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为建立测定血清中猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外毒素ApxI中和抗体的方法,本研究采用(NH4)2SO4沉淀法从血清10型APP培养液中经盐析浓缩提取具有溶血活性的天然毒素ApxI,将毒素与待检血清在37℃孵育2 h,加入4％猪红细胞悬液并反应0.5 h,利用酶标仪测定反应混合物上清液的OD540nm值判断溶血程度,计算... 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎嗜血杆菌(HPP)又称胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种猪的呼吸道传染病,其主要造成猪急性纤维素性胸膜肺炎或慢性局灶性坏死性肺炎。APP是有荚膜的革兰氏阴性小杆菌,是对猪有高度宿主特异性的呼吸道寄生菌。高度保守的弱溶血毒素ApxⅣ存在于APP15个血清型中,具有特异性。在体外培养的APP不能检测到该毒素,只有在体内感染(自然感染)的情况下才能够检测到ApxIV毒素及其抗体。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究 总被引：8，自引：2，他引：8
利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ，提取表达产物包涵体，再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌，和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗，免疫BALB／c小鼠，间隔2周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素I、Ⅱ、Ⅲ的EuSA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫2周后用5LDso的猪胸膜肺炎放线杆菌1型、7型菌株进行攻毒。结果发现第2次免疫后抗体水平显著升高，用2种血清型进行攻毒后其保护力分别为83．3％和91．7％，从死亡小鼠的体内分离到了攻毒菌株，初步的动物试验表明此种新型亚单位菌苗对同型和异型的APP菌株具有较好的保护力，为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的细菌性呼吸道传染病。Apx毒素(actinbacillus pleuropneumoniae toxin)是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素,在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中,Apx毒素起了重要的作用。 相似文献
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用间接血凝试验检测猪传染性胸膜肺炎 总被引：20，自引：0，他引：20
经戊二醛化－鞣酸化处理的绵羊红细胞用胸膜肺炎嗜血杆菌（ＨＰ）抗原致敏,以间接血凝试验（ＩＨＡ）检测猪传染性胸膜肺炎病血清抗体。致敏红细胞抗原的最佳浓度为１００－１５０μｇ／ｍＬ,超免疫血清的抗体效价达１：５１２－１：１０２４,对人工感染１４ｄ的猪血清阳性检出率达８０％,与猪瘟、猪肺疫、喘气病、猪萎缩性鼻炎阳性血清无效叉反应。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离及PCR诊断方法的建立 总被引：14，自引：3，他引：14
APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442 bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段.通过玻板凝集试验鉴定这三株野毒株为血清1型APP.所建立的PCR方法能检测的DNA量最高敏感度为28pg.表明本文所建立的对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性. 相似文献
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《养猪》2016,(1)
为了解墨竹工卡和工布江达两县的川藏公路沿线藏猪养殖较为密集区由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的猪传染性胸膜肺炎(PCP)的流行情况,研究利用商品化的间接血凝试验(IHA)和猪传染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA试剂盒对沿线两县的工卡镇、扎西岗乡、日多乡、加兴乡和金达镇5个乡镇藏猪600份血清同时进行APP抗体检测。结果显示:阳性血清共307份(51.17%),从乡镇区域分布的APP血清学抗体检测结果看,金达镇藏猪APP抗体阳性率最高,达58.33%,工卡镇猪APP抗体阳性率41.67%为最低;不同年龄藏猪的APP血清学抗体检测结果看,仔藏猪APP抗体阳性率较高,达59.00%,1岁以上藏猪APP抗体阳性率偏低,为47.25%。 相似文献
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为研究痤疮丙酸杆菌(PA)对小鼠抗胸膜肺炎放线杆菌感染的影响,从人的面部皮肤分离得到革兰氏阳性短杆菌,通过培养性状观察、生化试验、PCR鉴定,证实7株菌为PA.经ELISA检测发现PA与猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)存在免疫交叉反应.以PA免疫小鼠15 d后用10倍LD50的APP攻毒,观察1周,最高保护率为60%;将制备的抗PA高免血清注射小鼠,分别用10倍LD50的APP血清1型、APP血清5型感染小鼠,保护率均为100%.结果表明,PA对APP血清1型,APP血清5型感染具有良好的保护作用. 相似文献
