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有研究证实,霍乱毒素(CT)A1亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果。为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达,将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43中,构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD。将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600中,用IPTG诱导重组菌表达,发酵液离心后取上清液,通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况。发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化,与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平。结果显示：重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达,在发酵罐中发酵36 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小在42 kDa左右,蛋白产量最高能到700μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达。重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠,ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平,说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性... 相似文献
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2005—2006年对庆阳市引进的12个冬小麦新品种（系）进行了田间抗锈性鉴定试验,结果表明,多抗1号、陇鉴99、济麦20号、德引2号高抗小麦条锈病,且抗性稳定,综合性状好,建议在庆阳市南部病害重发区推广种植;益丰98、农大3659、轮抗6号中抗小麦条锈病,应与本地抗锈品种搭配种植。 相似文献
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通江县依托“长治”工程、天然林保护工程、退耕还林工程、扶贫开发和农业综合开发项目等 ,对居住在高山上的农民实施生态移民 ,从组织领导、管理机制、配套政策、配套措施等方面进行了有益探索 ,取得了良好的效果 ,已移民安置 2 2 2 7户 890 6人 相似文献
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深水网箱作为一种新的网箱养鱼模式,近年来发展快速。但由于海区附着生物的大量附着,不同程度地会造成网箱网衣堵塞,一方面使得网箱内的水交换减少,养殖环境变差,导致疾病多发;另一方面,也使得网箱网衣的阻力增大,造成漂移和磨损,导致网箱的使用寿命缩短。通常传统养殖小型网箱一般采用换网、清洗等机械方法清除附着物,但因劳动强度高、人力物力消耗大,很难适合深水网箱养殖管理的要求。网衣污损已成为深水网箱养殖管理中急需解决的一大难点。作为国家“十五”科技攻关《东海区深水抗风浪网箱养殖技术与设施开发》专题的研究内容,课题组… 相似文献
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深水网箱网衣防污剂筛选试验 总被引：5，自引：1，他引：5
深水网箱作为一种新的网箱养鱼模式,近年来发展快速。但由于海区附着生物的大量附着,不同程度地会造成网箱网衣堵塞,一方面使得网箱内的水交换减少,养殖环境变差,导致疾病多发;另一方面,也使得网箱网衣的阻力增大,造成漂移和磨损,导致网箱的使用寿命缩短。通常传统养殖小型网箱一般采用换网、清洗等机械方法清除附着物,但因劳动强度高、人力物力消耗大,很难适合深水网箱养殖管理的要求。网衣污损已成为深水网箱养殖管理中急需解决的一大难点。作为国家“十五”科技攻关《东海区深水抗风浪网箱养殖技术与设施开发》专题的研究内容,课题组… 相似文献
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采用毕赤酵母表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白免疫BALB/c小鼠，经间接免疫荧光(IFA)筛选，获得了17株特异性单抗。经病毒中和试验(VNT)验证，上述单抗均具有CSFV中和活性，其中单克隆抗体3H9的病毒中和效价最高，大于1∶10 240。采用HRP标记的CSFV单抗3H9为阻断抗体，配合酵母表达的CSFV E2蛋白作为包被抗原，建立了一种用于检测猪血清中CSFV中和抗体的阻断ELISA方法。该方法优化后的抗原包被浓度为0.5μg/mL,阻断抗体稀释度为1∶8 000。通过对100份阴性猪血清的检测，确定该方法的阻断率cut-off值为30%。该方法敏感性高，对中和抗体效价低至1∶16的血清检测仍呈阳性；特异性强，仅与CSFV抗体阳性猪血清呈阳性反应，与其他猪病病毒及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗体阳性猪血清均呈阴性反应；良好的可重复性，批内、批间变异系数分别为0.90%～3.21%、1.89%～6.57%,均小于10%。对188份现有猪血清检测结果显示，该方法与病毒中和试验和IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合率分别为96.3%、94.7%。用该方法对南京市浦口区某养殖场... 相似文献
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为开发一种新型高效、低成本的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)抗原纯化方法，本研究尝试了一种基于凝集素(刀豆蛋白A，Con A)的PEDV浓缩纯化方法。通过Con A与PEDV病毒粒子的特异性结合，形成Con A-PEDV复合物，然后通过低速离心和竞争性解离即可实现病毒纯化。结果表明:1)当Con A的使用浓度为80 μg/mL，室温作用2 h，4 000 r/min离心15 min时，纯化效果较佳；2)利用Tris-HCl缓冲液(pH 7，0.01 mol/L，内含200 mmol/L甲基-α-D-吡喃甘露糖苷和50 mmol/L NaCl)进行解离时，较PBS缓冲液有更高的解离效率；3)该方法病毒回收率大约为80%，总蛋白去除率可达90%。综上，本研究利用Con A纯化PEDV是可行的，为高质量PEDV灭活疫苗的研发奠定基础。 相似文献
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为建立评价猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗免疫效力的方法，本研究利用纯化的PEDV免疫BALB/c小鼠，按照常规方法制备PEDV全病毒单克隆抗体(MAb)作为捕获抗体，PEDV细胞培养上清为夹心抗原，HRP标记的羊抗猪IgA为二抗，采用棋盘滴定法对各反应条件优化后建立了用于猪初乳中PEDV IgA检测的捕获ELISA方法，并确定其临界值为0.25。采用该捕获ELISA对PEDV、PCV2b、PRRSV、PRV、JEV、PPV、FMDV与CSFV IgA抗体阳性猪初乳进行检测，结果显示，除PEDV IgA抗体阳性猪初乳检测结果为阳性外，其他病毒抗体阳性猪初乳检测结果均为阴性，表明该方法特异性强。采用该方法和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对从1∶10开始2倍倍比稀释的16个稀释度的阳性猪初乳样品检测，结果显示该方法对阳性样品检测的最大稀释度为1∶40 960，是BIONOTE PEDV IgA试剂盒敏感性的16倍(1∶2 560)，表明本研究建立方法的敏感性高。分别采用同一批次和不同批次制备的MAb包被的ELISA板分别检测5份PEDV IgA抗体阳性和1份PEDV IgA抗体阴性... 相似文献
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