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1.
为深入探讨嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)主要粘附素在菌体侵入宿主和介导宿主产生免疫过程可能扮演的角色,对Ah菌ZN1株主要粘附素重组基因的表达产物的部分生物学功能进行分析。通过酶联免疫吸附试验、细胞与Ah菌的粘附试验及粘附抑制和阻断试验,研究分析克隆表达的Mah-TrxA(硫氧还蛋白与主要粘附素形成的融合蛋白)生物学功能。结果显示:克隆表达的Mah-TrxA融合蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,对不同Ah菌株有交叉粘附抑制的作用,抗原竞争性抑制试验和抗体阻断试验均能显著减少不同Ah菌株对EPC的粘附作用。因此,克隆表达的Mah-TrxA确为ZN1菌株的主要粘附素;基因工程技术以融合蛋白形式表达的Mah-TrxA与野生菌株ZN1表达的主要粘附素具有类似的生物学活性。 相似文献
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迟缓爱德华氏菌的粘附特性 总被引：4，自引：0，他引：4
用绵羊红细胞对不同来源的１５株迟缓爱德华氏菌作血凝试验。结果表明，１５株ＥＴ均具有血凝性，且不能为甘露糖，蔗糖，葡萄糖所抑制。分别用甲醛，戊二醛，胰蛋白酶处理ＥＴ的模式菌株ＥＴ９９菌体，能抑制细菌血凝。提纯的ＥＴ９９菌株的鞭毛蛋白，外膜蛋白均无血凝性。同时用ＨＥｐ－２细胞分析了１５株ＥＴ的细胞粘附特性。结果表明，有１０株ＥＴ能粘附ＨＥｐ－２细胞、粘附菌数大于１０ＣＦＵ／细胞。分别用甲醛，戊二醛，胰 相似文献
3.
【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。 相似文献
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【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。 相似文献
5.
鸡大肠杆菌1型菌毛单克隆抗体的研制 总被引：2，自引：0，他引：2
将菌毛化的大肠杆菌C600（fim^ ）经0.3%甲醛灭活后作为免疫原，经淋巴细胞杂交瘤技术，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选获得1F4－1和2C32株抗F1菌毛a或b因子抗原单抗和1株抗F1c因子抗原单抗，它们均为IgG1。免疫印迹试验结果表明：3株单抗均能同禽大肠杆菌1型菌毛反应，识别分子质量为17ku左右的菌毛蛋白。同时对沙门氏菌及猪源大肠杆菌进行检测，结果均无交叉反应性，说明禽病原性大肠杆菌F1菌毛与沙门氏菌1型菌毛及猪大肠杆菌粘附素之间存在很大差异。 相似文献
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猪链球菌二氢硫辛酰胺脱氢酶的原核表达及其粘附相关功能初探 总被引：1，自引：1，他引：0
目的:克隆、表达猪链球菌2型菌株ZY05719的膜蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6),分析其重组蛋白的生物学活性。方法:基于GenBank中S.suis P1/7SSU1634蛋白的基因序列设计引物,克隆ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析;构建pET28a-hm6原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组HM6蛋白即二氢硫辛酰胺脱氢酶用His亲和层析镍柱纯化后,通过SDS蛋白电泳鉴定分析并利用新西兰大白兔制备抗血清,研究其酶活性及其在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中的作用。结果:克隆了1 761bp的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,纯化的70kD重组融合蛋白具有良好的酶活性和免疫原性,且在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中具有作用。结论:成功克隆、表达了ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,初步揭示了其生物学活性,为深入研究二氢硫辛酰胺脱氢酶在猪链球菌致病机制中的作用奠定了基础。 相似文献
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用单克隆抗体展示猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白在茵体表面的形态和分布 总被引：1，自引：1，他引：0
用猪链球菌2型江苏分离株HA9801全苗免疫BMb／c小鼠，取其脾细胞和Sp2／0细胞融合，以电泳纯溶菌酶释放蛋白(MRP)为抗原，间接ELISA筛选MRP抗体阳性孔并用有限稀释法单克隆化，剔除与胞壁杂蛋白交叉反应阳性的克隆，获得3株特异针对MRP的单克隆抗津细胞株3A3、4D5和6B4。将HA9801和HEp-2细胞共孵育，使细菌粘附于细胞表面，用3株MRP单克隆抗体联合介导FITC标记HA9801菌体表面的MRP，激光共聚焦显微观察，代表MRP的荧光图像显示，MRP是一线形表面大分子，一端锚定在细胞壁，另一端向空中伸展，其分布状态有单在和丛集2种。 相似文献
9.
