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“三三法”快速检测沙门氏菌的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
将ＤＨＬ平板上产Ｈ２Ｓ和不产Ｈ２Ｓ的菌落分别用ＴＳＩ，ＬＭＡ，甘露醇或ＴＳＩ，ＬＭＡ，ＯＮＰＧ三管判定，辅以肠杆菌科诊断噬菌体０－１，Ｃ多价，Ｅ多价三滴法快速检测沙门氏菌的方法简称“三三法”。近两年来我们用此法检测了１２５批，３４１份样品中２３６株可凝菌株，检出沙门菌２７株，１１个血清型，经系统生化验证符合率１００％。表明该法具有快速，简便，准确，实用的优点。 相似文献
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1990年以来,我们先后对采自秘鲁、智利、美国、日本和台湾进口的鱼粉、鳗鱼饲料和冷冻水产品103批进行抽样检验,以常规法的预增菌和再经增菌培养后,划线平板作分离培养,对可疑菌落选用KI琼脂和赖氨酸动力琼脂(LMA)进行初步联合筛别培养,可快速判别鱼粉中沙门氏菌。结果多次检出肠道致病性沙门氏菌,有时连续多次在不同批进口鱼粉中检出多株多种血清型的沙门氏菌。最多一批鱼粉曾检出了九株五种血清型沙门氏菌。证明用此法优于旧的各种检验方法,具有快速、准确、检出率高的优点,适于口岸鱼粉检验快速验放的需要,现将检验方法 相似文献
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探索蛋鸡场沙门氏菌快速检测方法.经试纸条、分离培养初步确定沙门氏菌阳性菌株后,进行血清学分型和荧光PCR鉴定.在601份鸡棉拭子、粪便、饮水和饲料样品中分离出37株沙门氏菌,其中沙门氏菌D群2株、其他群35株.试纸条、分离培养和荧光PCR方法相比较,快速分离培养结合荧光PCR方法敏感、快速、准确,适合实验室检测;试纸条法快速、简便,适合蛋鸡场的快速初筛和日常监测;传统方法培养时间长,有待改进. 相似文献
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对89株禽源沙门氏菌临床分离菌株进行了血清型鉴定,鉴定出肠炎沙门氏菌（S．enteritidis）17株,纽波特沙门氏菌（Snewport）1株,鼠伤寒沙门氏菌（S．typhimurium）6株和鸡白痢沙门氏菌（S．pullorum）65株。结果表明,89株禽源沙门氏菌中有24株（27．0％）为能够引起人的沙门氏菌感染的血清型,具有重要的公共卫生学意义,而且这24株沙门氏菌中多重耐药菌株有12株（50．0％）。用微量稀释法检测了89株禽源沙门氏菌对18种抗菌药物的耐药性。检测结果表明,所有分离菌株均对阿米卡星和头孢曲松敏感;在使用的其他16种抗菌药物中,89株禽源沙门氏菌分离菌株对链霉素耐药率最高,为43．8％,其次为四环素、头孢噻吩、头孢噻呋、氟苯尼考、奥比沙星、萘啶酸和氨苄西林,耐药率分别为30．3％、22．5％、22．5％、20.2％、20.2％、19．1％和19．1％;对氯霉素、环丙沙星、沙拉沙星、恩诺沙星、左氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素呈现轻度的耐药性,耐药率分别为10．1％、9．0％、9．0％、7．9％、7．9％、6．7％、6.7％和2．2％。 相似文献
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采用PCR方法对235批饲料原料中沙门氏菌进行分离鉴定以及侵袭蛋白A(invA)基因检测和DNA序列分析,了解饲料原料中沙门氏菌分布情况以及invA基因核苷酸序列差异及蛋白结构,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。结果发现分离检测出的沙门氏菌均来自肉骨粉,阿哥纳沙门氏菌(Salmonella agona)2株,山夫登堡型(S.senftenberg)沙门氏菌2株。核苷酸基因序列分析显示,invA基因较为保守,编码蛋白为疏水性蛋白,存在3个跨膜区域,同源性在99.4%～100%之间,系统发育树上分析不同血清型不在同一分支上。 相似文献
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为了解昆明周边养鸡场的沙门氏菌耐药状况,采集昆明周边5家养殖场的50只疑似沙门氏菌病的发病鸡的肝脏和脾脏进行细菌分离,通过常规生化特性鉴定和PCR分子鉴定,然后通过药敏试验检测分离株耐药性,通过PCR技术对分离株的耐药基因进行检测。结果表明:共分离出8株沙门氏菌,8株菌的靛基质试验、尿素酶试验和VP试验结果均呈阴性,S3、S4菌株不产H2S,柠檬酸试验也呈阴性,针对沙门氏菌设计特异性引物进行扩增,得到目的条带495 bp,与预期一致;在药敏试验中,分离株对氨苄西林和头孢氨苄有较强的耐药性,对四环素中介耐药,对恩诺沙星、加替沙星、卡那霉素、庆大霉素以及氧氟沙星敏感,说明分离株已出现耐药性;在所检测的6种耐药基因中,β-内酰胺类的bla TEM-1和喹诺酮类的GyrA基因检出率为100%,四环素类的tetA基因未被检出,其他三种耐药基因aadA1、tetB和strB检出率均在50%以上,说明分离株耐药基因的携带率较高,需要引起养殖业的重视。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(6)
