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1.
从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料,通过RT—PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料,以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚,盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养,呈现禽偏肺病毒典型细胞病变（CPE）：细胞变圆、悬浮,有合胞体形成。将分离株接种于Veto细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序,并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示,与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高,为97．4％～99．3％;与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低,为77．4％～78．1％;而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低,为69．5％～69．7％。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒,将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。 相似文献
2.
从山东省多个地区的商品肉鸡养殖场采集64份疑似病料,通过RT-PCR方法检测出37份禽偏肺病毒阳性病料,以此作为病毒分离材料接种SPF鸡胚,盲传至第7代时鸡胚生长明显迟滞。取阳性尿囊液在CEF中培养,呈现禽偏肺病毒典型细胞病变(CPE):细胞变圆、悬浮,有合胞体形成。将分离株接种于Vero细胞及DF-1细胞均出现类似病变。对分离株F基因进行测序,并与GenBank中发表的部分代表序列比较。结果显示,与B亚型禽偏肺病毒的核苷酸同源性最高,为97.4%99.3%;与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低,为77.4%99.3%;与A亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性较低,为77.4%78.1%;而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低,为69.5%78.1%;而与C亚型禽偏肺病毒核苷酸同源性最低,为69.5%69.7%。基因分型显示分离株为B亚型禽偏肺病毒,将该毒株命名为禽偏肺病毒SDWF株。 相似文献
3.
根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒（aMPV）F基因的保守序列设计并合成1对引物,利用RT—PCR可以扩增出1条725bp的片段,进行特异性试验和敏感性试验,建立了禽偏肺病毒病的RT—PCR检测方法。特异性试验表明,建立的RT—PCR检测方法能够从禽偏肺病毒疫苗毒株VIR115-B中扩增到725bp的特异性片段,而对H9N2亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒的扩增结果均为阴性;敏感性试验表明,该方法最低检出量的cDNA质量浓度为1．45μg／L;对山东省492份病料进行检测,阳性检出率为43．09％（212／492）,随机挑取11份进行克隆测序及序列分析,结果显示所扩增到的阳性产物均为B亚型的禽偏肺病毒。建立的禽偏肺病毒的RT—PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高的特点。 相似文献
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为了解中国目前禽坦布苏病毒在家禽中的流行状况及病毒分子演化特征,对2010-2011年采集自中国沿海及周边的9个省的439份疑似家禽坦布苏病毒感染的临床样品进行了鉴定,并进行了分离毒株NS5基因的分子遗传进化分析。结果表明,2010年采集的187份家禽病料中检测出42份阳性样品,阳性率为21．6％,而2011年采集的252份样品中检测出37份阳性样品,阳性率为13．9％。对部分毒株的NS5基因测序表明,本研究分离的禽坦布苏病毒与已发布的同时期分离的禽坦布苏病毒NS5基因同源性在98％以上,与2010年前分离的鸡源及蚊媒坦布苏病毒的同源性介于83．8％-85．8％之间;所有2010年后分离的禽坦布苏病毒毒株在系统进化上共同构成了一个进化分支。结果表明,2011年禽坦布苏病毒仍在中国沿海及周边的9个省的家禽中流行,病毒NS5基因的测序分析表明,到目前为止在家禽中流行的禽坦布苏病毒未出现明显的分子变异。 相似文献
5.
旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒（aMPV）引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-PCR检测阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,然后利用G/F基因序列分析及间接免疫荧光试验（IFA）等鉴定病毒的亚型,最后将分离株感染SPF鸡进行致病性分析。结果显示：在采集的220份样品中,RT-PCR检测结果显示,有3份鼻甲骨样品在228 bp左右出现特异性条带,将阳性病料接种Vero细胞盲传5代后,细胞出现变圆、聚集和融合等aMPV特征性细胞病变（CPE）,表明成功分离到3株aMPV,将其分别命名为SD2001、SD2002和HLJ2101。G和F基因同源性分析显示,来自蛋鸡的SD2001、SD2002和来自肉鸡的HLJ2101分离株的G和F基因与其他B亚型aMPV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,核苷酸的相似性分别为93.4%～98.6%和95.6%～100.0%,氨基酸的相似性分别为88.7%～97.8%和97.6%～100.0%;而与A、C和D亚型的G和F基因同源性较低,核苷酸的相似性分别为27.1%～61.8%和66.8%～74.8%,氨基酸的相似性分别为16.1%～36.7%和72.5%～86.5%,这些结果表明,SD2001、SD2002和HLJ2101分离株属于B亚型aMPV。进一步利用B亚型aMPV特异性的阳性血清进行IFA检测,接种SD2001、SD2002和HLJ2101的Vero细胞均可以观察到特异性的绿色荧光信号,进一步证实3个分离株属于B亚型aMPV。选择SD2001感染3周龄SPF鸡进行了致病性研究,结果发现SPF鸡感染后3～6 d出现精神萎靡、甩头和流鼻涕等症状,鼻甲骨、气管和肺也出现病理性损伤,其发病率为90%（18/20）。3株B亚型aMPV的分离不仅有助于明确我国部分养鸡场出现肿头综合征的发病原因,同时也证实B亚型aMPV流行毒株对鸡有明显的致病性,这些结果为我国家禽疫病的诊断和有效防控提供了重要理论依据。 相似文献
6.