将菌毛化的鸡大肠杆菌国内分离株GL7(O78)灭活后作为免疫原,经淋巴细胞杂交瘤技术,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,获得3E1、3H1、4A9和5G4共4株能稳定分泌1型菌毛抗体的杂交瘤细胞,它们均为IgG。免疫印迹试验结果表明:4株单抗均能同鸡大肠杆菌1型菌毛反应,识别分子质量为17~17.5 ku的菌毛蛋白。同时对鸡大肠杆菌表达1型菌毛的分离株进行检测,结果表明同一血清型或不同血清型间的鸡病原性大肠杆菌1型菌毛之间存在差异,O血清型不能完全体现菌株间的遗传相关性。 相似文献
10.
贵州仔猪大肠杆菌分离物K88菌毛的鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
从贵州省７个种猪场发生腹泻的仔猪分离致病性细菌、对１６株病原细菌分离物进行了生化鉴定，１５株细菌符合然氏大肠杆菌的生化特征，其中１０株是普通大肠杆菌；５株是类大肠杆菌。两株细菌能在血琼脂平板上产生溶血素、两株细菌经抗Ｄ－甘露糖血凝试验表明能产生Ｋ８８菌毛；阳性率达１２．５％。本文还对Ｋ８８菌毛，肠毒素溶血素与仔猪大肠杆菌病的流行病学关系进行了讨论。 相似文献
11.
乳杆菌竞争性抑制两种病原菌粘附上皮细胞的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】研究嗜酸乳杆菌(LAB1)在体外模拟预防和治疗条件下,竞争性抑制致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli )和沙门氏菌(Salmonella choleraesuis,S.cho)对仔猪空肠上皮细胞系（IPEC-J2）的粘附作用。【方法】 用LAB1预处理IPEC-J2后再用E. coli或S.cho攻毒为模拟预防实验;用E. coli或S.cho先攻毒IPEC-J2后再用LAB1处理为模拟治疗试验。提取粘附后的3种菌及IPEC-J2的DNA,使用文献记载和自行设计的引物,利用实时荧光定量PCR方法,量化检测LAB1与E. coli 、S.cho之间的竞争性粘附率。【结果】在模拟治疗试验中,在高（1.0×109 CFU）、中（1.0×108CFU）、低（1.0×107CFU）3种浓度的LAB1处理条件下,能显著抑制高、中浓度S.cho对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）;在模拟预防试验中,相同浓度的LAB1能显著抑制相同浓度的S.cho对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）。在模拟预防和治疗试验中,3种浓度LAB1均能显著抑制低浓度E. coli对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）,高浓度LAB1能显著抑制高、中浓度E. coli对IPEC-J2的粘附（P＜0.05）。【结论】在体外试验条件下,LAB1对E. coli及S.cho粘附IPEC-J2有竞争性抑制作用。在模拟预防和治疗试验中,LAB1对E. coli及S.cho粘附IPEC-J2的竞争性抑制作用效果有所不同。 相似文献
12.
JIANG Dai-xun LIU Shu-rong ZHANG Mei-hua ZHANG Tao MA Wen-jing MU Xiang CHEN Wu 《农业科学学报》2015,14(1):140-147
Luteolin is an active ingredient found early from Folium perillae and Flos lonicerae, and has a specific inhibition on phosphodiesterase 4(PDE4) activity in vitro. Researches show luteolin has pharmacological effects of anti-inflammation, anti-anaphylaxis, antitumor, antioxidant, protection of nervous system and so on, and has mainly been used for the treatment of respiratory inflammatory diseases, cancer and cardiovascular disease in clinic. PDE4, specific to hydrolyze cyclic AMP(c AMP), is considered to be a new anti-inflammatory target due to the decisive role on c AMP signal in inflammatory cells such as neutrophils. In order to explore the anti-inflammatory mechanism, we further studied the effects of luteolin on the activity and expression of PDE4, the expression of lymphocyte function-associated antigen-1(LFA-1) and macrophage-1(MAC-1) in neutrophils, and the adhesion of neutrophils and endothelial cells. The results showed that luteolin had a dose-dependent inhibition on both bare PDE4 activity and PDE4 in cultured neutrophils, and had an obviously promotive effect on gene expressions of PDE4 A, 4B and 4D in later period. Luteolin had a significant inhibitory effect on neutrophils adhesion and LFA-1 expression in early stage, and had no obvious effect on MAC-1 expression. Therefore, luteolin can inhibit LFA-1 expression of neutrophils, then inhibit the adhesion of neutrophils and endothelial cells, and the mechanism is at least related with the inhibition of PDE4 activity. 相似文献
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一株无致病力的嗜水气单胞菌的分离与特性分析 总被引：5，自引：2，他引：5
从南京某无病鱼塘水体中分离到一株革兰氏阴性、有运动力的短杆菌，定名为Ｗ－１株。其生化特性为氧化酶阳性，发酵葡萄糖产酸产气，发酵甘露醇、水杨素和阿拉伯糖，不发酵肌醇。从该菌株培养物的上清中提取的外毒素，具有细胞毒性与溶血性；用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素的单抗进行检测，乳胶凝集试验及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性结果。电镜观察未发现该菌株有晶格样排列的Ｓ层和菌毛，与Ｊ－１株Ｓ蛋白抗血清及Ｒ菌毛抗血清作免疫转印 相似文献
14.