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为了解海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎(PCP)的感染情况,采集海南省8个市县16个不同规模猪场血清样品1 286份,用ELISA方法对猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)ApxⅣ抗体进行检测,分析APP的感染情况。结果显示,1 286份猪血清样品共检出阳性样品436份,抗体阳性率为33.90%。其中,检测母猪血清326份,抗体阳性率为47.85%;检测哺乳仔猪血清324份,抗体阳性率为37.65%;检测保育猪血清316份,抗体阳性率为18.99%;检测育肥猪血清320份,抗体阳性率为30.63%。8个市县均有APP感染,其中文昌市APP抗体阳性率最高;不同规模猪场均有APP感染,其中中型规模猪场APP抗体阳性率最高;不同品种猪均有APP感染,其中杜长陆三元杂猪APP抗体阳性率最高。说明PCP在海南省部分规模猪场中普遍存在,对猪场进行PCP的控制是十分必要的。 相似文献
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为了解江西省猪群猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）感染现状,本试验利用APP江西分离株研制了抗体间接血凝检测法（IHA）。试验将纯化的APP江西分离株培养菌液反复冻融,经超声波裂解处理后提取菌体抗原,致敏经戊二醛固定鞣酸化的兔红细胞,成功建立了APP抗体的IHA法。应用该法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒等病毒的阳性血清进行检测试验,结果均为阴性;对大肠杆菌、沙门氏菌、副猪嗜血杆菌阳性血清检测均为阴性。不同批次APP抗原经IHA检测,结果显示重复性好。本试验结果表明所建立的APP抗体IHA检测法有较好的特异性和重复性,为下一步血清学调查奠定基础。 相似文献
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通过鲎素抗菌肽和超高静水压联合作用,制备出一种胸膜肺炎放线杆菌菌影。利用胸膜肺炎放线杆菌血清5型（CVCC263）制备菌影并检测其灭活率。CVCC263菌影疫苗接种免疫仔猪,二免14d后攻毒,每天测量体温,并观察精神状态,呼吸,食欲等。攻毒第8天对存活猪进行剖杀,测量肺部病变面积,进行病理检测。结果显示,免疫组抗体效价及血清中的IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4含量均较对照组显著增加。免疫组临床症状和肺部病变面积均小于对照组。CVCC263菌影疫苗免疫仔猪抗APP感染的保护效果是明显的,并且APP5型的菌影疫苗可对APP7型感染有交叉保护。 相似文献
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Apx毒素在胸膜肺炎放线杆菌致病性和免疫原性方面具有重要作用。为研究ApxI毒素的免疫活性，参照胸膜肺炎放线杆菌血清10型ApxIA基因核酸序列（D16582）设计1对引物．利用PCR自该菌株基因组DNA中扩增出3158bp的ApxIA基因片段，经克隆和序列测定后转入原核表达载体pET-32a中，通过转化BL21（DE3）并在IPTG诱导下进行原核表达，表达出约的融合蛋白，SDS-PAGE和Westernblotting鉴定结果显示表达产物大小约120kDa，且表达产物可与该菌株免疫兔血清发生结合反应。ApxIA基因的克隆和原核表达为研究ApxI毒素的免疫原性以及在胸膜肺炎放线杆菌中的生物学活性奠定了基础。 相似文献
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本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法.以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒索抗体.经过研究确定抗原包被浓度为0.32 btg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3 200,血清抑制率大于40 %为阳性.应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2 %.试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便.本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值. 相似文献
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将副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）血清型4、5型分离菌株经超声波破碎处理后的产物致敏醛化红细胞，建立了检测HPS抗体的间接血凝试验方法。最适反应条件为绵羊红细胞30℃醛化5h，4、5型菌株浓缩抗原以1：8稀释致敏红细胞。免疫猪2周后检出率达89％。对15种HPS血清型阳性血清进行检测，结果均为阳性；对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪肺炎支原体、猪链球菌、猪肺疫巴氏杆菌、Ⅰ相支气管败血波氏杆菌及胸膜肺炎放线杆菌阳性血清进行检测，结果均为阴性。敏感性为琼脂扩散试验的16倍。对1665份猪血清进行检测，阳性率为47．1％。结果表明，该方法敏感性较高，特异性强，重复性好，可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及副猪嗜血杆菌的流行病学调查。 相似文献