本研究利用RT—PCR技术，对流行于国内部分地区的9株猪瘟病毒（CSFV）E2基因进行扩增，与C-株等4株参考毒株做了同源性比较，绘制了遗传进化关系发生树，结果表明，所测序列共由442个氮基酸残基组成。可将13株CSFV分为两个组群，其E2基因间的核苷酸序列同源性为81．9％～99．7％，所推导氨基酸序列同源性为88．2％～99．5％，其中9株CSFVE2基因的长度均为1324bp，编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和跨膜区序列，9株流行毒株与C-株之间核苷酸序列同源性为81．9％～95．3％。所推导氨基酸序列同源性为88．2％～95．5％。说明近期流行毒株的变异呈现一定的多样性，并且多数毒株已向远离疫菌株方向变异。 相似文献
7.
为了确定云南NDV毒株F基因和HN基因的结构特征及其与已知毒株的遗传相关性,应用RT-PCR技术对云南省部分地州养殖场采集的鸡或鸭喉气管组织样品4 700份进行新城疫病毒(NDV)检测,共检出阳性样品25份。对其中8份阳性样品进行NDV F基因与HN基因扩增后,克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外代表性毒株和当前流行疫苗毒株进行比对及系统发育分析。结果表明,云南省NDV毒株F基因与国内代表性毒株核苷酸序列同源性介于93.0%～99.2%之间,氨基酸同源性介于90.7%～99.1%之间;与疫苗毒株的核苷酸同源性在83.3%～86.9%之间,氨基酸同源性在86.0%～88.7%之间。HN基因与国内代表性毒株核苷酸同源性介于96.4%～99.1%之间,氨基酸同源性介于95.6%～99.3%之间;而与当前疫苗毒株相比,同源性较低,核苷酸同源性介于81.3%～82.0%之间,氨基酸同源性介于87.6%～88.8%之间。系统进化分析表明,云南NDV F基因有2株属于基因Ⅱ型,其余6株均属于基因Ⅶe型。云南NDV HN基因则均属于基因Ⅶ型。 相似文献
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2010～2011年中国部分地区禽坦布苏病毒感染调查及分子变异分析 总被引：7，自引：0，他引：7
为了解中国目前禽坦布苏病毒在家禽中的流行状况及病毒分子演化特征,对2010～2011年采集自中国沿海及周边的9个省的439份疑似家禽坦布苏病毒感染的临床样品进行了鉴定,并进行了分离毒株NS5基因的分子遗传进化分析。结果表明,2010年采集的187份家禽病料中检测出42份阳性样品,阳性率为21.6%,而2011年采集的252份样品中检测出37份阳性样品,阳性率为13.9%。对部分毒株的NS5基因测序表明,本研究分离的禽坦布苏病毒与已发布的同时期分离的禽坦布苏病毒NS5基因同源性在98%以上,与2010年前分离的鸡源及蚊媒坦布苏病毒的同源性介于83.8%～85.8%之间;所有2010年后分离的禽坦布苏病毒毒株在系统进化上共同构成了一个进化分支。结果表明,2011年禽坦布苏病毒仍在中国沿海及周边的9个省的家禽中流行,病毒NS5基因的测序分析表明,到目前为止在家禽中流行的禽坦布苏病毒未出现明显的分子变异。 相似文献
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自1997年-2016年从广东佛山、肇庆、云浮等地疑似新城疫的家禽病料分离鉴定获得12株新城疫病毒,采用RT-PCR方法对所有分离株的F基因和HN基因进行扩增,产物经克隆并测序后与GenBank数据库中的参考毒株做遗传进化分析。12个分离株的F基因遗传进化分析结果显示,9株属于基因Ⅶ型,2株属于基因Ⅸ型,1株属于基因Ⅵ型。F基因同源性分析结果显示,12个毒株与目前疫苗株La Sota、B1、Mukteswar和Clone30的同源性在81.6%~91.5%之间,12个毒株间同源性的差异较大,9个Ⅶ型分离株之间的同源性在84.8%~99%之间;HN基因同源性分析结果显示,12个毒株与目前疫苗株La Sota、B1、Mukteswar和Clone30的同源性在80.9%~91.9%之间,12个毒株间同源性的差异较大,9个Ⅶ型分离株之间的同源性在84%~98.5%之间。氨基酸序列分析表明,12个分离株与NDV强毒株的氨基酸特征相符,有10个分离株的HN基因第514氨基酸残基出现Ⅰ→Ⅴ的变异,有9个分离株的F基因和HN基因的中和抗原位点出现变异。试验提示,当前广东部分地区的分离株与传统疫苗株之间存在抗原性差异,故应加强广东地区新城疫病毒的分子遗传监控。 相似文献
11.