【目的】研究磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰抑制中性粒细胞黏附的有关分子机制,明确其抗炎的主要信号通路,为PDE4选择性中药抑制剂的药理研究提供参考。【方法】猪中性粒细胞的提取采用密度梯度离心法,中性粒细胞与猪内皮细胞的黏附采用虎红比色法,中性粒细胞黏附分LFA-1和Mac-1表达量的检测采用流式细胞技术,中性粒细胞p38MAPK、ERK等磷酸化活性检测采用western blot法。【结果】咯利普兰可显著抑制fMLP刺激的中性粒细胞和内皮细胞的黏附(P0.05),极显著抑制fMLP刺激的中性粒细胞LFA-1和Mac-1的表达(P0.01),阻断fMLP刺激的中性粒细胞ERK磷酸化活性(P0.01),而对p38MAPK磷酸化活性无显著影响。【结论】咯利普兰可抑制中性粒细胞和内皮细胞黏附,其机制与阻断中性粒细胞ERK磷酸化进而抑制LFA-1和Mac-1表达有关。 相似文献
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3个血清型鸡源大肠杆菌1型菌毛蛋白抗原位点变异分析 总被引：1，自引：2，他引：1
采用Goldkey及DNA Star分析软件对发表的3个不同血清型的鸡大肠杆菌1型菌毛结构基因(pilA)进行同源性及抗原位点分析。结果显示,3种鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))l型菌毛pilA基因相似性为91.36％～98.38％,所编码的氨基酸同源性为93.50％～97.84％;3种血清型鸡大肠杆菌(O_1、O_(78)及O_(88))1型菌毛蛋白二级结构在1～73位及150～185位氨基酸的二级结构基本相似,而111～150位氨基酸的α螺旋与β折叠的数量有所不同。菌毛蛋白亲水性、抗原性及抗原决定簇预测表明,来源于3种血清型大肠杆菌的1型菌毛蛋白在l～110位及150～184位氨基酸存在相似的二级结构及抗原位点,且不同血清型之间存在一定的共同抗原。 相似文献
16.
目的:探讨PTEN磷酸酶活性对ZR-75-1人乳腺癌细胞迁移及粘着斑激酶磷酸化水平的影响。方法:用有和无磷酸酶活性的两种PTEN表达质粒(W t和G 129)转染人乳腺癌细胞株ZR-75-1,用人工基底膜侵袭试验检测其转染前后的迁移能力,以W estern-b lot检测未转染的ZR-75-1和两种表达质粒的ZR-75-1磷酸化粘着斑激酶水平。结果:转染后有磷酸酶活性、无磷酸酶活细胞与未转染ZR-75-1细胞间侵袭抑制率、运动抑制率差异有显著性(P<0.01)。各组细胞间总FAK(粘着斑激酶)水平无明显差异,而W T-PTEN与G 129和ZR-75-1组FAK 397位酪氨酸磷化水平有明显差异。结论:PTEN具有抑制乳腺癌细胞ZR-75-1转移的作用,其机制可能与PTEN使FAK去磷酸化有关。 相似文献
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Myxococcus xanthus cells can glide forward by retracting type IV pili. Tgl, an outer membrane lipoprotein, is necessary to assemble pili. Tgl mutants can be transiently "stimulated" if brought into end-to-end contact with tgl+ donor cells. By separating the stimulated recipient cells from donor cells, we found that Tgl protein was transferred from the donors to the rescued recipient cells. Mutants lacking CglB lipoprotein, which is part of a second gliding engine, could also be stimulated, and CglB protein was transferred from donor to recipient cells. The high transfer efficiency of Tgl and CglB proteins suggests that donor and recipient cells briefly fuse their outer membranes. 相似文献
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早孕小鼠子宫内膜ICAM-1的表达及意义 总被引：4，自引：1，他引：4
探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义方法：收集妊娠1-5d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化．结果：1．ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2．子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3．ICAM-1D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4．单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产．结论：ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用． 相似文献