规模猪场疫病风险评估技术应用模式构建     

谭业平  刘强  胡肄农  郁达威  何孔旺  陆昌华 《农业科学与技术》2016,(9):2124-2126

从疫病风险因素识别、风险评估模型构建以及风险评估系统开发等方面,阐述了基于Web的规模猪场疫病风险评估技术应用模式.被评估猪场通过在线回答评估问卷上传疫病风险数据信息获得即时评估报告.该模式可增进猪场兽医、管理者与兽医专家之间的风险交流,帮助猪场系统认识和查找疫病风险因素,评估和报告猪场在工程防疫、生物安全、免疫监测三大体系中潜在高风险项,促进疫病防控措施改进和完善.  相似文献   

SYBR Green I实时定量PCR方法检测2型猪圆环病毒     

潘群兴  何孔旺  黄克和 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(3):13-17

利用PCR技术扩增出2型猪圆环病毒(PCV)ORF2保守区基因107 bp片段,并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR,并绘制标准曲线。再以提取的PCV-2、PCV-1、猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的DNA作为模板,采用同样体系进行实时PCR检测。结果表明:建立的实时定量PCR方法,起始模板浓度与样本阈值循环数(Ct)值之间呈很好的线性关系,标准曲线斜率为-0.32,相关系数r2为0.997,Ct值为11.9~26.9。PCV-2能扩出S型荧光曲线,熔解曲线的峰狭窄单一,而PCV-1、PPV和PRV均不能扩出。对32份健康猪和32份断奶仔猪多系统消耗综合征(PMWS)可疑猪样品定量检测:健康猪阳性率为44%(14/32),病毒载量均小于104拷贝.μL-1;PMWS可疑猪阳性率96.8%(31/32),病毒载量均大于105拷贝.μL-1。实时荧光定量PCR方法可用于2型猪圆环病毒定性及定量的检测。  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅳ部分基因片段的体外表达与初步应用     

彭小华  何孔旺  陆承平 《农业生物技术学报》2005,13(5):608-611

参照GenBank中的猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropeumoniae，App）血清1和3型菌株序列设计了1对特异性引物，用PCR方法扩增毒素Ⅳ（ApxⅣ）基因3’端1096bp的目的片段，然后克隆到pMD 18-T载体中，转入大肠杆菌（Eschetichia coli）的宿主菌DH5a中，提取阳性克隆质粒进行双酶切和测序鉴定，将T-载体中切下目的片段定向克隆到pET32a（＋）中，转入E．coli BL2I（DE3），经IPTG诱导可表达分子量约60kD的蛋白，免疫转印鉴定呈阳性，ApxⅣ基因体外成功表达。以纯化的表达产物包被ELISA板，初步检测了一些血清样品，结果预示表达的蛋白可用于区分灭活疫苗免疫和野毒感染。  相似文献   

类猪圆环病毒 P1的感染及其分子特征     

温立斌  何孔旺  王凤芝  俞正玉  茅爱华  解建平 《华北农学报》2013,(5)

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99．1％～100％,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。  相似文献   

快速检测大肠杆菌O157的LAMP方法的建立与评价   总被引：1，自引：0，他引：1  

张雪寒  何孔旺  叶青  倪艳秀  温立斌  李彬  王小敏  周俊明  郭容利 《中国兽医学报》2013,33(7)

利用DNA环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以rfbE基因为靶序列,设计LAMP引物,建立LAMP反应体系与条件,进行灵敏度和特异性试验.结果显示,整个检测过程仅需1h即可通过肉眼直接目测试验结果.在灵敏度试验中,rfbE-LAMP对O157菌液和模拟阳性样品的最低检测限分别为1CFU/mL和1 CFU/g.在特异性试验中,以其他血清型大肠杆菌以及沙门杆菌基因组DNA为模板对rfbE基因进行检测,均没有发生非特异性扩增反应.试验建立的LAMP检测方法具有操作简单安全、检测灵敏度高、特异性高的特点,能够满足基层实验室、应急检测或现场监测等方面的使用需求.  相似文献   

从山羊持续性腹泻病例中分离到边界病病毒(BDV)     

