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比较了史氏鲟精子在3种不同配比浓度稀释液的保存效果。试验结果表明,配方Ⅲ作为稀释液,8%甲醇作为抗冻剂,二步法超低温(-196℃)冷冻保存,5h后取出,38℃水浴解冻取得最好的冻后激活率,解冻后激活率为(52.3±3.5)%。解冻精子分别采用井水和激活液D(10mmol/L Tris+10mmol/L NaCl+25mmol/L Glu,pH 8.0)激活,进行人工授精。结果显示配方Ⅲ冻精采用激活液D激活授精获得最高受精率为68.56%,最高孵化率为52.91%。本次试验表明,1～2mmol/L范围内,低浓度K+比高浓度K+对史氏鲟精子保存有利;52～82mosmol/kg范围内,高渗稀释液有利于史氏鲟精子的保存;且激活授精方法是影响冻精受精率和孵化率的关键因素之一。 相似文献
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对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(82±1.6)%,冻精与鲜精均无显著性差异。人工授精实验证明了解冻后的精子能正常用于该鱼的人工繁殖。 相似文献
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目的分析水牛冷冻精液稀释液中添加SOD、GSH对精子品质的影响,方法于广西畜禽品种改良站中选取摩拉水牛的新鲜精液进行分析研究,并且随机将其分为A组、B组、C组、D组,A组为正常水牛精液,B组添加300IU/mL SOD,C组添加1.0mM GSH,D组添加300IU/mL SOD与1.0mM GSH,对比各组影响结果。结果在不同氧化剂对精子影响方面上,4组的顶体完整率无显著差异,在精子解冻后不同时间段内,B组C组D组精子活率显著优于A组,D组精子活率显著优于B组C组,组间对比差异显著(P0.05)。在抗氧化剂组合对体外受精结果上,D组的精子分裂率、囊胚孵化率与囊胚率显著优于A组,组间对比差异显著(P0.05)。结论在水牛精子中添加SOD与GSH可以良好的延缓精子死亡时间,效果显著。 相似文献
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不同冷冻保护剂在猪精液冷冻中的作用分析 总被引：6，自引：0，他引：6
本实验采用一定浓度的甘油、EG、DMA、DMSO及其两两组合物作为冷冻保护剂。用含冷冻保护制的稀释液将精液稀释后,常温保存,观察精子活率,比较精子生存指数。结果表明：在常温下对精子毒害作用最大的是DMSO,其次是甘油,EG和DMA对精子毒害作用最小。以一定浓度的10种冷冻保护剂将对精液冷冻后观察解冻活率,发现EG和DMA混合保护剂解冻后精子活率最高。 相似文献
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人工养殖西伯利亚鲟精子超低温冷冻保存研究 总被引：7，自引：6，他引：7
研究了人工养殖西伯利亚鲟精子的生物学特征及超低温冷冻保存方法。西伯利亚鲟的产精量为113.67±39.86 ml,精子密度为(6.49±3.10)×108/ml,精子活力为(85.4±9.5)%,精子寿命为353±23 s。精子密度与精子快速运动时间、精子寿命之间均存在线性相关,用方程分别表示为:y=1.0384x+1.5089(R2=0.7325);y=2.9069x+74.289(R2=0.6967)。结果表明精子密度可作为一项精子质量评价的标准。通过比较西伯利亚鲟精子在不同稀释液、不同抗冻剂和抗冻剂浓度、降温速率、解冻温度下的保存效果,结果表明:配方2作为稀释液,18%甲醇作为抗冻剂,二步法超低温(-196℃)冷冻保存精子,40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后活力为(51.8±5.8)%。西伯利亚鲟授精的最佳精卵比为106∶1。在此精卵比下用冻精授精分别得到了(72.3±3)%的受精率和(52.9±4.1)%的孵化率,其中受精率与鲜精没有显著性差异,孵化率与鲜精有显著差异(P<0.05)。 相似文献