为分离健康奶牛阴道乳酸菌并鉴定其益生特性,本研究采集健康奶牛阴道临床样品并分离筛选到4株乳酸菌,对其抑菌活性、产酸性能、产H_2O_2能力及对抗生素敏感性进行检测,通过16S rDNA序列分析鉴定乳酸菌分离株。结果显示,4株乳酸菌具有较好的抑菌活性和产酸性能,在体外均能够产生H_2O_2,并对万古霉素具有抗性;经鉴定4株乳酸菌分别为唾液乳杆菌1株、黏膜乳杆菌2株、坚强肠球菌1株。本研究分离鉴定的4株乳酸菌均可以作为候选益生菌株用于奶牛子宫内膜炎防治。 相似文献
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沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据沙门氏菌fimY基因建立了用于检测沙门氏菌的通用PCR方法。对收集的A-F群标准菌株和临床分离的60株沙门氏菌分离株和11种非沙门氏菌进行PCR检测,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果所有沙门氏菌均扩增出526bp的特异性条带,而非沙门氏菌均未扩增出任何条带。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中93cfu的沙门氏菌,还可检出含3cfu的样品用BP预增菌或MM增菌后的菌液。说明该方法敏感性高、特异性强。采用直接菌体加入法、热裂解、反复冻融、CTAB碱裂解法和柱式试剂盒提取法分别提取核酸模板,结果CTAB法效果最好,但操作烦琐,而直接菌体加入法和热裂解法可以达到和柱式试剂盒同样的效果,且操作简便快速、经济、效果好,值得推广应用。 相似文献
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鸡白痢沙门氏菌PCR检测技术的建立与应用 总被引：1，自引：0，他引：1
为鸡沙门氏菌的临床检测提供了一种更快速、敏感、特异的诊断,参照GeneBank中已公布的的鸡白痢沙门氏菌fliC基因序列,合成出了一对引物,使用PCR法对1株沙门氏标准菌株和其他3株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增并检测其敏感度。采用上述技术,对12份可疑病料及10份饲料进行PCR检测,同时与传统检测方法进行比较。结果表明1株沙门氏菌PCR产物出现600 bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明所设计引物具有沙门氏菌特异性;通过敏感度检测,此PCR体系能检出50 pg以上的细菌DNA,敏感性较高。运用PCR法阳性检出率及敏感性均高于常规检测方法。由此可见,沙门氏菌PCR检测是一种快速、敏感和高度特异的诊断方法。 相似文献
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用ELISA检测蛋和雏鸡中的肠炎沙门氏菌 总被引：1，自引：0，他引：1
将以前用的快速检测环境样品中肠炎沙门氏菌（ＳＥ）的ＥＬＩＳＡ法，经改进后用于食物样品的检测。本实验选择夹心ＥＬＩＳＡ法，捕食阶段用亲和提纯的兔多克隆抗体，检测阶段用高特异单克隆抗体。除ＳＥ以外的３９种细菌，其中包括３２株沙门氏菌，均用ＥＬＩＳＡ法做了交叉试验，结果除ＳＥ外无反应性。将ＳＥ加于食物样品匀浆（雏鸡皮肤、肉和蛋）中测试ＥＬＩＳＡ法的敏感性，用ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥ，在浓度为１０％（重量／体 相似文献
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目的建立一种能同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的快速检验。方法根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157:H7 RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应条件,建立可同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的检验,并与miniVIDAS快速初筛方法和SN标准方法进行比较。结果本研究建立的双重荧光PCR方法可同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7,对纯菌的检测灵敏度均低于10CFU/双重荧光PCR反应体系。