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研究耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶在枯草芽孢杆菌中异源表达。从耐碱性木聚糖酶高产短小芽孢杆菌BYG5-20中克隆得到带有自身启动子的木聚糖酶基因xynA,将其构建在大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pGJ148中得到重组质粒pGJ148-xynA。采用电转化法将重组质粒pGJ148-xynA转入枯草芽孢杆菌1A747中,得到重组菌B.GJ148-xynA,然后进行诱导表达以及培养基的优化。重组菌GJ148-xynA发酵上清液中木聚糖酶酶活可达93.32IU/ml。耐碱性短小芽孢杆菌木聚糖酶基因xynA可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。 相似文献
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本试验旨在研究黄曲霉毒素分解酶(ADTZ)基因在枯草芽孢杆菌中的表达与应用。试验通过构建枯草芽孢杆菌ADTZ基因的整合表达载体,将ADTZ基因整合到野生型枯草芽孢杆菌(B.subtilis LN)中,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步检测ADTZ蛋白的表达情况。将重组枯草芽孢杆菌作为发酵菌种接种到发霉玉米中进行发酵试验,检测发霉玉米样品中黄曲霉毒素B1(AFB1)含量的变化,验证ADTZ基因在枯草芽孢杆菌中的表达效果。结果表明,通过构建整合表达载体成功将ADTZ基因整合到枯草芽孢杆菌基因组中,在SDS-PAGE上检测到重组枯草芽孢杆菌能够分泌表达特异性蛋白条带。经过重组菌发酵的发霉玉米AFB1的含量较未接种和接种野生型枯草芽孢杆菌发酵的发霉玉米AFB1的含量差异显著(P0.05)。由此可见,ADTZ基因可成功整合到野生型枯草芽孢杆菌中,并进行了胞外分泌表达,表达产物具有生物活性,能有效地降解AFB1。 相似文献
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本试验旨在建立玉米赤霉烯酮(ZEN)降解酶基因ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达体系,确定其产物的生物降解活性及对母猪繁殖性能的作用。克隆ZEN-jjm基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后连接至p HT01表达载体中,构建重组质粒;转化枯草芽孢杆菌,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析ZEN-jjm蛋白表达水平。高效液相色谱法(HPLC)检测表达的ZEN-jjm蛋白降解ZEN的活性。通过对母猪的繁殖性能的评价,确定ZEN降解酶降解ZEN对母猪繁殖性能的影响。双酶切和测序结果表明:ZEN-jjm成功插入p HT01中,SDSPAGE表明获得1株高效表达目的蛋白的重组枯草芽孢杆菌,其大小约为29 ku。HPLC结果表明表达的ZEN-jjm蛋白能有效地降解ZEN;表达的ZEN-jjm蛋白能显著缓解ZEN对繁殖母猪的毒害作用(P0.05)。综上:1)本研究成功构建了表达ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达载体,并在枯草芽孢杆菌中得到了表达。2)表达的ZEN-jjm蛋白具有降解ZEN的生物活性。3)在饲粮中添加ZEN-jjm蛋白能显著降低ZEN对母猪能繁殖性能的危害。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(18)
为了在枯草芽孢杆菌中表达具有生物活性的Fowlicidin-3,试验采用人工合成的方法合成小分子泛素样蛋白(SUMO)-Fowlicidin-3,将构建的表达质粒p HT01转化至枯草芽孢杆菌WB800N中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后得到高效表达,用Ni柱亲和层析纯化后,再经SUMO酶切割,通过蛋白质印迹(Western blot)检验Fowlicidin-3在枯草芽孢杆菌中的分泌表达及酶切情况;采用稀释法抗菌试验检测表达产物的抑菌活性。结果表明:重组Fowlicidin-3在枯草芽孢杆菌中得到高效表达,对6种临床分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)在12~16μg/m L之间。说明Fowlicidin-3具有潜在利用价值,可为下一步临床试验提供理论基础。 相似文献