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为研究适用于乌克兰鳞鲤精子的超低温冷冻保存方法,分析比较3种稀释液[Hank′s、Cortland、Freezefish冻精稀释液,精子与每种稀释液均设置3种比例(1∶1、1∶3、1∶5)]及3种体积分数为10%的抗冻剂(二甲基亚砜、1,2-丙二醇和丙三醇)对乌克兰鳞鲤精子低温(4 ℃)保存活力的影响;运用筛选出的冷冻保护液及稀释比例,分析比较3种“3步冷冻法”以及3种解冻温度(20、30、40 ℃)对乌克兰鳞鲤精子活力的影响。试验结果表明,采用Hank′s作为稀释液,10%二甲基亚砜为抗冻剂,精子与稀释液比例为1∶3,平均降温速率为12 ℃/min,解冻温度为30 ℃时,精子活力最高(>68%)。通过对稀释液、抗冻剂、稀释比例、降温速率和解冻温度的层层筛选,建立了适宜乌克兰鳞鲤精子超低温冷冻保存的方法,在其种质保护方面具有重要意义,为开展其他鱼类精子超低温冷冻保存提供参考。 相似文献
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延边大学农学院魏世宝等，以手握法采集的猪精液为试验材料，以解冻后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、运动学参数（VAP、LIN、ALH、BCF）和膜脂质过氧化反应为评定标准，旨在探讨N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明，在冷冻稀释液中添加1mmol／L的N-乙酰半胱氨酸可以显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率， 相似文献
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为保护和利用棘头梅童鱼种质资源,以常用无机盐及葡萄糖配制的5种溶液(依次编号A、B、C、D、E)作为稀释液,不同体积分数的DMSO作为抗冻剂,采用2 mL冻存管和两步降温的方式,对棘头梅童鱼精子的超低温冷冻保存技术进行了研究,并利用人工养殖黄姑鱼的成熟卵子对冻存3年的棘头梅童鱼冷冻精子的授精能力进行检验。结果表明,以E溶液为稀释液、10%DMSO为抗冻剂、两步降温方式冷冻保存的棘头梅童鱼精子在37℃水浴解冻后复活率较高,为(76.67±10.41)%82.33±4.62%;以上述方法冻存3年的棘头梅童鱼冷冻精子与人工养殖黄姑鱼的成熟卵子杂交,受精率达到(20.26±4.12)%。 相似文献
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以HBSS溶液为稀释液,DMSO为抗冻剂,0.25 mL麦细管为冻存管,两步降温法超低温冻存黄姑鱼精子,并用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测了冻精的DNA损伤,荧光双染色流式细胞仪技术(FCM)检测了冻精的细胞膜性结构损伤。结果表明,DMSO质量分数在5%~20%时,冻精的活力与鲜精相比无显著差异;其中DMSO质量分数在10%时,冻精的激活率、运动时间及寿命分别为85.25%±3.95%、(3.23±0.27) min及(3.83±0.33) min。DMSO质量分数在25%、30%时,冻精的活力显著下降。SCGE检测显示,DMSO质量分数在5%~15%时、冻精的DNA损伤与鲜精相比差异不显著,DMSO质量分数为20%、25%、30%时,冻精的DNA损伤明显加重,冻精的DNA损伤与抗冻剂DMSO的质量分数成正相关。FCM检测显示,DMSO质量分数在5%~20%时,冻精中线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例与鲜精相比无显著差异,DMSO质量分数在25%、30%时,冻精中的线粒体及细胞膜结构保持完整性的精子比例明显下降。分析认为,较高质量分数的DMSO是引起冻精活力下降,DNA、线粒体及细胞膜结构损伤加重的主要原因。 相似文献
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石鲽、牙鲆精子冷冻保存研究及其在人工杂交中的应用 总被引：15，自引：2，他引：13
对石鲽(Kareius bicoloratus )和牙鲆(Paralichthys olivaceus)精子冷冻保存技术进行了研究,筛选到一个优良的稀释液MPRS,用MPRS冷冻保存石鲽、牙鲆精子,冻后成活率在70%以上。在石鲽冻精和牙鲆卵的杂交实验中,杂交组受精率是 28 4%±4 55(n=3),孵化率是 42 7%±7 35(n=3),胚胎发育正常;5 000尾杂交鱼苗有102尾成功度过变态期。在牙鲆冻精和大菱鲆卵的杂交实验中,杂交组的受精率只有2 7%,部分受精卵虽能孵化出膜,但仔鱼全为畸形。这两个杂交实验,特别是石鲽冻精和牙鲆卵的杂交实验,证实了冷冻保存的精子完全可以应用在杂交育种工作中。 相似文献
15.