应用本方法检测36株标准/参考菌株,结果只有9株目的菌标准/参考菌株出现特异性扩增,其余27株非目的菌均呈阴性反应。定量检测重复性试验结果,批内和批间的变异系数均小于2%。应用本方法检测人工染菌样品,结果与miniVIDAS和SN方法检测结果一致,但检测时间比miniVIDAS快了3倍,比SN标准快了10多倍。结论本研究建立的双重荧光PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好的优点,可在8小时内完成样品沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的检验。 相似文献
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用经甲醛灭活的牛病沙门氏菌免疫 BALB/C 小鼠脾细胞与 SP_2/O 小鼠骨髓瘤细胞融合。经显微凝集法筛选和2次克隆化培养后,获得5株分泌抗牛病沙门氏菌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其核内染色体数为93—99,经免疫双扩散和 ELISA 试验,4株分泌的 McAb 分别为 IgG_1、IgG_(2a)、IgG_(2b)和 IgM,1株未能测出亚类归属,其中 SB—2C_1和SB—1H_8McAb 在与19种常见肠道菌的交叉试验中,只与牛病沙门氏菌发生特异性反应,经过连续传代和冻存,5株细胞分泌特异性单克隆抗体的性能稳定,抗体于4℃和-20℃条件下保存1月后其滴度不变。 相似文献
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沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进行双重PCR扩增,结果显示22株沙门氏菌均出现与理论值大小497bp相符的属特异性条带,作为对照的3株大肠杆菌则未显示该条带,并且7株肠炎沙门氏菌均出现与理论值大小293bp相符的特异性条带。另外,敏感性试验结果显示肠炎沙门氏菌50336和鸡白痢沙门氏菌SP1的模板浓度分别为18ng和15ng时仍能清晰扩增出特异性条带。上述结果表明建立的PCR方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等特点,为公共卫生、食品安全、畜牧兽医及出入境安检等多部门检测和监测沙门氏菌提供了前提基础和技术保障。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2017,(3)
为建立鸡白痢沙门氏菌与其他常见致病性沙门氏菌的血清型特异性快速PCR检测方法,本研究通过对Gen Bank中鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌全基因组进行生物信息学分析,确定SEEP17495基因为鸡白痢沙门氏菌的检测靶基因,设计特异性引物,建立了一种能够直接从粪便样品中检测鸡白痢沙门氏菌的PCR检测方法。结果显示:该方法对于两株鸡白痢沙门氏菌均可以特异性地扩增出356 bp的目的片段,但对于7株常见非沙门氏菌致病菌和29株其他常见致病性沙门氏菌血清型的扩增结果均为阴性。该方法无论检测鸡白痢沙门氏菌纯培养菌,还是检测模拟鸡粪样品中的鸡白痢沙门氏菌,检测的灵敏度均为103cfu/m L。本研究建立的PCR检测方法具有良好的特异性和灵敏性,并且能够快速检测出粪便样品中的鸡白痢沙门氏菌,为鸡白痢沙门氏菌的检测提供了一种快速、有效的方法。 相似文献
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为了解山东地区驴源沙门氏菌的流行情况及其生物学特性,试验将采自山东多地的14份驴流产病料及137份驴粪便样本分别接种于沙门氏菌显色培养基中对沙门氏菌进行分离培养,提取细菌基因组DNA后采用双重PCR方法判定分离菌是否为沙门氏菌并进一步判定是否为马流产沙门氏菌,并对分离到的沙门氏菌进行血清型鉴定、生化试验、细菌运动力和生物膜形成能力检测及药敏试验,选取部分菌株进行致病性试验,并采用双层平板法检测分离菌对9株噬菌体A18028、C59102、F59102、F18024、F18038、E17016、DS2、DS4、5FS4的敏感性。结果表明：从驴流产病料中共分离到14株马流产沙门氏菌(A1～A14株);从驴粪便样本中共分离到22株其他血清型沙门氏菌(F1～F22株),其中F1株为山夫顿堡沙门氏菌,F2、F3、F4、F5、F7、F8、F9、F10、F12、F13、F15株为肯塔基沙门氏菌,F6、 F11株为Give沙门氏菌,F14株为乙型副伤寒Java型沙门氏菌,F16、F20株为阿哥纳沙门氏菌;F17株为鼠伤寒沙门氏菌,F18、 F19株为汤卜逊沙门氏菌,F21株为阿伯丁沙门氏菌,F22株未... 相似文献