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ＡＥＶＶａｎＲｏｅｋｅｌ鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚神经胶质细胞（ＣＥＢ）传代,用盲传至第６代的ＣＥＦ、ＣＥＢ制成荧光标本。建立了ＡＥＶ荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度１∶１０和荧光抗体ＦＩＴＣ羊抗鸡ＩｇＧ的稀释度１∶１０的工作浓度。通过对ＮＤＶ、ＭＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＩＶ、Ｒｅｏ等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群ＡＥＶ抗体的检测。 相似文献
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应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、 相似文献
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用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。 相似文献
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应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
本文对间接荧光抗体染色法监测鸡传性支气管炎抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡性染性支气管炎病毒的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６－４８小量的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件要非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调 相似文献
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根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二各病毒混合毒种的最适稀释比例，将混合毒种接种９－１０龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养），使接种鸡胚９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，０．０１ｍｌ尿囊液含：ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０、ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。收获同胚培养的胚毒，制备同胚培养的胚毒，制备油乳剂灭活疫苗。用三批疫苗分别免疫１８日龄雏鸡，免疫后４周二联疫苗的有效抗体分别为：ＮＤ血凝抑制抗体（ＨＩ）≥１：１６、ＩＢ中和抗体 相似文献
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用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。 相似文献
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本研究根据ＮＤＶ、ＩＢＶ二种病毒能在鸡胚中繁殖的特点，通过筛选上述二种病毒的最适稀释比例，将混合毒种接种９～１０日龄鸡胚尿囊腔内（简称同胚培养）使接种鸡胚尿囊液９６ｈ二种病毒毒价同时达到高峰，每０．１ｍｌ尿素液含ＮＤＶ≥１０＾８ＥＩＤ５０，ＩＢＶ≥１０＾７ＥＩＤ５０。本试验用兔抗ＮＤＶ，ＩＢＶ血清抗体封闭相应病毒测定混合毒获得成功，本研究目的在于为制备鸡二联油乳灭活功时改进繁毒方法，降低疫苗成本。 相似文献
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采用鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病毒（ＩＢＤＶ－２５１２）研制了检测ＩＢＯＶ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒。抗原最佳包被浓度为５．１２μｇ／ｍｌ，被检血清最佳稀释度为１：２００，酶标结合物最佳工作浓度１：１０００．本试剂盒与美国ＫＰＩＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平，且易于操作．在４℃可稳定保存６个月、对北京地区４个非免疫鸡群的１０３只鸡测得其阳性率为５４％，对４５只ＳＰＦ鸡的阳性率为０％。 相似文献
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异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用 总被引：4，自引：0，他引：4
本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性 相似文献
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鸡腺胃型传染性支气管炎的诊断及病毒分离鉴定 总被引：12，自引：0，他引：12
天津市部分鸡场发生一种以病鸡极度消瘦、拉稀和死亡为主要特征的传染病,经鉴定确诊为鸡腺胃型传染性支气管炎（ＧＩＢ）,并分离出ＩＢＶ ＪＢ９７０２株,ＨＡ效价为２＾１２,ＥＩＤ５０为１０＾－６．８１／０．２ｍＬ。病毒干扰试验中,ＩＢＶ ＪＢ９７０２＋ＮＤＶ ＬｓＡｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾４～６,ＬａＳｏｔａ接种鸡胚ＨＡ效价为２＾１０～１１;用ＩＢＶ ＪＢ９７０２病毒液１：１０稀释后感染经ＩＢＶ Ｈ 相似文献
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作者研制了一种新型抗ＩＢＤＶ疫苗。该疫苗是将抗血清中所含的抗ＩＢＤＶ抗体（ＢＤＡ）与活的ＩＢＤＶ在冻干前混合制成。为设置ＢＤＡ与ＩＢＤＶ的不同组合，５￣８０ｕＢＤＡ／５０μｌ与１００ＥＩＤ５０／５０μｌ的ＩＢＤＶ悬液在试验１中混合；在试验２中，１０￣９７７ＥＩＤ５０／５０μｌＩＢＤＶ悬液与２４ｕＢＤＡ／５０μｌ混合。疫苗制备物颈部皮下注射于１日龄ＳＰＦ鸡，利用囊重、囊眼观检查和ＩＢＤＶ抗体效价对不 相似文献
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抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用 总被引：1，自引：1，他引：0
应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
通过中和试验证明，Ｂ３４腹水单克隆抗体中和ＩＢＤＶ ＣＡ株和中和效价高达１：４２００００。经１０倍稀释后，能等量中和含毒量为１０＾６．６２５ＴＣＩＤ５０／ｍｌ的ＩＢＤＶ ＣＡ株细胞毒。利用Ｂ３４腹水单克隆抗体建立了ＭＡｂ－ＡＣ－ＥＬＩＳＡ，可用于测定ＩＢＤＶ ＣＡ株细胞的病毒含量，与ＴＣＩＤ５０之间的相关系数为０．９４。 相似文献
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使用ＳＰＦ鸡制备的抗ＮＤＶ（新城疫病毒）高免血清可中和ＮＤＶ种毒或鸡新城疫疫苗ＬａＳｏｔａ株１０~７ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ（即１０个使用剂量），并具有高度持异性。对于ＮＤＶ疫苗实验室模拟污染ＩＢＶ传染性支气管炎病毒）研究表明，用ＮＤＶ高免血清中和ＮＤＶ疫苗１０个使用剂量后，可检测到ＩＢＶ１０~（－６）污染水平。对于某生药厂ＮＤＶＬａＳｏｔａ疫苗中疑似ＩＢＶ污染的样品进行检测，排除了ＩＢＶ污染。文章同时证明了免疫胚接种ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒后胎儿表现出类似感染了ＩＢＶ的病变。 相似文献
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本文用提纯的ＩＢＤＶ细胞毒为抗原,抗鸡Ｉｇ单抗１Ｂ７ＨＲＰ酶结合物为第二抗体建立了检测ＩＢＤＶ抗体的间接ＥＬＩＳＡ。在此基础上研制出ＩＢＤＶ抗体检测诊断试剂盒。经对１２００份血清进行检测,结果表明：本试剂盒特异性强,灵敏度高,重复性好,快速稳定,易于操作,为雏鸡ＩＢＤＶ母原抗体和疫苗注射后特异性抗体检测提供了可靠的诊断工具。 相似文献
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彩鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病毒（ＩＢＤＶ－２５１２）研制了检测ＩＢＤＶ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒。抗原最佳包被浓度为５．１２μｇ／ｍｌ，被检血清最佳稀释度为１：２００，酶标结合物最佳工作浓度１：１０００。本试剂盒与美国ＫＰＩＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平，且易于操作，在４℃可稳定保存６个月。对北京地区４个非免疫鸡群的１０３只鸡测得其阳性率为５４％，对４ 相似文献
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马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的… 总被引：5，自引：0，他引：5
用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳 相似文献
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我们对国外引入的ＩＢＤ弱毒疫苗进行了分离，复制和测定，该病毒可接种ＳＰＦ鸡胚增殖，致难胚死亡，并产生ＩＢＤ病变；在ＳＰＦ鸡胚ＣＦＦ上繁殖，产生ＣＰＥ变化，并可被行异性ＩＢＤ抗血清中和；琼脂扩散与ＩＢＤ（＋）血清有明显的沉淀线，因此说明所分离的毒株是ＩＢＤ病毒，并测得其毒价为１０＾－６ＴＣＩＤ５０。 相似文献
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鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较 总被引：2，自引：0，他引：2
从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。 相似文献
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禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献