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文章综述枯草芽孢杆菌在体内、体外的抑菌性能，旨在保障枯草芽孢杆菌的饲用效果，重点总结3方面：其一，枯草芽孢杆菌抑菌性能评估方法；其二，枯草芽孢杆菌的体外抑菌作用（牛津杯法体外抑菌试验评估）；其三，饲用枯草芽孢杆菌对畜禽肠道菌群的调控效果（体内抑菌试验评估）。体外试验文献显示，枯草芽孢杆菌对肠道有害菌和饲料源有害菌的抑菌报道较多，对肠道有益菌和其他商业益生菌的抑制研究很少，且不同菌株的抑菌性能差异较大，这与饲用枯草芽孢杆菌对畜禽肠道有益菌及个别有害菌调控出现差异化结果相符。文章建议完善枯草芽孢杆菌体外抑菌评估的体系，这有助于筛选安全的菌株及高效地研制单一和复合饲用枯草芽孢杆菌制剂。 相似文献
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为明确拮抗菌枯草芽孢杆菌B43菌株拮抗香蕉枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp. cubense race 4，FOC-4)的能力及其抑菌活性物质的性质，本研究采用平板对峙法进行抑菌谱试验；酸沉淀、有机溶剂萃取法提取B43菌株中的抑菌活性物质并作稳定性测定；根据脂肽类抗生素合成相关基因序列对B43基因组进行PCR扩增检测，运用LC-MS对粗提物作成分分析。结果表明，B43菌株对21种植物病原真菌均有较好的抑菌活性；酸沉淀法粗提物具有较好的耐热及耐紫外线特性，但不耐强酸强碱；通过特异性引物PCR检测，B43菌株基因组中含有srfAB、ituA、ituB、ituD、fenD、yndJ、sfp、mycB、lpa-14或fenB等脂肽类合成相关基因；LC-MS分析发现粗提物中含有Surfactin、Iturin、Mycosubtilin、Bacillomycin和Fengycin 5类脂肽类抗生素的同系物24种。枯草芽孢杆菌B43菌株抑菌谱广，其发酵液酸沉淀粗提物对FOC-4具有良好的抑菌活性以及较好的稳定性，本研究不仅检测推断出粗提物中含有多种脂肽类抗生素及其同系物，且于菌株基因组中扩增出多种脂肽抗生素基因，说明该菌株可能能够产生多种脂肽类抗生素。B43菌株与已报道的多数拮抗FOC-4的芽孢杆菌菌株相比，效果好、活性物质种类更多，因此具有良好的生物农药开发应用前景。 相似文献
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不同益生菌中兽药黄荆子微生态制剂功效研究 总被引：1，自引：0，他引：1
实验旨在研究不同益生菌发酵中兽药黄荆子对黄荆子微生态制剂功效的影响。实验以不加益生菌为对照,选择枯草芽孢杆菌S21单菌发酵、枯草芽孢杆菌S21和产朊假单丝酵母M22双菌发酵、枯草芽孢杆菌S21、产朊假单丝酵母M22和植物乳杆菌T3三菌发酵,测试不同益生菌黄荆子微生态制剂的抑菌活性、活菌数、黄酮含量及消化酶等变化,结果表明,单独选择枯草芽孢杆菌S21发酵,其黄荆子微生态制剂的抑菌活性、活菌数、黄酮含量及消化酶活性等综合起来比复合发酵好,揭示复合发酵时不同的益生菌的颉颃作用,会对微生态制剂功效产生巨大影响,选择复合菌种发酵中兽药时,要注意不同菌种的相互作用。 相似文献
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试验比较多种益生菌和中药组合对鸡源大肠杆菌的抑菌效果,并对其抑菌机理进行分析。结果表明:益生菌中,枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌对鸡源大肠杆菌具有明显的抑菌活性,但地衣芽孢杆菌没有效果。中药组合中,黄连和茯苓、赤芍、金银花、鱼腥草、桂枝分别配伍时抑菌效果明显,但中药组合的抑菌效果明显低于益生菌。进一步研究益生菌中的抑菌成分,对植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵液进行粗提取、分离和纯化,发现地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌可以产生肠杆菌肽,肠杆菌肽是抗菌肽的一种,其对鸡源大肠杆菌有抑制作用。 相似文献
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《饲料研究》2014,(23)
研究从猪肠道中获得一株疑似枯草芽孢杆菌,通过形态特征、生理生化鉴定和16S r DNA分子鉴定确定其为枯草芽孢杆菌,并采用液体发酵法,以发酵液中活菌数和芽孢数为指标,通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌HEW-B113的培养基和发酵条件进行优化。确定其最佳培养基配方为玉米淀粉2%、葡萄糖1%、豆粉1%、硫酸锰0.2%和硫酸铁0.15%;最佳发酵条件为初始p H 7.1、接种量0.8%、发酵摇瓶装液量100 m L/500 m L、转速200 r/min、发酵温度35℃及发酵时间40 h。采用枯草芽孢杆菌的最优发酵工艺可以降低成本,提高质量,为枯草芽孢杆菌的扩大化生产提供理论依据。 相似文献