为掌握禽偏肺病毒(aMPV)在安徽省鸡群中的感染状况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对安徽省合肥、亳州、定远、舒城等地区的9个鸡场、7个不同品种(系)鸡群的296份血液样本进行了aMPV血清抗体检测。结果表明,所有被检鸡场均有aMPV感染,鸡场阳性率最高达100%,最低为20%;各品种(系)鸡均有感染,感染率最高的是青脚麻肉鸡,其次分别为科宝肉鸡、海兰蛋鸡、禽粤黄蛋鸡、淮南麻黄鸡、黄羽土鸡和新广麻肉鸡;其中蛋用型鸡血清样本总体阳性率为88.7%,明显高于肉用和兼用型鸡;公鸡和母鸡血清抗体阳性率均较高。研究结果表明,安徽省鸡群aMPV的感染已广泛存在,且不同地区、品种(系)、用途和性别的鸡群均较严重,应根据感染状况尽早制定相应的防控对策。 相似文献
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根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒F基因的保守序列设计并合成1对引物,利用RT—PCR扩增出1条与目的片段大小一致的725bp基因片段,回收、纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的aMPV核酸探针。特异性检测结果表明,该探针能与aMPV核酸发生特异性杂交,而与H9N2亚型AIV、NDV、IBV、ORT和E．coil的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对aMPV的最低检出量为5Pg。应用制备的探针对山东省不同地区的605份商品肉鸡和122份商品肉鸭进行了核酸探针检测,阳性检出率分别为36．59％和34．51％。本试验制备的aMPV地高辛探针特异性强、敏感性好,对样品的检测结果表明山东省部分地区的商品肉鸡、肉鸭中普遍存在aMPV感染。 相似文献
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为了解我国鸡群中禽戊型肝炎病毒(avain hepatitis E virus,aHEV)的分子变异情况,对2018年从山东、河南、河北、辽宁、吉林、黑龙江、陕西、山西、江苏等地疑似aHEV感染鸡群中采集的679份肝脏、脾脏病料样品进行RT-PCR检测,从中选取PCR阳性产物,对其ORF1基因进行序列测定与遗传进化分析。结果显示:从病料中检出阳性样品37份,阳性检出率为5.45%;选取的15个试验毒株之间的ORF1基因同源性为90.1%~100%,与目前报道的4种基因型同源性均小于90%,其中与基因1型的澳大利亚株和韩国株同源性为85.5%~89.0%,与基因2型的美国原型株和美国无毒株同源性为85.5%~88.2%,与基因3型的欧洲株和中国株同源性为86.3%~89.7%,与基因4型的匈牙利株和中国台湾株同源性为86.4%~88.5%。ORF1基因进化树分析发现,所分离的aHEV均属于戊型肝炎B种,不在目前所划分的基因型分支上,形成独立的基因分支,不属于已报道的4个基因型。结果表明,目前在我国流行的aHEV是一种新基因型病毒,这为我国aHEV分子流行病学分析提供了补充和依据。 相似文献
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应用PCR技术扩增NDV贵州不同鸡源分离株,包括肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株和越南斗鸡源DQ株的F蛋白基因,将该基因片段分别进行克隆和测序,并与国内外NDV参考株的对应序列进行比较分析。结果表明:6株NDV贵州不同鸡源分离株的F基因长度均为1 662 bp,编码553个氨基酸;分离株间核苷酸同源性为86.9%~99.7%,氨基酸同源性为91.0%~99.3%;与国内外NDV代表株(LaSota株、B1株、F48E9株、CH2000株和TW 2000株)的核苷酸同源性为84.0%~98.9%,氨基酸同源性为87.2%~98.6%;经系统发育进化树分析,DQ株、N98株、P1株和H2株为基因VIId型,而BY株和FW株为基因IX型。这些结果提示贵州省不同鸡群间存在相同NDV毒株感染的可能性,不同年份间NDV毒株发生基因型改变,而近年来贵州省流行的ND疫情主要是由NDV基因VII型引起。 相似文献
16.
