力基因和耐药基因进行测序，并与NCBI中相应的参照基因进行BLAST比对分析。【结果】 分离得到4株羊源沙门氏菌，血清型鉴定均为鼠伤寒沙门氏菌。分离株对小鼠具有致病性，4株分离株的半数致死量为5.67×107~6.45×107 CFU。分离株可检出毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB，肠毒素基因stn及质粒毒力基因spvR，检出率均在50%以上。分离株对复方新诺明、利福平、林可霉素、青霉素、氨苄西林耐药，对庆大霉素、环丙沙星敏感。分离株可检出β-内酰胺类耐药基因blaTEM、氟喹诺酮耐药基因qnrS、磺胺类耐药基因sul1和sul2。【结论】 本研究分离的羊源沙门氏菌的毒力表型与染色体和质粒携带的毒力基因有关。分离菌株携带β-内酰胺类、磺胺类耐药基因，与耐药表型相符，临床上可将庆大霉素和环丙沙星作为首选药。 相似文献
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GUO Changming WU Zhi ZHU Shanyuan WANG Yongjuan FENG Qi DONG Hongyan YUAN Cheng XU Hai WU Shuang 《中国畜牧兽医》2007,47(12):4076-4084
In this study,191 strains of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) were isolated from duck farms in and around Jiangsu province.The serotype,virulence gene distribution and drug resistance of 21 strains (one from each farm) were detected,and the correlation between serotype,virulence gene distribution and drug resistance was analyzed,in order to provide reference for the prevention and control of APEC.The serotypes of 21 APEC strains showed that there were 12 strains of O65,accounting for 57.14% of all strains.The results of virulence gene detection showed that 5 virulence genes had a high distribution rate,among which the positive rate of fimA gene was 100%,and the positive rates of ECs3737,ECs3703,tsh and irp2 genes were 90.5%,85.7%,57.1% and 42.9%,respectively.There were 6 strains (28.57%) with five virulence genes.The results of drug sensitivity test showed that 21 APEC strains had multiple drug resistance,and 100% strains were resistant to enrofloxacin,doxycycline,vancomycin and erythromycin.Among all the strains,85.71% and 14.29% were resistant to more than 10 and 21 kinds of drugs,respectively.The relationship among serotypes,virulence gene distribution and drug resistance showed that there were 13 strains with more than 4 virulence genes,9 of which were O65 serotypes.Among the 13 strains with more than 4 virulence genes,9 strains (69.23%) were resistant to more than 15 drugs,and 3 strains (23.08%) were resistant to more than 20 drugs.The results showed that the serotypes of Escherichia coli isolated from ducks in Jiangsu province and its surrounding areas were complex,carrying a variety of virulence genes,and the drug resistance was serious. 相似文献
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本研究旨在明确江苏及周边地区鸭禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）的血清型、毒力基因分布和耐药性之间的相关性,以期为APEC的防控提供依据。从江苏省及周边养鸭场分离了191株APEC,并对其中21株（每个养殖场选取1株）的O抗原血清型、毒力基因分布和耐药性进行检测。对21株APEC的血清型检测结果表明,O65血清型12株,占全部菌株的57.14%,O5、O28、O42、O87、O93、O138、O147血清型均为1株,其他血清型2株;毒力基因检测结果表明,5个毒力基因有较高的分布率,其中fimA基因的阳性率为100%,ECs3737、ECs3703、tsh和irp2基因的阳性率分别为90.5%、85.7%、57.1%和42.9%,含有5个毒力基因的菌株共有6株（28.57%）;药敏试验结果表明,21株APEC均存在多重耐药性,100%的分离菌株对恩诺沙星、强力霉素、万古霉素和红霉素耐药,85.71%的分离株对10种以上抗生素耐药,14.29%的菌株对21种药物都耐药;对血清型、毒力基因分布和耐药性之间的关系分析表明,含有4种以上毒力基因的菌株有13株,其中9株是O65血清型。在13株含有4种以上毒力基因的菌株中,耐15种药物以上的有9株（69.23%）,耐20种以上药物的有3株（23.08%）,表明含有4种以上毒力基因的菌株多重耐药现象严重。研究表明,江苏及周边地区鸭源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。 相似文献
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Ravi M Ngeleka M Kim SH Gyles C Berthiaume F Mourez M Middleton D Simko E 《Veterinary microbiology》2007,120(3-4):308-319
In order to evaluate the role of the AIDA-I of porcine diarrheagenic Escherichia coli strain PD20 serogroup O143 (AIDA-I+, STb+), a mutant strain PD20M (AIDA-I−, STb+) was generated from strain PD20 by an allelic exchange procedure. In addition, the full-length aidA gene was reintroduced into strain PD20M to generate the complemented strain PD20C (pTaidA, AIDA-I+, STb+). A non-pathogenic E. coli strain PD71 was used as negative control. Each strain was inoculated to newborn pigs via stomach tube. Severity of diarrhea was evaluated clinically and intestinal colonization was assessed by histology, immunohistochemistry (IHC), and transmission electron microscopy (TEM) including immunogold electron microscopy (IGEM). The adhesion pattern to HeLa cells, bacterial auto-aggregation and biofilm formation were evaluated in vitro. Pigs infected with strains PD20 or PD20C developed diarrhea 16 and 28 h after inoculation, respectively, in contrast to pigs infected with strains PD20M or PD71. Histology, IHC, TEM and IGEM examinations showed heavy bacterial colonization with biofilm formation in the large intestine, and marked in vivo expression of AIDA-I protein in pigs infected with strains PD20 or PD20C in contrast to pigs infected with strains PD20M or PD71. The in vitro assays showed marked diffuse adherence to HeLa cells, enhanced bacterial auto-aggregation and significant biofilm formation (p < 0.05) by the AIDA-I+ strains, when compared to AIDA-I− strains. These results demonstrate that expression of AIDA-I is essential for intestinal colonization and in vitro bacterial autoaggregation and biofilm formation. Thus, AIDA-I may be considered a significant virulence determinant in development of diarrhea caused by porcine diarrheagenic AIDA-I+ E. coli PD20 in piglets. 相似文献