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枯草芽孢杆菌因其分布广泛和对环境无公害,在农业、工业、医药卫生等行业有着广泛的应用。近年来,国内外对枯草芽孢杆菌进行了探索,其菌体在新型抑菌生物制剂中有所应用,但以其分泌的抑菌成分作为原材料的抑菌制剂目前还处在理论阶段。本文主要从四方面对枯草芽孢杆菌抑菌成分进行综述,分别为抑菌成分的分类、抑菌机制、未来可能的应用和提取方法的优化。同时,为了使枯草芽孢杆菌抑菌成分能广泛应用于食品防腐技术、食品杀菌技术等多个方面,生产大剂量、高纯度的抑菌成分成为亟待解决的问题,这需要进一步提高抑菌成分的纯度与产量的相关研究。最后,为枯草芽孢杆菌抑菌成分的未来探索提供了可行的方向。 相似文献
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利用优化后的SEA基因片段与带有枯草芽孢杆菌启动子的表达载体pBC38c,成功构建了含有SEA基因的重组表达质粒pBC38c-SEA。通过电转化的方法,将重组质粒pBC38c-SEA转入枯草芽孢杆菌1A751中。对目的蛋白进行表达,采用硫酸铵沉淀法浓缩上清中的蛋白,超声波裂解法裂解菌体沉淀,SDS-PAGE凝胶电泳法检测蛋白表达情况,Western-blot对表达的目的蛋白进行活性分析,并对表达条件与硫酸铵浓度进行优化。结果表明,成功构建了枯草芽孢杆菌表达质粒pBC38c-SEA,并在枯草芽孢杆菌中获得了表达,目的蛋白存在于培养基上清中,且具有抗原性。随着培养时间的延长,目的蛋白表达产量增多,在35h时达到最多,同时硫酸铵终浓度为50%,目的蛋白得到最好沉淀。本试验结果表明,SEA基因得以分泌表达,为进一步研究其生物活性并作为佐剂在临床中应用奠定了基础。 相似文献
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旨在分离枯草芽孢杆菌及其所产细菌素,并分析重组表达后的细菌素的抑菌活性和稳定性。通过牛津杯扩散法筛选羊驼粪便中高产细菌素的芽孢杆菌;借助16S rRNA鉴定分离菌;采用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、SDS-PAGE、质谱分析等技术获得细菌素的氨基酸序列;利用大肠杆菌表达系统对细菌素进行体外表达,并利用牛津杯扩散法测定其抑菌活性和稳定性。结果显示,分离菌是一种枯草芽孢杆菌,命名为枯草芽孢杆菌SXAU18,其可产生抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌生长的细菌素;枯草芽孢杆菌SXAU18所产细菌素可能是分子量为10～20 ku的DarA蛋白和两种未知蛋白,属于类细菌素的范畴,将未知蛋白分别命名为BLIS SXAU181和182;经原核表达的BLIS SXAU181和182主要以可溶性上清蛋白形式表达,纯化后为单一条带;重组BLIS SXAU181蛋白没有抑菌活性,重组BLIS SXAU182蛋白具有良好的抑菌活性,且具有耐高温、耐酸碱、耐人工胃液和肠液的的特性。综上,本研究从枯草芽孢杆菌SXAU18分离到具有抑制革兰阳性菌生长活性的细菌素,且重组表达后的BLIS SXAU18... 相似文献
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有研究证实,霍乱毒素(CT)A1亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果。为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达,将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43中,构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD。将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600中,用IPTG诱导重组菌表达,发酵液离心后取上清液,通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况。发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化,与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平。结果显示：重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达,在发酵罐中发酵36 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小在42 kDa左右,蛋白产量最高能到700μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达。重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠,ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平,说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性... 相似文献