Davide Giovanardi Caterina Lupini Patrizia Pesente Giulia Rossi Giovanni Ortali Elena Catelli 《Veterinary research communications》2014,38(2):129-137
The aim of this study was to evaluate if the exposure to Avian metapneumovirus (aMPV) and/or to Turkey hemorrhagic enteritis virus (THEV) was significant for the induction of episodes of colibacillosis in aMPV and THEV vaccinated turkeys. Colibacillosis-associated mortality was recorded and longitudinal virological studies performed in three consecutive turkey flocks reared in the same farm. aMPV and THEV diagnostic swabs and blood samples were made once a week up to 14 weeks of age. Swabs were processed by molecular techniques for viruses detection and antibody titres were evaluated. Field subtype B aMPVs were detected in all flocks at different ages of life always associated with respiratory signs and increase of colibacillosis-associated mortality. THEV has been consistently detected in all flocks since the 9th week of age. Vaccination with a single dose of the THEV commercial inactivated vaccine available in Italy seems does not protect the birds from the infection. Sequence comparison of the hexon protein of one of the THEV strains detected, and strains isolated worldwide, revealed high similarity between them. These results are consistent with the notion that the hexon protein, being the major antigenic component of the virus, is highly conserved between the strains. Results showed that field aMPV infection is directly correlated to colibacillosis-associated mortality. Less clear appears the role of THEV because the endemicity of aMPV makes difficult to evaluate its role in predisposing colibacillosis in absence of aMPV. It would be interesting to further investigate this issue through experimental trials in secure isolation conditions. 相似文献
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2017~2018年华中地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解华中地区近年来猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行情况,本中心对来自华中地区湖北、湖南、河南的1592份疑似PCV2感染病料进行了PCR鉴定,对部分阳性样品进行ORF2基因的克隆与测序,并进行同源性分析和遗传进化分析。结果表明:1592份样品中,有1091份样品检测为PCV2阳性,阳性率为68.53%,3个省份的PCV2感染率相近;其中38株PCV2 ORF2基因序列同源性为89.5%~100%,与参考序列的同源性为81.1%~99.9%;遗传进化分析显示,33株序列为PCV2d基因型,4株序列为PCV2b基因型,1株序列为PCV2a基因型。本研究结果表明,2017~2018年间华中地区PCV2流行的基因型以PCV2d为主,该结果对临床上PCV2的防控具有一定的指导意义,同时也为PCV2新型疫苗的研制积累了有效材料。 相似文献
18.
Shikai Sun Feng Chen Sheng Cao Jiajia Liu Wen Lei Guangwei Li Yongfeng Song Junpeng Lu Chuang Liu Jianping Qin Haiyan Li 《Veterinary research》2014,45(1):74
Subtype C avian metapneumovirus (aMPV-C), is an important pathogen that can cause egg-drop and acute respiratory diseases in poultry. To date, aMPV-C infection has not been documented in Muscovy ducks in China. Here, we isolated and characterized an aMPV-C, designated S-01, which has caused severe respiratory disease and noticeable egg drop in Muscovy duck flocks in south China since 2010. Electron microscopy showed that the isolate was an enveloped virus exhibiting multiple morphologies with a diameter of 20–500 nm. The S-01 strain was able to produce a typical cytopathic effect (CPE) on Vero cells and cause death in 10- to 11-day-old Muscovy duck embryos. In vivo infection of layer Muscovy ducks with the isolate resulted in typical clinical signs and pathological lesions similar to those seen in the original infected cases. We report the first complete genomic sequence of aMPV-C from Muscovy ducks. A phylogenetic analysis strongly suggested that the S-01 virus belongs to the aMPV-C family, sharing 92.3%-94.3% of nucleotide identity with that of aMPV-C, and was most closely related to the aMPV-C strains isolated from Muscovy ducks in France. The deduced eight main proteins (N, P, M, F, M2, SH, G and L) of the novel isolate shared higher identity with hMPV than with other aMPV (subtypes A, B and D). S-01 could bind a monoclonal antibody against the F protein of hMPV. Together, our results indicate that subtype-C aMPV has been circulating in Muscovy duck flocks in South China, and it is urgent for companies to develop new vaccines to control the spread of the virus in China. 相似文献