为建立圆口铜鱼(Coreius guichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1), 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5%、10%、12.5%, V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)%,与鲜精无显著差异(P0.05);以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)%,与鲜精无显著差异(P0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15) s、(33.33±5.00) s,显著低于鲜精(P0.05); 7.5%甲醇组和7.5%二甲基甲酰胺组的MOT次之,分别为(77.71±17.74)%、(76.42±12.49)%,抗冻剂二甲基亚砜组的MOT显著低于甲醇组、二甲基甲酰胺组(P0.05)。12.5%的3种抗冻保护剂中,几乎无精子存活;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,10%甲醇组,相较于使用超纯水激活,用150 mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,说明Na~+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明, D1+10%METH (7.8 g/L NaCl+0.5 g/L KCl+15 g/L葡萄糖+10%METH)可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础。 相似文献
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激活—授精溶液渗透压对家鱼冻精的能育性有明显影响。当用1毫升冻精与4 毫升卵子授精时,冻精与鲜卵在水中与在 171和 342 mOsm/l NaCl 溶液中的受精率均很高(91％左右),无明显差别;当精卵量比为 1:16时,在水中的受精率明显低于在上述 NaCl 溶液中的受精率;当精卵量比升高到 1:32以上时,冻精在 174mOsm/l 溶液中的受精率明显高于其它二组。鲢卵在171和342 mOsm/l 溶液中维持受精能力的有效时间(6 分钟)明显长于在淡水中(2 分钟)。当精子稀释难的 pH 值偏碱(8.7)和冻精激活—授精溶液偏酸(pH6.3)时,冻精的受精率明显下降。解冻后精子在 4℃存放1.5小时活力和受精率下降不多,少数冻精可存活长达 16小时。冻精活力与受精率之间存在着明显正相关,相关系数为0.97,回归方程为 Y=3.68 1.23X。 相似文献
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本试验选择黑龙江省大庆市泰康县四个村共412头健康、经产的适龄荷斯坦奶牛进行试验,随机分为4组,每个试验组采用一种细管冻精,所有供试牛都采用圈养方式,饲料来源一致。试验结果表明:A组用C035(天津产)冻精给发情母牛输精后的平均受胎率为75%,B组12549(上海产)的母牛受胎率为73.13%,C组96188(哈尔滨产)为73.91%,D组00209(哈尔滨产)为56%。A、B、C三种冻精对母牛的受胎率影响差异不显著(P>0.05),D组00209号冻精对母牛的受胎率显著(P<0.05)低于其他三种。 相似文献
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为了解抗冻剂对施氏鲟(Acipenser schrenckii)精子冷冻保存效果的影响及其冷冻损伤机理,比较了添加不同浓度海藻糖和蔗糖作为冷冻保护剂的精子稀释液处理后施氏鲟精子冷冻复苏的活力、快速运动时间和寿命。结果表明,添加60 mmol·L-1海藻糖1.0 mmol·L-1氯化钾的稀释液处理后,精子冻后快速运动时间和寿命与鲜精相比无显著差异(P>0.05);且活力较其他处理组有所提高,达到(26.67±3.32)%,但仍显著低于鲜精(P<0.05)。利用透射电镜和扫描电镜对施氏鲟精子超低温冷冻保存前后的超微结构进行观察,并对其能量代谢酶和抗氧化酶活进行测定和比较,结果表明,低温冻存造成施氏鲟精子的膜系统和细胞器(主要为线粒体和轴丝)损伤;能量代谢酶[总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)]和抗氧化酶[过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]活性均显著下降(P<0.05),而抗氧化酶谷胱甘肽还原酶(GR)活性显著上升(P<0.05),表明... 相似文献
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为研究适合珍珠龙精子的短期超低温保存方法,比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对珍珠龙(Scleropages jardini)精液超低温保存后精子活力的影响,初步解释了经超低温短期保存后珍珠龙精子活力明显较鲜精低的原因.结果显示:采用Ringer's液作为保存液,以浓度为16％的二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮],40℃水浴解冻,可取得最好的冻后活力,解冻后精子的活力为(36.7±4.1)％. 相似文献
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４种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼精子冷冻保存的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
4℃冷冻保存条件下,以冷冻精子活力、寿命和细胞膜完整率为指标,检测二甲亚砜(DMSO)、甘油(Glycerol)、乙二醇(EG)和甲醇(MeOH)4种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼(Semilabeo obscurus)鲜精以及对精子冷冻保存效果的影响.结果显示,4种渗透性抗冻剂对鲜精活力呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO＜ Glycerol;抗冻剂对鲜精寿命呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO和Glycerol;抗冻剂对鲜精细胞膜完整率呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO＜ Glycerol.在鲜精活力为(36.17±4.06)％,寿命为(47.5±3.1)s,细胞膜完整率为(86.22 ±5.29)％时,经过短期冷冻保存,5％ MeOH和5％ EG解冻后暗色唇鱼精子活力最高,分别为(18.33±1.70)％和(17.83±2.67)％,与鲜精活力差异显著(P＜0.05);5％ MeOH和5％ EG解冻后精子寿命最长,分别为(44.3±3.6)s和(42.8±5.5)s,5％MeOH解冻后精子寿命与鲜精寿命差异不显著(P＞0.05);5％ MeOH解冻后精子细胞膜完整率最高,为(85.67±1.11)％,与鲜精细胞膜完整率无显著差异(P＞0.05).研究表明,DMSO和Glycerol并不适合作为暗色唇鱼精子冷冻的抗冻剂,MeOH和EG具有相似的保护作用,是暗色唇鱼精子冷冻保存潜在的渗透性抗冻剂. 相似文献