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本试验通过筛选瘤胃环境中具产酶抑菌活性的芽孢杆菌,为开发功能型饲用微生态制剂奠定基础。采用可培养的方法从健康高产奶牛瘤胃液中分离芽孢杆菌,并测定其产酶能力及抑菌活性,同时对筛选到的功能菌株进行生理生化和分子生物学鉴定。结果显示：从健康高产奶牛瘤胃液中筛选出一株芽孢杆菌BX1-12,其产纤维素酶、蛋白酶及α-淀粉酶活力分别为27.33、137.54 U/mL和1450.53 U/100 mL,同时该菌具广谱抑菌效果,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑菌圈直径分别为13.62、23.21 mm和25.97 mm。结合Biolog生理生化实验及16S rRNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。综上,从健康高产奶牛瘤胃液中分离得到的这株枯草芽孢杆菌BX1-12,具有产多种酶活及广谱抑菌的能力,是一株良好的用于奶牛微生态制剂的候选菌株。
[关键词] 奶牛瘤胃液|饲用芽孢杆菌|枯草芽孢杆菌|产酶抑菌活性 相似文献
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为了提高纳豆芽孢杆菌的抑菌活性,筛选出高抑菌活性菌株,试验以纳豆芽孢杆菌BN-3作为始发菌,通过紫外线(UV)和硫酸二乙酯(DES)对其进行复合诱变,得到变异菌株XC-80,并进行营养源优化及发酵条件优化正交试验,使变异菌达到最高的抑菌活性。结果表明:紫外线最佳诱变时间为12 s,硫酸二乙酯最佳涂布浓度为0.3%,复合诱变使纳豆芽孢杆菌抑菌活性提高16.9%;经营养源优化,变异菌株XC-80最适碳源为葡萄糖,最适氮源为胰蛋白胨,最适金属盐为硫酸镁;正交试验得出优化发酵条件为葡萄糖2%,胰蛋白胨0.5%,硫酸镁0.06%,初始pH值7.2,接种量0.5%,培养温度30℃,转数140 r/min,培养时间72 h,抑菌活性较诱变后菌株再次提高25.2%;最终筛选后菌株较始发菌抑菌活性累计提高46.4%。说明复合诱变及发酵条件优化筛选出了具有高抑菌活性的变异菌株XC-80,优化了发酵条件,显著提高了发酵液抑菌活性。 相似文献
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《畜牧与兽医》2017,(8):84-87
为了研究携带鸡白痢沙门菌主要外膜蛋白OmpC基因的重组枯草芽孢杆菌活菌制剂在肉鸡上的免疫原性,以具有益生菌属性的枯草芽孢杆菌作为基因疫苗表达宿主,构建表达鸡白痢沙门菌主要外膜蛋白的枯草芽孢杆菌重组菌(pHT43/WB800n-OmpC)。将重组菌饮水饲喂12日龄艾维茵肉鸡,同时设空白、空转菌及非诱导菌对照组,分别于免疫后27和42日龄测定特异性抗体效价,同时45日龄后采用沙门菌C79-13株腹腔注射攻毒。结果:SDS-PAGE分析显示该重组蛋白大小为37 ku;Western blot分析显示表达蛋白具有很好的反应原性;肉鸡饲喂结果显示,42日龄时血清中检测到特异性抗体,且抗体效价为1∶32;攻毒试验显示重组菌诱导组免疫保护率为76.92%,而对照组、空转菌组、非诱导组保护率分别为23.08%、38.46%和30.77%。结果表明:此重组菌对鸡沙门菌具有免疫保护作用,为沙门菌的免疫机制研究奠定了基础,同时实现了饲用疫苗的双重作用。 相似文献
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蜜蜂抗菌肽Abaecin在枯草杆菌中的分泌表达 总被引：3，自引：0，他引：3
为了在枯草芽孢杆菌中分泌表达具有生物活性的Abaecin,采用重叠延伸PCR方法拼接合成含有编码Abaecin的基因及其相关调控元件的重组表达质粒pGplat.将构建的表达质粒pGplat电击转化至枯草杆菌,筛选正常生长的菌体,摇瓶发酵,取上清液冻干作为样品.通过Western blot试验检测Abaecin在枯草芽孢杆菌中的分泌表达情况.采用琼脂扩散法检测表达产物Abaecin的抑菌活性.Western blot试验结果证实在3.9 ku处有表达产物的目的条带.琼脂扩散法结果证明表达产物Abaecin对大肠杆菌、鸡沙门氏菌等革兰氏阴性菌有抑制活性.试验表明在枯草杆菌中能有效分泌表达具有生物活性的抗菌肽Abaecin.本研究结果为开发全新高效抗生素肽类药物和饲料添加剂提供了理论依据. 相似文献