李文良  毛立  张纹纹  张则斌  赵永前  何孔旺  江杰元 《江苏农业学报》2013,(1):222-224

边界病(Border disease)是由边界病病毒(Border disease virus,BDV)引起的以新生羔羊发生震颤和被毛异常为特征的一种疾病,最早发现于英格兰与威尔士边界地区,故名。该病在临床上以繁殖障碍和羔羊畸形为特征,如不孕、流产、死产、产出弱小胎儿、羔羊先天震颤、骨骼异常和多毛[1]。与  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅱ蛋白的间接ELISA检测     

谢碧林  李超美  王芳  宋艳华  何孔旺 《江苏农业科学》2013,41(1):40-42

为了建立快速检测猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropeumoniae)抗体的间接ELISA方法,将质粒pET-rApxⅡ转化至BL21,IPTG诱导表达毒素rApxⅡ融合蛋白,经亲和层析纯化后的蛋白作为检测抗原.对ELISA各检测条件进行优化,结果显示,抗原最适包被浓度为10 μg/mL,血清最佳稀释度为1:80.用建立的ELISA方法对猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、猪副嗜血杆菌、大肠杆菌阳性血清进行检测,均无交叉反应.利用建立的ELISA方法从172份临床血清样本中检测出84份阳性血清样本,而利用Cps-ELISA试剂盒检测到74份阳性样品,本方法检测总符合率达83％.  相似文献   

六种中药生物碱对LPS作用下猪血管内皮细胞分泌细胞因子的影响     

胡屹屹  何孔旺  王小敏 《北京农学院学报》2011,26(3):41-43

通过研究6种中药生物碱对细菌内毒素（LPS）作用下猪血管内皮细胞分泌细胞因子血栓素B2（TXB2）,内皮素-1（ET-1）和E-选择素（E-selectin）的影响,拟探讨生物碱抗LPS的药理作用机制。培养猪血管内皮细胞至单层融合状态,加入LPS刺激,3 h后加入高、中、低3种浓度的6种中药生物碱青藤碱、防己诺林碱、水苏碱、川芎嗪、苦参碱和吴茱萸碱,继续培养21 h后收集细胞上清液,用ELISA测定TXB2,ET-1和E-selectin的含量。结果,水苏碱高剂量组和川芎嗪高剂量组的TXB2含量极显著低于LPS对照组,川芎嗪中剂量组和吴茱萸碱高剂量组显著低于LPS对照组;苦参碱高剂量组的ET-1含量极显著低于LPS对照组,青藤碱高剂量组显著低于LPS对照组;防己诺林碱高剂量组和吴茱萸碱中剂量组的E-selectin含量显著低于LPS对照组。结果提示六种中药生物碱具有明显的抗细菌内毒素作用,可在由TXB2,ET-1和E-selectin介导的机体凝血、休克和炎症等病理损伤过程中发挥治疗作用。  相似文献   

猪传染性胃肠炎病毒S蛋白主要抗原位点在昆虫细胞中的表达     

李菁  何孔旺  杨倩 《南京农业大学学报》2009,32(1)

用RT-PCR方法扩增届猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点A、D,将其亚克隆至供体质粒pFastBacl,得到重组转移质粒pFastBael-TS1,转化到Escherichia coli DH5α中,提取阳性克隆质粒再转化到含穿梭载体bacmid的E.coliDHl0Bac中,发生转座作用,经蓝白斑筛选得到重组穿梭载体Bacmid-TS1,经PCR鉴定后再转染Sf9昆虫细胞,经空斑筛选得到纯化的重组病毒rAcV-Bac-FS1,经1FA、SDS-PAGE和Western-blot鉴定,重组杆状病毒TS1蛋白(相对分子质量约43 000) 在Sf9昆虫细胞中得到表达.  相似文献   

白介素2基因与猪圆环病毒2型ORF_2基因真核双表达质粒的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

潘群兴  何孔旺  温立斌  郭容利  黄克和 《南京农业大学学报》2009,32(1)

应用基因重组技术,构建猪圆环病毒2型ORF2基因与白介素2基因(IL-2) 的真核双表达载体并将其转染CHO细胞,通过RT-PCR、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光检测(IFA) 等方法验证基因的表达情况.结果表明:成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因和IL-2基凶的真核双表达质粒pIRES-ORF2-IL-2,该质粒可在体外同时表达ORF2和IL-2.  相似文献